美托洛爾抑制NE誘導的大鼠心肌細胞凋亡及縫隙連接蛋白43的磷酸化*

梁 慶, 李自成, 鄺素華, 黃偉青, 黃敏堅, 林俊敏, 梁子敬

(1暨南大學第一臨床醫(yī)學院心血管內科, 廣東 廣州 510630；廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 2急診科, 3心臟外科, 廣東 廣州 510120)

美托洛爾抑制NE誘導的大鼠心肌細胞凋亡及縫隙連接蛋白43的磷酸化*

梁 慶1,2, 李自成1△, 鄺素華3, 黃偉青2, 黃敏堅2, 林俊敏2, 梁子敬2

(1暨南大學第一臨床醫(yī)學院心血管內科, 廣東 廣州 510630；廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2急診科,3心臟外科, 廣東 廣州 510120)

目的研究美托洛爾(Meto)對去甲腎上腺素(NE)刺激下乳鼠心肌細胞凋亡及縫隙連接蛋白43(Cx43)磷酸化水平的影響。方法新生SD乳鼠心肌細胞分為5組：(1)對照組(Con組，n=6)；(2) NE組(n=6)：在細胞中加入0.1 μmol/L NE孵育24 h；(3) NE+Meto組(n=6):細胞中同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h；(4)NE+Meto+ PD98059組(n=6):細胞中提前30 min加入ERK磷酸化抑制劑10 μmol/L PD98059，后同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h；(5)NE+PD98059組(n=6)：細胞中提前30 min加入10 μmol/L PD98059，后加入0.1 μmol/L NE孵育24 h。24 h后計算各組心肌細胞搏動頻率, MTT法檢測細胞活性，RT-PCR檢測各組心肌細胞Cx43 mRNA表達，采用 Western bloting法檢測各組心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3蛋白表達。結果(1)NE單獨處理可顯著增高心肌細胞搏動頻率和降低心肌細胞活性，Meto阻斷則可顯著降低心肌細胞搏動頻率和顯著提高細胞活性；而PD98059單獨處理則對心肌細胞搏動頻率無明顯影響，但PD98059處理后可在一定程度上抑制Meto提高細胞活性的作用。(2)與Con組比較，NE單獨處理可顯著上調心肌細胞Cx43 mRNA表達(P<0.01)；而與NE組比較，Meto(P<0.01)或PD98059(P<0.01)的單獨干預均可顯著抑制Cx43 mRNA的表達，且Meto和PD98059兩者共處理心肌細胞可進一步抑制NE上調Cx43 mRNA表達的作用(P<0.01)。 (3)與NE組比較，Meto可顯著抑制NE誘導的心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3表達增加(P<0.01)，PD98059和Meto兩者共處理后可進一步增強Meto對p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3表達的抑制(P<0.01)；而PD98059單獨處理對NE誘導的心肌細胞p-Cx43和活化caspase-3表達增加則無顯著影響(P>0.05)。結論美托洛爾對NE誘導的心肌細胞凋亡的抑制作用與其獨特的Cx43磷酸化抑制作用有關,該作用可能部分經由ERK1/2通路介導。

乳鼠心肌細胞； 美托洛爾； 去甲腎上腺素； 縫隙連接蛋白43

縫隙連接蛋白43(connexin 43,Cx43)是心臟中表達最豐富的連接蛋白，其構成的縫隙連接(gap junction, GJ)通道介導心肌細胞間的電偶聯(lián)及化學信息交流。有學者發(fā)現(xiàn)高β1選擇性的腎上腺素受體阻斷劑美托洛爾(metoprolol,Meto)不同異構體均能阻止Cx43構成的GJ的降解而上調離體乳鼠心肌細胞Cx43的表達和改變Cx43磷酸化水平，且可能通過MAPK信號轉導通路來實現(xiàn)這一調控作用[1-3]。已知在異丙腎上腺素刺激下，心肌細胞中Cx43 mRNA及蛋白表達的增加主要是通過細胞外信號調節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2， ERK1/2)通路實現(xiàn)[3]。ERK1/2是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶中的一種，為有絲分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)中的一種亞型。MAPK 信號轉導通路是心肌細胞凋亡的主要信號轉導通路[4-5]。

