紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量

鄧 偉，李新建，田小林，王 沛*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量

鄧 偉1，李新建1，田小林2，王 沛2*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

目的：建立淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。方法：采用紫外分光光度法測定淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量。以甲醇作空白對照，檢測波長：270 nm。結(jié)果：淫羊藿苷量在0.048～0.40 mg范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，平均回收率為98.88%，RSD為2.87%。結(jié)論：本方法簡便可行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。

紫外分光光度法；淫羊藿顆粒；淫羊藿苷；含量測定

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbreviconumMaxim.的干燥地上部分, 始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、助陽益精和祛風(fēng)濕功效，并有抑制脊髓灰質(zhì)病毒、降血壓、增加冠脈流量和防治骨質(zhì)疏松[1-2]等多種藥理作用。臨床主要用于治療陽痿、腰膝痿弱、風(fēng)寒濕痹、四肢麻木及股骨頭壞死等癥。淫羊藿的主要有效成份是淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷、淫羊藿次苷)和淫羊藿多糖等[3]為了有效的控制淫羊藿顆粒的質(zhì)量，筆者選取了其中主要藥效成分，也是含量較高的淫羊藿苷作為監(jiān)控指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 材料 淫羊藿飲片購自長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鑒定教研室肖寄平老師鑒定確系小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornumMaxim.的干燥地上部分，屬《中華人民共和國藥典》2010版所載正品;淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號11788-201002)；甲醇為色譜純(北京化工廠)，其余化學(xué)試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器 UV-9100紫外分光光度儀(北京瑞利分析儀器公司)，電子天平AL204(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司),循環(huán)水多用真空泵SHZ-型(上海滬西分析儀器廠有限公司)。

1.3 對照品(標(biāo)準(zhǔn)品)溶液的制備 精確稱取經(jīng)80 ℃干燥至恒重的淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品4.0 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，既得(每1 mL中含淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品0.16 mg)。

1.4 樣品溶液的制備 取淫羊藿顆粒適量，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，加70%乙醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，靜置過夜，過濾。再用乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯層。最后用甲醇溶解所得稠膏轉(zhuǎn)溶于25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，制成每1 mL中約含樣品25 mg的溶液，搖勻，用0.45 μm微膜濾過，取濾液，作為樣品供試品。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 最大吸收波長的選擇 分別吸取淫羊藿標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液和色譜純甲醇溶液適量,于紫外分光光度儀上從λ=200～700 nm進(jìn)行掃描。標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液在λ=270 nm處均有最大吸收，色譜純甲醇溶液在λ=270 nm處沒有吸收，所以確定測定最大吸收波長為λ=270 nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確吸取1.3項(xiàng)下淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.3，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL置于25 mL容量瓶中，定容至刻度,用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處,以甲醇為空白對照分別測其吸光值。以淫羊藿苷量(X)對吸收度值(A)進(jìn)行線性回歸。

由數(shù)據(jù)得線性回歸方程為:Y=1.419 1X-0.047 7(r=0.999 9)。淫羊藿標(biāo)準(zhǔn)品在0.048～0.400 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密量取1.3項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0 mL，6份,分別置于25 mL容量瓶中，定容至刻度，用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處，以甲醇為空白對照分別測其吸光值，取平均值，計(jì)算RSD=0.28%，表明儀器精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取1.4項(xiàng)下方法制備的同一樣品溶液，室溫(25 ℃)放置,用UV-9100紫外分光光度儀在270 nm處,以色譜甲醇為空白對照，每隔20 min 測1次其吸光值。數(shù)據(jù)結(jié)果表明:在2 h內(nèi)淫羊藿苷含量穩(wěn)定，計(jì)算RSD=1.26%，不影響測定結(jié)果。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn) 采取加樣回收法，精密稱取已知淫羊藿苷含量(高、中、低3個(gè)濃度)的樣品6份，再精密添加淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品，按1.4項(xiàng)下方法制備樣品溶液，室溫(25 ℃)放置。以色譜甲醇為空白對照，在λ=270 nm處測定吸光度值(結(jié)果見表1)。計(jì)算得平均回收率為98.88%，RSD值為2.87%。

2.6 樣品含量測定 取淫羊藿顆粒成品6批，按1.4項(xiàng)下方法制成樣品溶液,依照上述色譜測定條件測定,根據(jù)外標(biāo)法測定計(jì)算淫羊藿顆粒中的淫羊藿苷含量。6批淫羊藿顆粒成品的紫外吸收度分別為：0.476、0.467、0.477、0.456、0.466、0.474；含量分別是：0.369 037、0.362 695、0.369 741、0.354 943、0.361 990、0.367 627 mg/粒,均值0.364 339 mg/粒；標(biāo)示量誤差為：96.64、100.45、98.53、102.64、100.64、99.11，符合該新藥研發(fā)所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

表1 回收實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

3 討論

3.1 供試品溶液制備的溶劑選擇 由于本制劑屬于中藥制劑，成分比較復(fù)雜，考慮到在含量測定時(shí)雜質(zhì)的干擾，對樣品的溶解度進(jìn)行了測定試驗(yàn)。按《中國藥典》2010年版一部凡例的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，對供試和淫羊藿苷對照品進(jìn)行了溶解測定考察，通過使用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、苯、氯仿等試劑進(jìn)行比較，結(jié)果使用甲醇溶解制成最終待測樣品的效果最佳。

3.2 色譜條件的選擇 本測定方法采用的色譜條件為λ=270 nm處測定吸收度。原因在于淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液和色譜純甲醇溶液，在該波長處均有最大吸收，作為溶媒的色譜純甲醇溶液在此波長處沒有吸收(較好地排除了干擾)，所以確定測定吸收波長為λ=270 nm。測量結(jié)果好。

3.3 測定結(jié)果 本方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為淫羊藿顆粒中淫羊藿苷的含量測定方法。

[1]李青南,廖進(jìn)民,吳鐵,等.淫羊藿防治羥基脲所致雄大鼠骨質(zhì)疏松的定量研究[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,1996,4(3):1.

[2]李青南,廖進(jìn)民,吳鐵,等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥學(xué)雜志,1996,31(8):647.

[3]王文龍,顧雪竹,李雪婷,等.淫羊藿提取工藝優(yōu)化研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(2):163-164.

ContentDeterminationoftheIcariininEpimediumBreviconumGrainbyUV

DENG Wei1,LI Xin-jian1,TIAN Xiao-lin2,WANG Pei2*

(1.Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130021;2.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Jilin Changchun 130117)

ObjectiveTo establish a method for determing Icariin in Epimedium breviconum Grain.MethodsUV deternination of Icariin in Epimedium breviconum Grain.Using methanol as blank control,detection wavelength:270 nm.ResultsIcariin in 0.048～0.400 mg Range and absorbance was linear regression,r=0.999 9,the average recovery was 98.88%,RSD 2.87%.ConclusionThe method is simple and reproducible for the determination of Icariin in Epimedium breviconum Grain by UV.

UV;Epimedium breviconum Grain;Icariin;Determination

R284.2

A

1003-5699(2013)01-0072-02

2012-10-19)

吉林省科技廳科技支撐項(xiàng)目(編號:20090926)。

鄧 偉(1981-)，男，碩士，講師。研究方向：骨傷臨床與藥物研究。

*通信作者：王 沛,Tel:0431-86045206,E-mail:Wapa1988@163.com。