HPLC法測定婦炎康復片中芍藥苷的溶出度

王玉平，丁建伶，邢 婧，趙新紅

承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥劑科，承德 067000

婦炎康復片來源于臨床經(jīng)驗處方，由赤芍、當歸、黃柏等11味中藥組成，具有清熱解毒、除濕止帶、消腫散結(jié)等功效，主要用于濕熱下注、毒淤互阻所致帶下病等。作為廣泛應用臨床多年的制劑，其良好的臨床療效得到廣泛認可，然而對于其質(zhì)量控制僅僅局限于薄層鑒別，質(zhì)量控制仍需進一步加強。溶出度作為一種重要的固體制劑的質(zhì)量控制方法，已在多國質(zhì)量控制中收載，因此，為了進一步控制該制劑的質(zhì)量，進而提高臨床療效，我們參考相關文獻［1-3］中的含量測定方法，以方中君藥赤芍的主要成分芍藥苷為指標，HPLC法測定其體外溶出情況，以便于控制其內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀(美國)、2998光電二極管陣列檢測器、Empower 2軟件;Sartorius CP225D分析天平(德國Sartorius公司);ZRS-8型智能溶出儀(天津大學無線電廠)。

1.2 試劑

芍藥苷對照品(批號:201104，純度大于98%，購于四川維克奇生物科技有限公司);婦炎康復片(自制，批號為 20110508、20110611、20110725);乙腈、甲醇、磷酸為色譜純;水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);流速1 mL/min;檢測波長230 nm;柱溫30℃;進樣體積20 μL;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于4000。

2.2 方法學考察

2.2.1 標準曲線制備

精密稱取芍藥苷對照品3.68 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻。再精密吸取2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得147.2 μg/mL的對照品溶液。分別精密吸取該對照品溶液1、2、3、5、8、10 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻。按照已經(jīng)確定的色譜條件，進樣體積20 μL進行測定。以峰面積(Y)對濃度(X)進行線性回歸，得到回歸方程為Y=4932．21X-13548．77(R2=0.9998)。說明濃度在 14.72 ～147.2 μg/mL范圍內(nèi)，線性關系良好。

2.2.2 專屬性考察

按照原工藝制備不含赤芍的陰性樣品，并制備溶出2 h的溶出液，分別取對照品溶液、供試品溶出液、陰性樣品溶出液進樣測定，結(jié)果見圖1。根據(jù)實驗結(jié)果可知，供試品溶出液中芍藥苷色譜峰與其他組分峰可達到基線分離，陰性樣品無干擾。

圖1 芍藥苷對照品溶液(A)、陰性樣品溶液(B)和供試品溶液(C)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC Chromatogram of paeoniflorin standard(A)，blank(B)and sample(C)

2.2.3 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于 0、2、4、8、12、24 h 進樣測定，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.78%，表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.2.4 精密度試驗

取取樣時間為24 h的溶出液制備供試品溶液，重復進樣測定6次，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為1.49%，說明本方法精密度良好。

2.2.5 重復性試驗

取同一批次的樣品，平行制備6份取樣時間為4 h的溶出液，分別進樣測定，記錄峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.85%，表明本方法的重復性良好。

2.2.6 加樣回收試驗

取同一批次的樣品，平行制備6份溶出液，精密吸取3 mL置于10 mL量瓶中，再精密吸取濃度為147.2 μg/mL的芍藥苷對照品溶液置于上述溶出液中，加甲醇至刻度線，搖勻。按照已經(jīng)確定的色譜條件，進樣測定，根據(jù)標準曲線方程計算含量及回收率，結(jié)果見表1。根據(jù)實驗結(jié)果可知:平均加樣回收率及其RSD值分別為99.89%、2.76%，結(jié)果符合要求。

表1 芍藥苷加樣回收試驗Table 1 The recovery rate of paeoniflorin

5 0.298 0.294 0.579 95.58 6 0.29 0.294 0.593 104.08

2.3 婦炎康復片中芍藥苷溶出度測定

2.3.1 溶出度測定方法

精密量取已超聲30 min進行脫氣處理的水900 mL，加入溶出杯中，開啟電源開關至(37±0.5℃)保溫30 min，調(diào)整轉(zhuǎn)速至100 rpm，稱取婦炎康復片約10 g，精密稱定，置于溶出杯中，分別在開啟轉(zhuǎn)槳后的 5、15、30、45、60、120、240、1440 min，迅速取樣10 mL，補液，濾過，殘渣加入溶出杯中。精密吸取濾液2 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，進樣，測定。