已知交感神經興奮及高去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)水平是心力衰竭(heart failure，HF)患者體液的主要特征。我們前期研究發(fā)現(xiàn)在壓力負荷型HF大鼠中隨著Meto治療劑量的逐級增加磷酸化Cx43(phosphorylated connexin 43, p-Cx43)表達量出現(xiàn)逐級降低。為進一步探討Meto對NE刺激下心肌細胞Cx43磷酸化水平的調控是否具有心肌保護意義及其可能的信號轉導通路，我們用NE處理乳鼠心肌細胞，并用Meto及ERK1/2信號通路的上游特異性阻斷劑PD98059進行干預，探討Meto對抗NE毒性的心肌保護機制，為臨床防治HF提供理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1主要材料及試劑

Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM) 高糖培養(yǎng)基(Sigma)，胎牛血清(fetal bovine serum,FBS;JRH Bioscience)；ERK磷酸化抑制劑PD98059(Cell Signaling Technology)；重酒石酸去甲腎上腺素(Sigma)、酒石酸美托洛爾(Sigma)；噻唑藍(methyl thiazoyltetrazolium，MTT)(Sigma)；總RNA提取試劑盒(Omega)，PrimeScriptTMRT-PCR Kit(TaKaRa)；p-Cx43兔抗鼠多克隆抗體、磷酸化p44/42 MAPK (p-ERK1/2) 兔抗鼠單克隆抗體和cleaved caspase-3兔抗鼠單克隆抗體(Cell Signaling Technology)，抗GAPDH兔多克隆抗體(北京康為)。

2方法

2.1新生大鼠心肌細胞培養(yǎng)及實驗分組 取出生1～2 d Sprague-Dawley(SD)新生大鼠(由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號No.4402101396)心臟分離和培養(yǎng)心肌細胞，方法參考文獻[3]。動物處置符合暨南大學醫(yī)學院實驗動物倫理委員會的相關管理規(guī)定。心肌細胞懸液接種于6孔細胞培養(yǎng)板中，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)。在含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)48 h后已貼壁并已伸展，3～4 d時搏動性好，吸出培養(yǎng)液換成無血清的DMEM培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后加入不同藥物，細胞處理分以下各組：(1)對照(control，Con)組(n=6)：心肌細胞不作任何處理；(2) NE組(n=6)：在細胞中加入0.1 μmol/L NE孵育24 h；(3) NE+Meto組(n=6):細胞中同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h；(4)NE+Meto+PD98059組(NE+Meto+PD組，n=6):細胞中提前30 min加入10 μmol/L PD98059，后同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h；(5)NE+PD98059組(NE+PD組，n=6)，細胞中提前30 min加入10 μmol/L PD98059，后加入0.1 μmol/L NE孵育24 h。

2.2心肌細胞搏動頻率計算 倒置顯微鏡下觀察在NE和(或)Meto處理前及處理24 h后在培養(yǎng)板中的各組乳鼠心肌細胞，每一孔分為4個象限。選取節(jié)律正常的細胞簇進行記錄,計算在每一象限的每分鐘心肌細胞自發(fā)搏動次數(shù)，取4個象限的平均值。每組重復6次實驗。

2.3細胞活性檢測 采用MTT法檢測心肌細胞活性。藥物處理實驗結束時，細胞接種到96孔板，5×104cells/well,加入含5 g/L MTT的1×PBS溶液20 μL，繼續(xù)在培養(yǎng)箱內(37 ℃、2%CO2)培養(yǎng)4 h后吸棄溶液，每孔加入150 μL DMSO振蕩反應，15 min后待結晶完全溶解，在波長570 nm處讀取A值間接反映活細胞數(shù)量。設置只加培養(yǎng)液的空白孔用于調零。細胞生存率計算公式：細胞生存率(%)=實驗組A值/對照組A值×100%。

