耐藥相關(guān)蛋白在乳腺癌組織病理中的表達(dá)

孫海濤 王偉 張藝

乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤之一，在美國(guó)乳腺癌的發(fā)病率僅次于肺癌［1］?；熓桥R床上綜合性治療乳腺癌的重要部分，腫瘤的耐藥性成為影響腫瘤化療效果不佳的重要原因，近年來，人們對(duì)乳腺癌耐藥機(jī)制進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的耐藥基因，如HER-2，MGMT，GST-π，P-gp，TopⅡ等及乳腺癌組織耐藥性相關(guān)蛋白過表達(dá)，包括P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)、肺耐藥蛋白(LRP)等。本研究探討乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白P-gp、BCRP、LRP在乳腺癌組織中的表達(dá)、相關(guān)性及與臨床病理的關(guān)系，為乳腺癌的治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年2月～2011年2月來北京安貞醫(yī)院病理科有完整病歷資料及分期的乳腺癌標(biāo)本35例，癌旁組織標(biāo)本26例，并以遠(yuǎn)離腫塊5～7 cm正常乳腺組織標(biāo)本10例作對(duì)照，所有標(biāo)本經(jīng)病理確診，年齡28～70歲，平均45.3歲。

1.2 方法 本研究所有組織標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，采用福州邁新公司生產(chǎn)的S-P即用型試劑盒，按說明書進(jìn)行操作。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)［2］有經(jīng)驗(yàn)的病理科專家采用雙盲法進(jìn)行評(píng)估。(1)陽性標(biāo)準(zhǔn):BCRP陽性指細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒;P-gp、LRP陽性:細(xì)胞膜/胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。(2)陽性細(xì)胞分布標(biāo)準(zhǔn):隨機(jī)檢查10個(gè)高倍視野，陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)估，＜10%為陰性(-)，＜25%為弱陽性(±)，25%～50%為陽性(+)，51% ～75%為強(qiáng)陽性(++)，＞75%為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有免疫組化結(jié)果采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Sperman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，差異顯著性;P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，沒有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 耐藥蛋白在乳腺癌及癌旁組織中的表達(dá) 耐藥蛋白P-gp、BCRP和 LRP在乳腺癌陽性表達(dá)率分別為 48.6%、57.1%、60%，三種耐藥蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)均高于癌旁組織中的表達(dá)，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，差異顯著性。見表1。

表1 三種耐藥蛋白在乳腺癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)(例，%)

2.2 耐藥蛋白在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性35例乳腺癌組織中比較 P-gp、BCRP、LRP三種耐藥蛋白表達(dá)的相關(guān)性，Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，乳腺癌組織中P-gp和BCRP表達(dá)具有正相關(guān)性(r=3.136，P＜0.05);P-gp與LRP表達(dá)低度相關(guān)性(r=1.013，P＞0.05);BCRP與LRP表達(dá)無相關(guān)性(r=0.230，P＞0.05)。詳見表2。

表2 三種耐藥蛋白乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性(例)

2.3 耐藥蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系在35例乳腺癌組織中，P-gp、BCRP、LRP的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系比較發(fā)現(xiàn)P-gp的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤組織分級(jí)有關(guān)，P＜0.05，有顯著差異，而與患者的年齡無關(guān);LRP的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分級(jí)有關(guān)，P＜0.05，有顯著差異，而與患者的年齡無關(guān);BCRP的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)均無顯著關(guān)系。詳見表3。

表3 三種耐藥蛋白的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系(例)

3 討論

3.1 P-gp在乳腺癌中的表達(dá)意義 P-糖蛋白(P-gp)是MDR1的基因產(chǎn)物，是一種能量依賴性跨膜糖蛋白，其生物活性具有膜的藥泵作用，將腫瘤細(xì)胞內(nèi)的化療藥物轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗癌藥物蓄積減少或完全消失而產(chǎn)生耐藥［3］。本研究發(fā)現(xiàn)P-gp在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁組織中的表達(dá)，為48.6%。正常乳腺組織中P-gp蛋白幾乎不表達(dá)，P-gp彌漫分布于乳腺癌組織的細(xì)胞漿及細(xì)胞膜上。P-gp的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤組織分級(jí)有關(guān)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中P-gp的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例，臨床Ⅱ-Ⅲ期P-gp陽性表達(dá)顯著高于臨床Ⅰ期，這與王振國(guó)［4］、孫麗梅［5］等的研究一致。故認(rèn)為 P-gp的過表達(dá)與腫瘤的大小、轉(zhuǎn)移、分級(jí)有密切關(guān)系，推測(cè)其影響乳腺癌化療敏感性、療效及預(yù)后。

