IMP-3在不同病變子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)及臨床意義

楊清，畢芳芳，劉冬玲

1.中國醫(yī)科大學(xué) 附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 沈陽 110004；2.北京市大興區(qū)紅星醫(yī)院 婦產(chǎn)科，北京 100076

子宮內(nèi)膜癌是女性最常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率不斷上升，與許多因素有關(guān)，如遺傳、體質(zhì)因素、長期雌激素刺激等，但其發(fā)生的分子機(jī)制尚不清楚[1-2]。近期研究表明，子宮內(nèi)膜間質(zhì)和腺上皮細(xì)胞合成和表達(dá)的胰島素樣生長因子（in?sulin-like growth factor，IGF）家族可能在類固醇激素的作用下參與子宮內(nèi)膜的增生和分化改變，調(diào)節(jié)癌變過程[3]。IGF-ⅡmRNA結(jié)合蛋白Ⅲ（IGF-ⅡmRNA-binding proteinⅢ，IMP-3）是 IGF-Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白家族的主要成員（其家族還包括IMP-1和IMP-2），與其他2個(gè)成員的功能不同且與多種腫瘤的發(fā)生關(guān)系最為密切。正常情況下，IMP-3主要在胚胎時(shí)期表達(dá)，在正常成人組織中的表達(dá)極少或已不存在[4]。1996年，IMP-3基因首先在胰腺癌中被發(fā)現(xiàn)。研究表明，在多種腫瘤如胰腺癌、宮頸癌、睪丸癌、胃癌、肝癌等中可檢測到高水平的IMP-3[5-8]，因此IMP-3被認(rèn)為是一種癌胚蛋白，與腫瘤的發(fā)生有關(guān)[9]，但其在子宮內(nèi)膜病變發(fā)生過程中的作用機(jī)制尚不清楚。我們檢測了正常子宮內(nèi)膜、非典型增生內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中IMP-3的表達(dá)變化，期待能為子宮內(nèi)膜癌癌變過程中的生化改變提供新的啟示，為臨床子宮內(nèi)膜癌的早期診斷和治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集和處理

收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院2005～2008年經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的子宮內(nèi)膜腺癌標(biāo)本40例，年齡35～65歲，平均42±0.7歲；非典型增生10例（由于本實(shí)驗(yàn)預(yù)研究的指標(biāo)為非雌激素依賴性因子，故標(biāo)本選取30～60歲不同年齡段患者手術(shù)病理標(biāo)本），平均年齡41±0.3歲；選取同期因子宮頸上皮非典型增生（CIN）Ⅲ切除子宮的正常增殖期子宮內(nèi)膜組織20例為對(duì)照組，年齡33～58歲，平均40±0.8歲；3組患者年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。所有標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診，所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或激素治療。

子宮內(nèi)膜癌組按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2009年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行手術(shù)病理分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期6例，Ⅲ期17例；組織學(xué)病理分級(jí)按世界衛(wèi)生組織（WHO）標(biāo)準(zhǔn)：高分化組18例，中分化組12例，低分化組10例。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人IMP-3單克隆抗體、多克隆羊抗兔SP二抗試劑盒和DAB顯色試劑盒購自北京博奧森公司。

1.3 免疫組化實(shí)驗(yàn)方法

常規(guī)甲醛固定，石蠟包埋4 μm連續(xù)切片；脫蠟水化后行熱抗原修復(fù)，根據(jù)試劑盒說明行SP法免疫組化染色，DAB顯色；用已知的IMP-3陽性的乳腺癌組織為陽性對(duì)照，PBS代替一抗為陰性對(duì)照。

首先用光電顯微鏡（Olympus BX50）低倍鏡（×100）觀察整個(gè)切片，然后隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400）照相。雙盲閱片，結(jié)果分析時(shí)首先計(jì)數(shù)每個(gè)視野中的陽性細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算陽性率，然后用圖像分析儀對(duì)視野中的陽性細(xì)胞百分面積及強(qiáng)度進(jìn)行檢測，得出平均光密度值（IOD），以IOD值表示IMP-3蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以x±s表示，計(jì)數(shù)資料用率表示，兩組率的比較用卡方檢驗(yàn)，兩組均數(shù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IMP-3在正常子宮內(nèi)膜、非典型增生內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