2.4RT-PCR 采用Primer 5.0軟件,參照GenBank資料設計引物, 送北京三博遠志生物技術有限公司合成及測序。Cx43引物序列為正義鏈 5’-ATGGGTGACTGGAGTGCCTTGG-3’,反義鏈5’-AATCTCCAGGTCATCAGGCCG-3’(1 146 bp)。GAPDH引物序列為正義鏈5’-AATGCATCCTGCCACCACCAACTGC-3’,反義鏈5’-GGAGGCCATGTAGGCCATGAGGTC-3’(550 bp)。藥物處理24 h后棄去培養(yǎng)液，PBS沖洗并收集各組心肌細胞，參照Omega總RNA提取試劑盒說明書提取總RNA，測定濃度后1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗RNA質量。參照TaKaRa二步法試劑盒說明書行RT-PCR檢測。PCR反應條件為：94 ℃ 5 min預變性，94 ℃ 45 s，50 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，循環(huán)35次，最后72 ℃ 10 min。循環(huán)擴增結束后取10 μL PCR反應產物行2%瓊脂糖凝膠(含溴化乙啶)電泳，電壓80 V，時間60 min。結束后將凝膠置于凝膠成像系統(tǒng)進行觀察和拍照，通過NIH ImageJ軟件計算目的基因與GAPDH的灰度比值，半定量目的基因表達水平。

2.5蛋白表達檢測 采用 Western blotting法。每孔1×106細胞經過相應處理后，吸棄培養(yǎng)液，加入65 μL裂解液將樣本40 W超聲裂解3次，每次10 s。4 ℃ 12 000×g離心15 min，收取上清BCA法測定蛋白濃度。取50 μg蛋白上樣、10%聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉移到硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉室溫下封閉2 h。加入1∶400 p-Cx43兔抗鼠多克隆抗體、1∶1 000 cleaved caspase-3兔抗鼠單克隆抗體、1∶1 000 p-ERK1/2兔抗鼠單克隆抗體, 4 ℃孵育過夜，洗膜后加入辣根過氧化酶標記羊抗兔Ⅱ抗(1∶2 000)室溫下孵育2 h，以GAPDH(1∶2 000)抗體作內參照。洗膜后ECL試劑顯影、定影，Epson 彩色圖像掃描儀獲取蛋白質信號條帶圖像后運用ImageJ圖像分析軟件分析，通過計算目的蛋白與GAPDH蛋白灰度的比值來衡量其表達量。

3統(tǒng)計學處理

所得數(shù)據(jù)使用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊采用LSD法，方差不齊采用Games-Howell法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1不同藥物對乳鼠心肌細胞自發(fā)性搏動頻率的影響

各組心肌細胞在給予NE和(或)Meto處理前的基礎心肌細胞搏動頻率組間比較無顯著差異。在給予NE和(或)Meto處理后可見NE組及NE+PD組搏動頻率較Con組均顯著增高(P<0.01)，而NE組及NE+PD組之間則無顯著差異；NE+Meto組及NE+Meto+PD組搏動頻率亦較Con組均顯著增高(P<0.01)，與NE組比較則均有所下降(P<0.05)，而NE+Meto組及NE+Meto+PD組之間的差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1不同藥物對成簇大鼠乳鼠心肌細胞自發(fā)性搏動頻率的影響

Table 1. Effects of different drugs on spontaneously beating rate of clustered neonatal rat cardiomyocytes (min-1. Mean±SD.n=6)

Group0h24hCon104.67±5.92103.50±5.79NE102.50±6.69155.83±6.01**NE+Meto101.33±4.76133.83±2.48**#NE+Meto+PD103.83±2.64135.50±3.21**#NE+PD105.33±7.28154.67±5.47**

**P<0.01vsCon group;#P<0.05vsNE group.

2MTT法檢測心肌細胞活性結果

與Con組比較，NE組細胞活性顯著降低(54.67%±6.62%，P<0.01)；與NE組比較，NE+Meto組(80.33%±3.44%，P<0.01)及NE+Meto+PD(72.50%±3.39%，P<0.01)的細胞活性顯著增高，而NE+PD組(56.83%±6.31%)細胞活性變化無顯著差異；NE+Meto組與NE+Meto+PD組之間細胞活性差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖1。

Figure 1. MTT analysis of neonatal rat cardiomyocytes viability in various groups. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCon group;P<0.01vsNE group;#P<0.05vsNE+Meto group.

