左旋肉堿的合成與應用

向忠權，蒲國榮，韋志明，孫果宋，陳小鵬

(1.廣西大學化學化工學院，廣西 南寧 530004；2.廣西化工研究院，廣西 南寧 530001)

左旋肉堿也叫左旋肉毒堿﹑左卡尼汀，是一種營養(yǎng)﹑醫(yī)藥型精細化學品，極易吸潮。左旋肉堿的營養(yǎng)價值和醫(yī)用價值以及良好的市場前景，吸引了世界各國科學家對其進行廣泛和深入的研究。1905 年，俄國化學家Gulewitsch 和Krimberg 在肉浸汁中發(fā)現(xiàn)肉堿；1927 年，Tomi 和Sendju 確定其化學結構為L-3-羥基 -4-三甲銨基丁酸；1947 年，F(xiàn)raenkel 用炭分離酵母液時發(fā)現(xiàn)一種能影響昆蟲生長的化學物質，并命名為維生素Bt；1952 年，美國伊利洛斯州立大學的Carter 等人確證維生素Bt 即是左旋肉堿。1953 年Fritz 發(fā)現(xiàn)左旋肉堿能加速細胞對脂肪的消耗作用。1958 年芝加哥國際營養(yǎng)會議將其劃為特定條件下必需的營養(yǎng)素。20 世紀80 年代肉堿開始作為商品在國外上市，由于右旋肉堿的毒副作用，1993 年起美國FDA 禁止銷售右旋肉堿和混旋肉堿。1996 年我國第16 次食品添加劑標準化技術委員會通過決議，允許飲料﹑乳飲料﹑餅干和固體飲料中添加左旋肉堿[1]。2010 年3 月16 日中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布年第4 號公告，批準左旋肉堿為擴大使用范圍及使用量的食品營養(yǎng)強化劑[2]。

目前世界上只有瑞士﹑意大利﹑日本等為左旋肉堿的主要生產(chǎn)國。我國大部分L-肉堿需求還是依靠進口，價格昂貴，亟待研發(fā)新進展，以填補國內空白。因此，不斷開發(fā)低成本﹑高合成率﹑易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的左旋肉堿合成新路線，顯得尤為重要。

左旋肉堿的制備方法很多，其制備可通過從動物肉浸膏中提取﹑生物合成和化學合成等方法。提取法產(chǎn)量低，純化步驟多，成本高且難以形成規(guī)?；a(chǎn)?；瘜W合成法主要采取2 種途徑[3]：(1)先制取出外消旋肉堿，利用拆分劑析出左旋體；(2)以不同的化學物質為原料進行合成。生物合成法制備左旋肉堿主要有兩種方法，一是微生物發(fā)酵法，二是利用酶法轉化。本文綜述近10 年來專利文獻所介紹的左旋肉堿合成方法，并對左旋肉堿的應用做簡要介紹。

1 左旋肉堿的合成

1.1 消旋體拆分法

早期化學合成的肉堿是外消旋體，是以環(huán)氧氯丙烷為原料，經(jīng)過氨化﹑酸化﹑氰化﹑水解及去離子化得到的[4](圖1)。

圖1 環(huán)氧氯丙烷制混旋肉堿Fig.1 epichlorohydrin Preparation DL-carnitine

后來發(fā)現(xiàn)右旋肉堿會對肉堿乙酰轉移酶和肉堿脂肪酰轉移酶有競爭性抑制作用，研究人員開始采用消旋體拆分法制備左旋肉堿。Lorenz 等[5]用D-(+)-樟腦磺酸﹑二苯甲酰-D-酒石酸對DL-肉堿進行拆分，Takenaka 等[6]利用(-)-扁桃酸，Iannella, V.等[7]與Kikuchi 等[8]利用二苯甲酰-L-酒石酸對外消旋體4進行拆分制得左旋肉堿。為解決拆分后剩余的右旋體的利用問題，王從敏等[9]開發(fā)出一條以右旋肉堿為原料制左旋肉堿的工藝路線，在10%～20%的鹽酸環(huán)境中，以二苯甲酰-L-酒石酸為催化劑，在乙醇﹑丙醇等極性溶劑中制取混旋肉堿，肉堿的收率達90%以上。胥波等[10]則將拆分出的右旋肉堿先氧化再還原得到拆分前體，進行回收套用(圖2)。