3.2 BCRP在乳腺癌中的表達(dá)意義 乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)是1998年Dolyle等［6］應(yīng)用mRNA指紋技術(shù)分離出一種新的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，屬于ATP依賴性膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。BCRP在人體正常和腫瘤組織中的功能仍不清楚，可能與這些器官的外排及分泌功能有關(guān)。本研究中在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)均高于癌旁組織中的表達(dá)，為57.1%，而BCRP的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)均無顯著關(guān)系。楊成等［7］運(yùn)用 RNA干擾技術(shù)抑制 MCF-7/ADR細(xì)胞中BCRP表達(dá)，提高M(jìn)CF-7/ADR對(duì)阿霉素的敏感性。新生霉素能競(jìng)爭(zhēng)性地抑制BCRP介導(dǎo)的拓?fù)涮婵档霓D(zhuǎn)運(yùn)，適當(dāng)濃度的新生霉素能夠逆轉(zhuǎn)BCRP介導(dǎo)的耐藥［8］。

3.3 LRP在乳腺癌中的表達(dá)意義 肺耐藥蛋白(LRP)是人類穹窿蛋白的主要內(nèi)容物，其耐藥機(jī)制是能將抗癌藥轉(zhuǎn)運(yùn)入胞質(zhì)囊泡中，通過胞吐作用排出細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，最終產(chǎn)生耐藥［9］。本研究LRP在乳腺癌陽性表達(dá)率為60%，明顯高于癌旁組織中的表達(dá)。LRP在乳腺組織中的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分級(jí)有關(guān)，而與患者的年齡無關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中LRP陽性率高，分期高的乳腺癌組織中LRP陽性表達(dá)率高，這與曲延剛等［10］采用免疫組化SABC法，對(duì)80例乳腺癌的耐藥指標(biāo)LRP等進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果一致。說明LRP與乳腺癌細(xì)胞的耐藥、增殖、轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，可以預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞的耐藥程度，為臨床上制定化療方案提供依據(jù)。

［1］ NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology-v.2.2009.

［2］ 劉新蘭，崔潔，陳萍.腫瘤耐藥相關(guān)標(biāo)志物在乳腺癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2010，39(12):1592-1595.

［3］ 張孝堂，陳筠.P糖蛋白的介導(dǎo)的多藥耐藥及其逆轉(zhuǎn)的研究進(jìn)展.山西醫(yī)藥，2007，36(11):1005-1007.

［4］ 王振國(guó)，陳惠慶，張少云，等.乳腺組織中MDR21基因檢測(cè)與臨床分析.腫瘤研究與臨床，1999，11(2):89-90.

［5］ 孫麗梅，王魯建，宋敏，等.乳腺癌中耐藥蛋白 P-gp、GST-π、Top-Ⅱ的表達(dá).中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2006，15(2)，169.

［6］ Doyle LA，Yang W，Abruzzo LV，et al.Amultidrug transporter from humanMCF-7 breast cancer cells.ProcNatlSciUSA，1998，95(26):15665-15670.

［7］ 楊成，印國(guó)兵，龔驪，等.RNAi抑制乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞乳腺癌耐藥蛋白基因研究.免疫學(xué)雜志，2008，24(3):304-307.

［8］ ShiozawaK，OkaM，SodaH，etal.Reversal ofbreast cancer resistance protein(BCRP/ABCG2)mediated drug resistance by novobiocin，a coumermycin antibiotic.Int J Cancer，2004，108(1):146-151.

［9］ 李醒.肺耐藥蛋白與肺腫瘤多藥耐藥的研究進(jìn)展.保健醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2008，5(1):74-76.

［10］ 曲延剛，唐愛萍，綦瑤.乳腺癌中LRP、GST-π、TOPOⅡ的表達(dá)及臨床意義中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué)，2005，18(3):195-197.