圖1MTT法分析各組大鼠乳鼠心肌細胞活性

3Cx43mRNA的RT-PCR結果

RT-PCR結果顯示，與Con組(Cx43/GAPDH：0.36±0.05)比較，NE處理可顯著上調Cx43 mRNA表達，差異顯著(P<0.01)；與NE組(Cx43/GAPDH：1.25±0.07)比較， NE+Meto組(Cx43/GAPDH：0.52±0.06，P<0.01)、NE+Meto+PD組(Cx43/GAPDH：0.22±0.06，P<0.01)和NE+PD組(Cx43/GAPDH：0.35±0.06，P<0.01)Cx43 mRNA表達均顯著下調，差異有統(tǒng)計學意義；進一步行NE+Meto組、NE+Meto+PD組和NE+PD組各組間兩兩比較，Cx43 mRNA表達差異亦具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見圖2。

4磷酸化Cx43、磷酸化ERK1/2及活化caspase-3蛋白Westernbloting檢測結果

從圖3及表2可見，與Con組比較，NE組p-Cx43、p-ERK1/2及cleaved caspase-3表達顯著增加(P<0.01)；與NE組比較，NE+Me組及NE+Meto+PD組的p-Cx43、p-ERK1/2及cleaved caspase-3表達顯著減少(P<0.01)，NE+PD組p-ERK1/2表達亦顯著減少(P<0.01)，而NE+PD組p-Cx43、cleaved caspase-3表達較NE組無顯著差異。進一步兩兩間比較NE+Meto+PD組較NE+Meto組的p-Cx43、p-ERK1/2及cleaved caspase-3表達顯著減少(P<0.01)，NE+Meto+PD組較NE+PD組的p-Cx43(P<0.01)、p-ERK1/2(P<0.05)及cleaved caspase-3(P<0.01)表達亦顯著減少。

Figure 2. Semi-quantitative analysis of neonatal rat cardiomyocyte Cx43 mRNA expression in various groups by RT-PCR. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCon group;P<0.01vsNE group.

圖2各組乳鼠心肌細胞Cx43mRNART-PCR半定量分析

Figure 3. Expression of p-Cx43,p-ERK1/2 and cleaved caspase-3 proteins in neonatal rat cardiomyocytes in various groups.

圖3各組乳鼠心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和cleavedcaspase-3蛋白的表達

表2各組乳鼠心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和cleavedcaspase-3蛋白的表達

Table 2. Semi-quantitative analysis of neonatal rat cardiomyocyte p-Cx43, p-ERK1/2 and cleaved caspase-3 protein expression by Western blotting in various groups (Mean±SD.n=6)

Groupp-Cx43/GAPDHp-ERK1/2/GAPDHCleavedcaspase-3/GAPDHCon0.38±0.040.79±0.080.30±0.06 NE1.59±0.06**1.33±0.16**0.91±0.07**NE+Meto1.23±0.16##1.19±0.08##0.61±0.04##NE+Meto+PD1.12±0.10##▲▲■■0.80±0.07##▲▲■0.35±0.05##▲▲■■NE+PD1.63±0.070.89±0.030.95±0.09

**P<0.01vsCon group;##P<0.01vsNE group;▲▲P<0.01vsNE+Meto group;■P<0.05,■■P<0.01vsNE+PD group.

討 論

HF作為各種病因導致心臟收縮及舒張功能損傷的最終共同通路，其中心肌細胞凋亡在心力衰竭的發(fā)病機制中占有重要地位。作為交感神經系統(tǒng)的主要神經遞質，NE的慢性刺激對心臟有直接及間接的毒性作用，大量研究證實NE誘導心肌細胞凋亡是心衰發(fā)生發(fā)展的重要機制[6]。NE的有害作用主要通過激動心臟α及β1腎上腺素受體介導，而腎上腺素受體阻滯劑可對抗這一效應從而抑制NE的心臟毒性而抑制心肌細胞凋亡給心衰的治療帶來了新希望。然而NE導致心肌細胞凋亡的具體機制仍不清楚，涉及多條信號轉導通路[2,5]。