Tsuyoshi 等[11]利用D-樟腦磺酸對外消旋體3 進行拆分，得到的左旋體經(jīng)水解﹑去離子化制取左旋肉堿，陳志衛(wèi)等[12]則將拆分出 3 的左旋體用過氧化氫水解，后經(jīng)中和，安伯萊特(Amberlite)陰離子交換樹脂交換，濃縮，重結晶，得到收率高于70%的左旋肉堿產(chǎn)品。

為提高原子的經(jīng)濟性，Gianness F 等[13]開發(fā)出一條工藝路線，將外消旋體3 拆分得到的右旋體經(jīng)幾步轉化后制得左旋肉堿(圖3)。

張紅素[14]采用D-(+)-酒石酸對2 的外消旋體進行拆分，Voeffray R 等采用L-(+)-酒石酸對2 的外消旋體進行拆分，再經(jīng)氰化﹑水解等步驟進一步制得左旋肉堿。

Schaus S.E.等[15]發(fā)現(xiàn)(S)-salen-Co 催化劑能將外消旋化的環(huán)氧氯丙烷水解成左旋環(huán)氧氯丙烷，ee值達97%，產(chǎn)率為44%。沈大東等[16]開發(fā)出手性salen-Co Ⅲ為催化劑，水解動力學拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷，得到高光學純度的(S)-(+)-環(huán)氧氯丙烷，再經(jīng)季胺化﹑氰化﹑水解及離子交換制得L-(-)-肉堿，總收率達70%[以(S)-(+)-環(huán)氧氯丙烷計]。顧書華等[17]通過嚴格控制反應過程中各步驟的雜質含量，使生產(chǎn)出的左旋肉堿ee 值達97%以上。目前工業(yè)上主要采用這一方法制取左旋肉堿(圖4)。此外，國內外有多個研究小組對salen 催化劑進行了廣泛和深入研究[18]，開發(fā)出單核salen 催化劑[19]，雙核和聚合salen 催化劑[20]，負載型salen 催化劑，使合成左旋環(huán)氧氯丙烷的產(chǎn)率達45%，ee 值達99%。其中，單核salen 催化劑已工業(yè)化生產(chǎn)。Salen Co Ⅲ催化劑價格昂貴，開發(fā)產(chǎn)率高﹑低成本的Salen 催化劑仍是今后研究的重點。

圖2 氧化還原消旋法制備拆分前體Fig.2 Resolution precursor preparation by oxidationreduction racemization

圖3 右旋肉堿前體轉化成左旋肉堿Fig.3 Precursor of D-carnitine conversion to L-cainitine

圖4 (S)-Salen Co 催化劑拆分環(huán)氧氯丙烷制左旋肉堿Fig.4 (S)-Salen Co resolution epichlorohydrin Preparation L-carnitine

錢國慶等[21]對Salen Co 催化劑拆分環(huán)氧氯丙烷的副產(chǎn)物的急毒性進行研究發(fā)現(xiàn)，(R/S)-3-氯 -1,2-丙二醇對人可能會顯示神經(jīng)毒性，為解決此問題，楊云旭等[22]開發(fā)出一條以手性拆分外消旋環(huán)氧氯丙烷制取L-肉堿時的副產(chǎn)物(R)-(-)-氯代甘油為手性起始原料制取左旋肉堿的工藝，先使(R)-(-)-氯代甘油和亞硫酰氯反應，生成環(huán)狀亞磺酸酯中間體；此環(huán)狀中間體和KCN 或NaCN 發(fā)生開環(huán)反應，生成氯代丁基腈；氯代丁基腈在三甲胺溶液中反應，制得氰鹽；氰鹽在酸性溶液里水解，并經(jīng)離子交換脫去氯離子，制得最終產(chǎn)物L-肉堿(圖5)。