免疫組化染色結(jié)果顯示IMP-3定位于胞漿，在正常子宮內(nèi)膜中IMP-3幾乎不著色，在非典型增生子宮內(nèi)膜中呈黃色，而在子宮內(nèi)膜癌組織中胞漿呈棕黃色（圖1）。IMP-3在正常子宮內(nèi)膜中的陽性率為15%，相對(duì)表達(dá)量為5.361±1.074；在非典型增生組織中陽性率為60%，相對(duì)表達(dá)量為13.587±2.301；在子宮內(nèi)膜癌組織中陽性率為80%，相對(duì)表達(dá)量為19.572±1.936。IMP-3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯高于非典型增生及正常內(nèi)膜組織，在非典型增生組織中的表達(dá)量明顯高于正常內(nèi)膜組織，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異有顯著性（χ2=23.23，P＜0.05）（圖2）。

2.2 IMP-3的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期及病理分級(jí)的關(guān)系

在子宮內(nèi)膜腺癌組織中，Ⅰ期腺癌與Ⅱ、Ⅲ期的IMP-3 mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量均有顯著性差異（P＜0.05），而Ⅱ、Ⅲ期相比差別不明顯（P＞0.05）。在不同組織學(xué)分級(jí)的子宮內(nèi)膜癌中，G1組分別與G2和G3組相比，IMP-3的mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均有顯著性差異（P＜0.05），而G2和G3組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。＜1/2肌層浸潤組和≥1/2肌層浸潤組相比，mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均有顯著性差異（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的差異不明顯（P＞0.05）。參見表1。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌作為嚴(yán)重威脅婦女生命健康的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且其發(fā)生機(jī)制目前尚不明確，可能與多種因素有關(guān)[2]。許多研究表明，信號(hào)傳導(dǎo)通路在內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。其中，PI3K/AKT及RAS/MAPK信號(hào)通路是膜受體信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)的重要途徑，它們均可被多種細(xì)胞外信號(hào)激活，參與細(xì)胞增殖、分化的調(diào)節(jié)及細(xì)胞凋亡，與內(nèi)膜癌的發(fā)生關(guān)系密切[10-11]。

圖1 IMP-3在不同病變子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)（SP，×100）

圖2 IMP-3在不同病變子宮內(nèi)膜組織中的相對(duì)表達(dá)量

表1 IMP-3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與手術(shù)分期和病理分級(jí)之間的關(guān)系

IMP-3是IGF-Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白家族的主要成員[9]，相對(duì)分子質(zhì)量約64×103，由580個(gè)氨基酸殘基組成。IMP-3主要在胚胎時(shí)期表達(dá)，在正常成人組織中表達(dá)非常少或已不存在，主要參與胚胎形成時(shí)期多種生物學(xué)過程，如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、翻譯控制等[4]。在多種腫瘤如胰腺癌、軟組織癌、結(jié)腸癌、橫紋肌肉瘤及非白血性白血病細(xì)胞系中可檢測到高水平表達(dá)的IMP-3 mRNA，因此IMP-3被認(rèn)為是一種癌胚蛋白，與腫瘤發(fā)生有關(guān)，可能作為潛在的診斷或預(yù)后分子標(biāo)志物[5-9]。有研究表明，214例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中，IMP-3陽性表達(dá)31例，并有研究提示IMP-3與乳腺癌的進(jìn)展和惡性度相關(guān)，可能作為三陰性乳腺癌的一個(gè)輔助診斷指標(biāo)[10]。但I(xiàn)MP-3作為診斷肝癌的標(biāo)志物的特異性和敏感性偏低[8]。在癌癥發(fā)生過程中，IMP-3作用于IGF-Ⅱ，激活PI3K/AKT及RAS/MAPK通路，細(xì)胞間黏附降低、細(xì)胞游走性增加，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解，腫瘤轉(zhuǎn)移增加[4]。

我們?cè)谡Ｗ訉m內(nèi)膜組織、非典型增生內(nèi)膜組織、內(nèi)膜癌組織中檢測了IMP-3的表達(dá)。結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中IMP-3表達(dá)的陽性率達(dá)80%，明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織及非典型增生內(nèi)膜組織，其中Ⅰ期癌組織中表達(dá)水平較低，而在Ⅱ、Ⅲ期表達(dá)水平增高，說明IMP-3可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生過程的中晚期起重要作用。在不同分級(jí)的癌組織中，分化程度越低，IMP-3表達(dá)水平越高，說明IMP-3可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移和游走有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)IMP-3在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌早期發(fā)展過程中發(fā)揮癌基因的作用，但其具體作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

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