目前研究較多的心肌細胞凋亡信號轉導通路主要包括：(1)MAPK 信號轉導通路；(2)死亡受體通路,即細胞因子(Fas/TNF-α受體)信號轉導通路；(3)線粒體死亡通路(由促凋亡Bax家族蛋白和抗凋亡Bcl- 2家族蛋白及下游的凋亡效應蛋白caspase-3調節(jié)；(4)活性氧(reactive oxygen species，ROS)通路(線粒體)；(5)內質網(wǎng)應激死亡通路(未折疊蛋白反應)。其中caspase-3在細胞凋亡中起著不可替代的作用，處于凋亡級聯(lián)反應中關鍵位置和中心環(huán)節(jié)，是細胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶，其含量增加，可引發(fā)細胞凋亡[7]。第一信使如NE作用于細胞膜受體后可同時激活多條通路，各通路之間形成信號網(wǎng)絡進行對話(cross-talk)形成動態(tài)平衡而調控病理生理效應，不能孤立理解每一條信號轉導通路[8]。

本實驗研究中我們觀察到在MTT實驗中NE顯著降低心肌細胞活性，而Meto可顯著提高心肌細胞活性，而PD98059處理后可在一定程度上抑制Meto改善心肌細胞活性。而在心肌細胞搏動實驗中NE處理可顯著增高心肌細胞搏動頻率，Meto阻斷則可顯著降低心肌細胞搏動頻率，而PD98059單獨處理則對心肌細胞搏動頻率無明顯影響。故推測Meto顯著提高心肌細胞活性的作用不單純依賴其β受體特別是β1受體阻斷作用，而與ERK1/2通路介導的下游信號轉導有關。在Cx43 mRNA檢測中發(fā)現(xiàn)美托洛爾或PD98059的單獨干預均可抑制NE誘導的Cx43 mRNA的表達上調，且美托洛爾和PD98059兩者共處理心肌細胞時可進一步抑制NE上調Cx43 mRNA表達。可見在去甲腎上腺素刺激下，心肌細胞中連接蛋白43 mRNA表達的增加與ERK1/2 通路介導的下游信號轉導密切相關。

但在各組乳鼠心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和cleaved caspase-3蛋白表達檢測比較中我們發(fā)現(xiàn)美托洛爾雖然可顯著抑制NE誘導的p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3的表達增加，且PD98059和美托洛爾共處理后可進一步增強美托洛爾對p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3表達的抑制；但PD98059單獨處理對NE誘導的p-Cx43和活化caspase-3表達增加無顯著影響。上述結果提示美托洛爾對細胞凋亡過程中最主要終末剪切酶caspase-3活化形式表達的抑制作用可能部分依賴ERK1/2通路，并與該通路介導的Cx43去磷酸化狀態(tài)的保持可能有關。

Cx構成的心臟GJ通道是心肌細胞間通訊的結構基礎，分子量小于1 kD、直徑小于1.5 nm的多種物質如代謝物、離子、第二信使、水分子等都可通過，并可在電興奮組織中傳導電沖動[9]。作為心臟中表達最豐富的Cx，Cx43的磷酸化與去磷酸化對GJ通道的功能有著非常重要的影響作用。我們前期的研究表明Cx43的羧基末端241～382為主要的磷酸化區(qū)，也是多種激素的識別位點，大多數(shù)蛋白質相互作用發(fā)生于此，羧基末端絲/蘇氨酸殘基的磷酸化程度決定著GJ通道的通透性[10]。在心肌細胞，Cx43的磷酸化使GJ通道關閉，去磷酸化使該通道開放。在心肌細胞，去磷酸化不僅可使GJ通道開放，而且是通道解聚的關鍵點，Cx43一旦去磷酸化，通道即開始解聚為Cx亞單位，Cx亞單位可進一步降解或轉入胞內儲存。新近研究發(fā)現(xiàn)在Cx43半通道的開放及胞內ERKs的激活抑制了骨細胞及成骨細胞的凋亡，這與維持細胞間生存信號(intracellular survival signaling)的交流和細胞穩(wěn)態(tài)有關[11-14]。