目前使用左旋環(huán)氧氯丙烷制備左旋肉堿的方法使用到有劇毒的氰化鈉，在倡導發(fā)展綠色化學的今天，開發(fā)環(huán)境友好，原子經(jīng)濟性高的合成工藝是必要的。

此外，李全等[23]以氯乙酸乙酯為原料，經(jīng)格氏化﹑還原﹑胺化﹑水解等步驟得到混旋肉堿，再用左旋二苯甲酰酒石酸為拆分劑拆分得到左旋肉堿(圖6)。該工藝避免了氰化物的使用，但產(chǎn)品收率較低。

圖5 (R)-(-)-氯代甘油制左旋肉堿Fig.5 (R)-3-chloro-1,2-propanediol Preparation L-carnitine

圖6 氯乙酸乙酯制備左旋肉堿Fig.6 Ethyl chloroacetate Preparation L-carnitine

1.2 手性原料化學合成法

手性原料化學合成法主要采用自然界中存在并易獲取的手性物質為原料，直接合成左旋肉堿。與拆分法相比，全過程原子經(jīng)濟性較高。

McCarthy J.R.等[24]以(S)-羥基-γ-丁內酯為原料，經(jīng)兩步反應即可制得左旋肉堿，ee 值達95%以上(圖7)。(S)-羥基-γ-丁內酯可以乳糖﹑果糖等己糖為原料經(jīng)分解酯化﹑官能團保護﹑酸化制得[25]。

Byun. I.S.等[26]在McCarthy. J.R.等所開發(fā)工藝的基礎上，以(S)-3-羥基-γ-丁內酯為原料，經(jīng)開環(huán)反應﹑手性中心反轉的環(huán)氧化反應﹑三甲胺親核取代反應制取左旋肉堿，經(jīng)純化后得左旋肉堿的收率為55%(圖8)。該反應在水溶液中進行，各反應步驟中純度和收率相對較高，中間產(chǎn)物無需純化，可以在單釜中完成多步反應，原料易得，制備過程中避免了有毒物質的使用，是一條比較有工業(yè)化前景的路線。

圖7 (S)-羥基-γ-丁內酯制左旋肉堿ⅠFig.7 (S)-3-hydroxybutyrolactone Preparation L-carnitineⅠ

圖8 (S)-羥基-γ-丁內酯制左旋肉堿ⅡFig.8 (S)-3-hydroxybutyrolactone Preparation L-carnitine Ⅱ

Fiorini M.等[27]使用D-甘露醇為原料，經(jīng)9 步反應制得左旋肉堿，反應過程中使用到重金屬四乙?；U，且反應步驟多，產(chǎn)品得率低，無工業(yè)化價值。

Bellamy.F.D 等[28]以蘋果酸為原料，經(jīng)6 步反應制得左旋肉堿(圖9)，收率為39%，光學純度依賴于蘋果酸的光學純度。如能獲得高光學純度的L-蘋果酸，并能提高收率，這也是一條可以考慮的路線。

1.3 不對稱合成法

不對稱合成直接將潛手性的物質轉化成目標產(chǎn)物，避免了手性拆分，提高了原料的利用率。不對稱合成法制左旋肉堿主要以4-氯 -3-羰基丁酸烷基酯或4-氯 -3-羰基丁酰胺為原料，不對稱催化制取中間產(chǎn)物(R)-4-氯 -3-羥基丁酸烷基酯或4-氯 -3-羰基丁酰胺，再將(R)-4-氯 -3-羥基丁酸烷基酯或4-氯 -3-羰基丁酰胺經(jīng)三甲胺化﹑酸化﹑水解等步驟制取左旋肉堿(圖10)。

圖9 蘋果酸制左旋肉堿Fig.9 Malic acid Preparation L-carnitine

圖10 不對稱還原法制左旋肉堿ⅠFig.10 Asymmetric hydrogenation Preparation L-carnitine Ⅰ

Noyori R.等[29]開發(fā)了一系列高效的手性還原催化劑，開發(fā)出轉化率和選擇性均較高的反應路線，如以Ru(OCOCH3)2((-)-BINAP)為催化劑，在100℃，9.8MPa 下不對稱催化還原4-氯 -3-羰基丁酸烷基酯，反應15min 即制得高光學活性高產(chǎn)率(ee 97%，產(chǎn)率97% )的中間體(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯，再將(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯經(jīng)三甲胺胺化﹑酸化﹑純化等步驟制得左旋肉堿，收率為46%。