2.3.2 三批樣品溶出度測定

取三批樣品，每批樣品平行稱取6份，照溶出度測定方法下的操作，進行溶出度測定，計算每批樣品的平均溶出度，結(jié)果顯示了三品樣品測定結(jié)果基本一致，結(jié)果見表2。

表2 3批婦炎康復片中芍藥苷累積溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

表2 3批婦炎康復片中芍藥苷累積溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

批 號Lot No.取樣時間/minSampling time/min 5 15 30 45 60 90 120 240 20110508 34.00±1.23 49.07±1.09 68.09±1.85 74.95±2.26 78.82±3.04 82.18±3.28 87.66±2.5694.39±3.10 20110611 29.28±1.67 46.89±1.84 64.99±2.55 74.86±1.69 81.76±2.29 86.67±2.45 90.18±1.99 93.82±2.35 20110725 28.45±0.79 45.20±1.61 70.65±1.85 77.06±3.16 80.70±0.98 87.78±1.48 91.09±1.5694.43±2.30

2.3.3 溶出參數(shù)提取

中的方法［4，5］，選擇 1stOpt軟件進行威布爾溶出模型、零級速率模型、一級速率模型、Higuchi模型、Hixson-Crowell模型、Ritger-Peppas模型等6種溶出模型優(yōu)選，結(jié)果最優(yōu)模型為威布爾溶出模型。選擇SAS軟件實現(xiàn)溶出參數(shù)T50、Td提取，為了編寫程序的簡便，參考文獻中的方法［6］，設定威布爾溶出模型為y=1-exp(-b*(t-a)^m)，實驗結(jié)果見表3。

表3 溶出模型選擇及溶出參數(shù)提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

表3 溶出模型選擇及溶出參數(shù)提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

批號Lot No.最優(yōu)模型The optimal dissolution model R2 T50/min Td /min 26.36±0.45 20110508 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9900 13.00±1.16 20110611 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9932 15.41±1.44 27.99±0.32 20110725 威布爾溶出模型/Weibull dissolution model 0.9843 14.82±1.3526.26±0.24

2.3.4 溶出參數(shù)方差分析

三批樣品的溶出參數(shù)進行方差分析，結(jié)果表明三批樣品的溶出參數(shù) a、b、m、T50、Td無顯著性差異(P ＜0．05)。

3 討論

在進行溶出方法選擇時，考慮到婦炎康復片中芍藥苷的含量偏低，這不僅需要加大投藥量才可以實現(xiàn)定量檢測，同時，也給溶出方法選擇帶來一定難度。預實驗中發(fā)現(xiàn)，選擇轉(zhuǎn)籃法進行取樣測定時，籃內(nèi)片劑裝得較滿，在溶出試驗過程中僅轉(zhuǎn)籃外層的片劑才能接觸溶出介質(zhì)，從而影響片劑實際溶出。因此，綜合考慮選擇槳法為溶出方法。

在溶出度模型優(yōu)選中，百分之百溶出量的選擇是其中的關鍵一步。既有選擇“制備藥粉的溶出24 h的量”為溶出百分之百，亦存在“直接測定藥物中的含量”為溶出百分之百的計算方法［7］。本試驗中，曾對上述兩種方法進行比較，考慮到上述兩種方法選擇的水為提取溶劑時，測定結(jié)果不理想，最終選擇以溶出取樣時間為24h的累積溶出量作為溶出百分之百。

本試驗所建立的婦炎康復片溶出度測定方法，存在操作簡便易行，準確可靠等優(yōu)點，在一定程度上可以達到控制其內(nèi)在質(zhì)量的目的。然而，本試驗主要研究的是婦炎康復片中芍藥苷的體外溶出度，對于體內(nèi)吸收機制等有待于進一步深入研究。

參考文獻

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