總之，美托洛爾對NE誘導心肌細胞凋亡的抑制作用與其獨特的Cx43磷酸化抑制作用有關,該作用可能部分經由ERK1/2通路介導。據(jù)此我們推測不同β受體阻斷劑對Cx43表達和磷酸化水平影響的差異可能與心肌細胞凋亡抑制水平存在相關，相關機制的進一步深入研究將為臨床合理選擇腎上腺素受體阻滯劑治療HF和開發(fā)新的HF治療靶點提供有力的細胞及分子水平的依據(jù)。

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Metoprololinhibitsnorepinephrine-inducedratcardiomyocyteapoptosisandconnexin43phosphorylation

LIANG Qing1,2, LI Zi-cheng1, KUANG Su-hua3, HUANG Wei-qing2, HUANG Min-jian2, LIN Jun-min2, LIANG Zi-jing2

(1DepartmentofCardiology,theFirstAffiliatedHospital,JinanUniversity,Guangzhou510630,China;2DepartmentofEmergencyMedicine,3DepartmentofCardiacSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510120,China.E-mail:zichengli@163.net)

AIM: To study the effects of metoprolol (Meto) on the apoptosis of neonatal rat cardiomyocytes and the phosphorylation of connexin 43 (Cx43) induced by norepinephrine (NE).METHODSNeonatal SD rat cardiomyocytes were divided into the following five groups (n=6 in each group): (1) control (Con) group: no treatment; (2) NE group: treatment with NE at 0.1 μmol/L for 24 h; (3) NE+Meto group: simultaneous treatment with NE and Meto both at 0.1 μmol/L for 24 h; (4) NE+Meto+PD98059 group: pretreatment with extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation inhibitor PD98059 at 10 μmol/L for 30 min and then treatment with NE and Meto both at 0.1 μmol/L for 24 h; (5) NE+PD98059 group: pretreatment with PD98059 at 10 μmol/L for 30 min and then treatment with NE at 0.1 μmol/L for 24 h. The beating rates of cardiomyocytes in various groups were calculated, and the viability of cardiomyocytes was assayed by MTT method. The Cx43 mRNA expression was detected by RT-PCR, and the protein expression of phosphorylated Cx43 (p-Cx43), phosphorylated ERK1/2 (p-ERK1/2) and cleaved caspase-3 was detected by Western blotting.RESULTS(1) Separate NE treatment could significantly increased the beating rate of cardiomyocytes and reduced cell viability, while Meto showed the opposite effects. PD98059 treatment had no significant effect on cardiomyocyte beating rate, but suppressed Meto to improve cell viability to some extent. (2) Compared with Con group, separate NE treatment significantly increased the Cx43 mRNA expression (P<0.01). Compared with NE group, Meto or PD98059 intervention could significantly inhibited Cx43 mRNA expression (bothP<0.01), and simultaneous treatment with Meto and PD98059 could further suppress Cx43 mRNA expression up-regulated by NE (P<0.01). (3) Compared with NE group, Meto significantly inhibited the increased p-Cx43, p-ERK1/2 and cleaved caspase-3 expression induced by NE (P<0.01), and simultaneous treatment with Meto and PD98059 could further enhance the inhibition of p-Cx43, p-ERK1/2 and cleaved caspase-3 expression by Meto (P<0.01). PD98059 treatment had no significant effect on the increased p-Cx43 and cleaved caspase-3 expression induced by NE (P>0.05).CONCLUSIONThe inhibitory effect of Meto on NE-induced cardiomyocyte apoptosis is related to the inhibition of Cx43 phosphorylation, which may be partly mediated via ERK1/2 pathway.

Neonatal rat cardiomyocytes; Metoprolol; Norepinephrine; Connexin 43

R541.6

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.019

1000- 4718(2013)11- 2024- 06

2013- 07- 17

2013- 08- 12

廣東省醫(yī)學科研基金資助(No.A2013251)；廣州市科技計劃(No.2010Y1-C941)；廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目(No.20131A011142)

△通訊作者 Tel: 020-38688665; E-mail: zichengli@163.net