針對該反應壓力過高的情況，韋志明等[30]改進了工藝條件，采用[RuCl(cymene)(S-BIN-AP)Cl[氯代[(S)-(-)-2,2′-雙(二苯基膦)-1,1′-聯(lián)萘](p-傘花素)氯化釕(Ⅱ))]為催化劑，在1MPa 以下即可在短時間內獲得中間體(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯，再經(jīng)胺化﹑水解等步驟制得左旋肉堿。

丁迪M.O.等[31]使用自制的{[Ru(對-異丙苯)I(+)TMBTP]I}催化劑，0.5MPa 下催化底物4-氯 -3-羰基丁酸乙酯制取(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯，ee 值為97%，再將(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯在三甲胺水溶液中于80℃下密閉保持24h 制得左旋肉堿，經(jīng)純化后得左旋肉堿的產(chǎn)率為70%。

陳新滋等[32]則針對第二步反應時收率低的情況，改進工藝條件，在第二步反應時采用相轉移﹑堿性催化劑和低溫反應條件，將肉堿的收率提高到70%以上。

胡建榮[33]針對目前Ru 系催化劑較為昂貴的情況，使用較為便宜的L-酒石酸修飾Ni-B/SiO2作為催化劑，在1MPa 下催化底物氯乙酰乙酸乙酯制取(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯，再在氫氧化鈉存在條件下，將(R)-4-氯 -3-羥基丁酸乙酯和三甲胺反應生成左旋肉堿，左旋肉堿收率達70%以上，ee 值為97%，降低了成本(圖11)。

圖11 不對稱還原法制左旋肉堿ⅡFig.11 Asymmetric hydrogenation Preparation L-carnitine Ⅱ

1.4 酶轉化法

酶轉化法制取左旋肉堿主要有3 種方法：(1)DL-肉堿及其衍生物拆分法；(2)D-肉堿酶轉化法；(3)巴豆甜菜堿酶轉化法。這幾種方法主要是以化學法合成的混旋肉堿或副產(chǎn)物D-肉堿為原料，通過篩選獲得產(chǎn)酶菌株如變形桿菌﹑大腸桿菌﹑假單胞桿菌﹑霉菌﹑酵母菌等，再與底物一起培養(yǎng)轉化生成左旋肉堿，是制備左旋肉堿的重要途徑之一，其工藝路線如圖12 所示。

圖12 酶法制左旋肉堿Fig.12 Enzymatic preparation of L-carnitine

多年來各國研究人員進行了大量的研究實驗，報道了多種產(chǎn)酶菌株，如Proteus mirabilis AJ-2772[34]﹑DSM6230[35]﹑Escherichia coliK12S[36]﹑Pesudomonas YS-240[37]等，但都存在轉化率低﹑巴豆甜菜堿與左旋肉堿分離困難等問題。近年來，研究人員在提高轉化率，解決分離問題上取得了一定進展。

王強等[38]用巴豆甜菜堿和肉堿脫水酶催化，在含有[Bmim]PF6離子液體的水溶液中制備?；?L-肉堿，后經(jīng)水解合成左旋肉堿，收率高于70%。

陳群等[39]從土壤樣品中分離得到一種假單胞桿菌，采用微波誘變的方法對其進行篩選得到高產(chǎn)酶菌株，再進行增殖培養(yǎng)，然后將菌株細胞微囊固定化后加入反應底物巴豆甜菜堿，在超聲波輔助條件下進行酶解反應得到左旋肉堿，其轉化率達80%。

克萊伯 H-P.等[40]在連續(xù)操作的細胞反應器中，通過固定化的大腸桿菌044K74 將巴豆甜菜堿及其衍生物轉化為左旋肉堿，轉化率達60%。

Thomas Elssner 等[41]獲得一種γ-三甲基丁內銨輔酶A 和巴豆甜菜堿輔酶A，用于催化底物巴豆甜菜堿和右旋肉堿生產(chǎn)左旋肉堿。

孫志浩等[42]以大腸桿菌為出發(fā)株，經(jīng)紫外線﹑Co-60 誘變得到不同化的左旋肉堿產(chǎn)酶菌株(CGMCC 0276)，經(jīng)誘導培養(yǎng)后離心收集菌體，以菌體游離細胞或固定化細胞為酶源，以巴豆甜菜堿為底物，酶轉化制得左旋肉堿反應液，取反應清液經(jīng)活性炭脫色，加熱膜分離去除蛋白，濾液過陰離子交換柱，加亞硫酸鹽去除巴豆甜菜堿，稀釋后上陽離子交換柱層析，層析液真空濃縮，加異丁醇共沸回流，蒸發(fā)回收異丁醇，真空蒸發(fā)烘干得粗品，再經(jīng)重結晶﹑脫色等純化處理制得精品左旋肉堿內酯。

目前L-肉堿的生物合成尚處在研究階段，未形成工業(yè)化生產(chǎn)。用微生物轉化法生產(chǎn)的產(chǎn)量和底物轉化率都相對較低。選育具有高轉化能力的微生物菌株以轉化較廉價的底物是今后生物法生產(chǎn)L-肉堿的發(fā)展方向。

1.5 基因重組法

基因重組法指通過基因重組技術獲得具有高轉化活性的微生物，并結合傳統(tǒng)的發(fā)酵工藝來開發(fā)生產(chǎn)肉堿。

1995 年Knut D E 等[43]將大腸桿菌中caiD﹑caiE 基因克隆, 獲得基因工程菌E.coli K38，它攜帶有質粒pT 7-5KE32，在該質粒的T7RNA 聚合酶啟動子下游含有caiD﹑caiE 基因，該工程菌表達的肉堿消旋酶占細菌總蛋白的10%～15%，活性顯著提高，用它來轉化DL-肉堿或拆分后的廢物D-肉堿，具有良好的效果。同年，Eichler 等[44]又將大腸桿菌中分別編碼肉堿水解酶及未知因子的caiB 和caiE基因克隆，并用所獲得的重組微生物來轉化巴豆甜菜堿生產(chǎn)L-肉堿，效果也很好，很有前景。

2007 年李炳旭等[45]發(fā)現(xiàn)了一種屬于腸桿菌科的微生物(保藏號KCCM-10638)，其中包括編碼來源于粗糙脈胞菌的N-三甲基賴氨酸羥化酶活性的多核苷酸，編碼來源于粗糙脈胞菌的3-羥基-6-N-三甲基賴氨酸醛縮酶活性的多核苷酸，編碼來源于粗糙脈胞菌的γ-三甲基氨基醛脫氫酶活性的多核苷酸和編碼來源于粗糙脈胞菌的γ-丁酰甜菜堿羥化酶活性的多核苷酸。催化底物ε-N-三甲基賴氨酸，β-羥基-N-三甲基賴氨酸，γ-N-三甲基氨基丁醛，γ-丁酰甜菜堿及其混合物生成左旋肉堿。

目前將基因工程技術應用于L-肉堿生產(chǎn)的研究報道尚不多見。利用基因工程技術構建具有L-肉堿高轉化率的工程菌，并用于L-肉堿的工業(yè)化生產(chǎn)，其前景看好。

2 左旋肉堿的應用

左旋肉堿是一種非常重要的營養(yǎng)素，其主要功能是以脂酰肉堿的形式將長鏈脂肪酸從線粒體膜外運送至膜內，從而促進脂肪酸的β-氧化，并調節(jié)線粒體內?；鵆oA/疏基CoA 比率，且具有酰基化解毒作用。左旋肉堿同時也能有效降低運動后血中乳酸的濃度。正是這些特性使左旋肉堿在食品添加劑﹑飼料添加劑和藥物方面有廣泛應用。

2.1 作為食品添加劑

人體所需要的左旋肉堿有2 種來源，一是靠人體以賴氨酸﹑蛋氨酸為原料在肝中合成，另一來源是從食物攝取，尤其是肉類和乳制品。健康成人只要膳食合理，一般不需要補充左旋肉堿，而嬰兒及患有左旋肉堿缺乏癥的人需要額外補充左旋肉堿。

嬰兒體內左旋肉堿的合成能力只有成人的15%，不能滿足其正常的代謝需要，并且嬰兒生長發(fā)育速度快，所需的左旋肉堿的量大，母乳中左旋肉堿的含量較高，一般情況下能滿足嬰兒生長發(fā)育的需要。但現(xiàn)在隨著社會環(huán)境的變化，許多母親由于各種原因不能母乳喂養(yǎng)嬰兒，往往選用奶粉喂養(yǎng)嬰兒，因此需在奶粉中加入適量的左旋肉堿[46]。

國內外的研究者還發(fā)現(xiàn)對運動員補充適量的左旋肉堿可以極大地提高運動員的最大耗氧量和運動時的能量輸出，而且明顯地減少二氧化碳的產(chǎn)生和血漿中乳酸的濃度。因此可在運動功能食品中加入適量的左旋肉堿[47]。

由于左旋肉堿具有促進脂類代謝和間接促進能量生成的作用，肥胖人員通過補充左旋肉堿，并輔以適當運動，會有較好的減肥效果[48]。所以左旋肉堿也是減肥健美食品添加劑。

臨床表明左旋肉堿具有抗心肌缺血，抗心率失常，降血脂等作用[49]，隨著年齡的增大，體內的左旋肉堿不斷減少，導致心肌細胞活力減退，故老年人需要補充左旋肉堿，可在老年保健食品中添加左旋肉堿。

2.2 作為飼料添加劑

研究表明左旋肉堿有促進生豬的生長[50]，提高瘦肉率[51]，提高雞的產(chǎn)蛋率[52]，加快魚蝦的生長速度[53]等作用。隨著工廠化集約式養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，必然要求畜禽高繁殖率及快速生長，常規(guī)飼料中的左旋肉堿含量往往不能滿足新生哺乳幼畜﹑ 應激狀況下的禽畜的需要，需額外在飼料中加入左旋肉堿，才能發(fā)揮其最大的生長潛能。

2.3 作為藥物

左旋肉堿可用于治療尿毒癥貧血[54]，緩解內毒素血癥和保護肝功能[51]，減輕CO 中毒后心肌損傷和橫紋肌損傷[55]，改善精子活力，提高配偶妊娠機率等[56]。

3 結語

左旋肉堿作為一種安全有效的營養(yǎng)素，可用于奶制品添加劑﹑運動功能食品添加劑﹑減肥保健食品添加劑﹑飼料添加劑，還可以用于治療疾病，因此有著巨大的市場需求。開發(fā)環(huán)境友好的合成新技術，提高原料的利用率，提高產(chǎn)能，降低成本，是今后合成研究的重點。

[1] 張鳳清，張麗君，周長民.左旋肉堿的制備方法[J].當代化工，2008，37(3)：316-318.

[2] 姜琳琳，張慧蘋.左旋肉堿的應用[J].赤峰學院學報 (自然科學版)，2008(2)：7.

[3] 虞斌，張海宏，趙利軍.左旋肉堿的化學合成[J].化學工程師，2011，25(4)：37-43.

[4] Wiegand K E. Carnitine nitrile halide preparation[P]. US 4070394, 1978-01-24.

[5] Lorenz I. Production of pure D-and L-carnitine[P]. US 3151149, 1964-09-29.

[6] Takenaka, Shigekazu. Production of L-(-) and D-(+)-carnitine[P]. JP 59231048A, 1984-12-25.

[7] Iannella V. Process for the preparation of L-carnitine hydrochloride of L-(-)-carnitine inner salt [P]. US 4933490, 1990-06-12.

[8] Kikuchi, Haruhiko, Kamifukuoka, et al. Verfahren zur Herstellung von L-Carnitin und Salzen davon [P]. DE 3536093, 1985-10-09.

[9] 王從敏，李浩然，馬璐，等.肉堿的合成工藝[P]. CN 1634870A, 2005-07-06.

[10] 胥波，程國侯. R-卡尼丁的合成和改進[J].化學世界，2000(9)：459-472.

[11] Tsuyoshi M, Masao K, Sellchi A, et al. production-of-opticallyactive-cyanocarnitine-salt[P]. JP 62286959, 1987-12-12.

[12] 陳志衛(wèi)，蘇為科，畢建豪，等.一種左旋肉堿的合成方法[P].CN 102020575A, 2011-04-20.

[13] Gianness F, Bolognesi M L, Tinti M O. Process for manufacturing L-(-)-Carnitine from a waste product having opposite configuratioin[P]. EP 0609643, 1996-07-24.

[14] 張紅素. L-肉毒堿的合成與應用[J].貴州化工，2001，26(4)：15-16.

[15] Schaus S E, Brandes B D, Larrow J F, et al. Highly selective hydrolytic kinetic resolution of terminal epoxides catalyzed by chiral (salen) CoIII complexes. Practical synthesis of enantioenriched terminal epoxides and 1, 2-diols[J]. Journal of the American Chemical Society，2002，124(7)：1307-1315.

[16] 沈大冬，朱錦桃. L-(-)-肉堿的合成[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，37(12)：801-802.

[17] 顧書華，王學成，李慶宜.一種制備高純度左旋卡尼汀的方法[P]. CN 101723843A, 2010-06-09.

[18] 盧定強，涂清波，凌岫泉，等.手性環(huán)氧氯丙烷的制備及其藥物應用[J].有機化學，2009，29(8)：1209-1216.

[19] Larrow J F, Jacobsen E N. Asymmetric processes catalyzed by chiral (salen) metal complexes[J]. Organometallics in Process Chemistry，2004：123-152.

[20] Zhu X, Venkatasubbaiah K, Weck M, et al. Kinetic Evaluation of Cooperative [Co (salen)] Catalysts in the Hydrolytic Kinetic Resolution of rac-Epichlorohydrin[J]. Chem. Cat. Chem.,2010(10)：1252-1259.

[21] 錢國慶，張皓，張國州，等. R, S 及 R/S 型 3-氯 -1, 2-丙二醇的急性毒性研究[J].衛(wèi)生研究，2007，36(2)：137-140.

[22] 楊云旭，王偉力.一種以(R)-(-)-氯代甘油為手性起始原料合成L-肉堿的制備方法[P].CN 101823974A, 2010-09-08.

[23] 李全，沈旭.左旋肉毒堿鹽酸鹽新的合成方法(Ⅱ)[J].中國藥物化學雜志，1995(4)：276-278.

[24] Mccarthy J R, Beach S. Process for the preparation of Lcarnitine[P].US 5473104, 1995-12-05.

[25] 章小波，蔣永祥，汪勁松. (S)-3-羥基丁內酯的合成[J].精細化工中間體，2004(3)：25-26.

[26] Byun I, Kim K, Bong C. Process for the prepration of Lcarnitine[P]. WO 1999/005092, 1999-04-02.

[27] Fiorini M, Valentini C. Method for preparing L-carnitine[P].US 4413142, 1983-11-01.

[28] Bellamy F D, Bondoux M, Dodey P. A new short and efficient synthesis of both enantiomers of carnitine [J]. Tetrahedron Letters，1990，31(50)：7323-7326.

[29] Noyori R, Kitamura M, Ohkuma T, et al. Process for preparing carnitine[P]. EP 0339764, 1988-02-19.

[30] 孫果宋，韋志明，阮恒，等.一種制備左旋肉堿的方法[P]. CN 102633664A, 2012-08-15.

[31] 丁迪 M. O.，皮克羅 O.，邦尼法西奧 F.，等.生產(chǎn)L-肉堿的工業(yè)方法[P]. CN 1326435A, 2001-12-12.

[32] 陳新滋，陳建.一種制備L-肉堿的方法[P]. CN 1727328A，2006-02-01.

[33] 胡建榮.一種左卡尼汀化合物及其新制法[P]. CN 101875616A, 2010-11-03.

[34] Yokozeki K, Takahashi S, Hirose Y, et al. Asymmetric Production of L-Carnitine from trans-Crotonbetaine by Proteus mirabilis (Microbiology ffamp; Fermentation Industry)[J]. Agricultural and biological chemistry，1988，52(10)： 2415-2421.

[35] Joers U, Bommarius A S. Studies on kinetics and application of L-carnitine-amidase for the production of L-carnitine[J].Biocatal Biotansform，1995，12(1)：27-36.

[36] 范立強，袁勤生.微生物轉換法——DL-肉堿解旋的新思路[J].中國藥學雜志，1999，34(5)：335-337.

[37] Moil N, Mitsuzumi H. Screening of carnitine-dehydrogenase having a low Km value for L-cainitine[J]. J.Ferment.Bioeng.，1993，75(6)：395-396.

[38] 王強，田金強，張鐘元.一種制備酰基-L-肉堿或和L-肉堿的方法[P]. CN 101921814A，2010-12-22.

[39] 陳群，吳菁.一種左旋肉堿的制備方法[P]. CN 101712969A，2010-05-26.

[40] 克萊伯 H-P.，卡諾瓦斯-迪亞茲 M.，奧邦 J. M.，等.由巴豆基甜菜堿制備L-肉堿的方法[P]. CN 98810854.2，2000-12-27.

[41] Thomas Elssner Leipzig D E, Hans-Peter Kleber Grossdeuben D E. Coenzymes useful for the synthesis of L-carnitine [P]. US 6562608 B2, 2003-05-13.

[42] 孫志浩，鄭璞，王蕾，等. L-肉堿的酶法生產(chǎn)[J]. 精細與專用化學品，2008(4)：15-17.

[43] Knut D E, Dr M M, D K H P. New carnitine racemase from E.coli and related plasmids [P]. DE 4402127, 1995-07-27.

[44] Eichler K, Mandrand-Berthelo M, Klebe H. DNA fragments encoding E.coli L-carnitine dehydratase and CaiE protein[P]. FR 2715167A1, 1995-07-21.

[45] 李炳旭，姜歡求，樸英熏，等.含有與L-肉堿生物合成相關基因的腸桿菌科屬生物和使用該微生物生產(chǎn)L-肉堿的方法[P]. CN 11068925A, 2007-11-07.

[46] 畢偉建，黃金發(fā).左旋肉堿在食品中的應用[J].廣西輕工業(yè)，2010(8)：16-17.

[47] 王京鐘，王筱桂. L-左旋肉堿對人體運動能力的影響[J].中國食品添加劑，2003(5)：40-43.

[48] 胡飛燕.左旋肉堿配合有氧健身運動對肥胖女性的影響[J].江蘇教育學院學報(自然科學版)，2008(3)：37-39.

[49] 冉玉力，韓玲，譚華.左旋肉堿對維持性血液透析老年患者營養(yǎng)不良及心功能不全的影響[J].武警醫(yī)學，2012， 23(2)：147-149.

[50] 畢偉建，黃金發(fā).左旋肉堿在豬生產(chǎn)中的作用[J].廣西輕工業(yè)，2010(7)：14-15.

[51] 巫傳玲.左旋肉堿的應用[J].西南軍醫(yī)，2010，12(6)：1184-1185.

[52] 陸建安.飼用左旋肉堿的制備與應用[J].飼料博覽，2004(2)：33-34.

[53] Arslan C. L-Carnitine and its use as a feed additive in poultry feeding a review[J]. Revue De Medecine Veterinaire，2006，157(3)：134.

[54] Bonomini M, Zammit V, Pusey C D, et al. Pharmacological use of l-carnitine in uremic anemia: Has its full potential been exploited?[J]. Pharmacological Research，2011，63(3)：157-164.

[55] 孫中吉，楊朝斌，王輝，等.左旋肉堿對一氧化碳中毒后血清心肌損傷標志物水平的影響[J].中國危重病急救醫(yī)學，2012，23(12)：739-742.

[56] 王亞軒，楊書文，瞿長寶，等.左旋肉堿治療弱精子癥患者的療效觀察[J].中華男科學雜志，2010(5)：420-422.