王 旭, 張 帆, 徐 艷, 吳秀麗, 陳少華, 楊力建, 李 萡, 盧育洪, 李揚(yáng)秋,△
(暨南大學(xué) 1再生醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 2醫(yī)學(xué)院血液病研究所,3第一附屬醫(yī)院血液科, 廣東 廣州 510632)
MALT1基因2種轉(zhuǎn)錄本在正常人和B細(xì)胞白血病患者中的表達(dá)特點(diǎn)
王 旭1, 張 帆2, 徐 艷1, 吳秀麗2, 陳少華2, 楊力建2, 李 萡2, 盧育洪3, 李揚(yáng)秋1,2△
(暨南大學(xué)1再生醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,2醫(yī)學(xué)院血液病研究所,3第一附屬醫(yī)院血液科, 廣東 廣州 510632)
目的比較正常人和B細(xì)胞白血病患者外周血中黏膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤轉(zhuǎn)位基因1(MALT1)2種異構(gòu)體的分布和表達(dá)差異。方法根據(jù)MALT1基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),設(shè)計(jì)2對引物,通過建立2種轉(zhuǎn)錄本的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法分析8例B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)、8例B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B-CLL)和8例正常人的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中MALT1的表達(dá)情況。實(shí)時(shí)定量PCR分析各組樣本的MALT1 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果所有樣本中均能得到所預(yù)期的PCR產(chǎn)物,其中第1對引物可以擴(kuò)增出2條片段,分別為MALT1轉(zhuǎn)錄本1(包含第5、6、7、8、9外顯子)和MALT1轉(zhuǎn)錄本2(包含第5、6、8、9外顯子),第2對引物只能擴(kuò)增出1條包含轉(zhuǎn)錄本1的片段,所有PCR產(chǎn)物均通過核苷酸序列分析證實(shí)。MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本均在外周血中有表達(dá),并且MALT1轉(zhuǎn)錄本2表達(dá)水平高于轉(zhuǎn)錄本1。通過灰度分析發(fā)現(xiàn),在B-ALL中,MALT1轉(zhuǎn)錄本1的灰度與正常人相比顯著增高(P<0.05),而MALT1轉(zhuǎn)錄本2顯著降低(P<0.05);在B-CLL中,MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本的灰度與正常人相比無顯著差異(P>0.05)。此外,B-ALL中,MALT1 mRNA表達(dá)水平(中位數(shù):1.253)低于正常人(中位數(shù):1.976)(P=0.05);而B-CLL中,MALT1 mRNA的表達(dá)水平與正常人相比無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本均表達(dá)于正常和B細(xì)胞白血病樣本中,但B-ALL中兩者的表達(dá)水平有所差異,同時(shí),B-ALL的MALT1 mRNA表達(dá)水平也有所降低。B-ALL中MALT1基因表達(dá)的異??赡苡绊慚ALT1信號(hào)通路而與疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
黏膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤轉(zhuǎn)位基因1; 轉(zhuǎn)錄本; 白血病,B細(xì)胞; 基因表達(dá)
黏膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤轉(zhuǎn)位蛋白1 (mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1, MALT1) 是核因子κB (nuclear factor κB, NF-κB)信號(hào)通路中的一種調(diào)控蛋白,其功能:(1)作為支架蛋白促進(jìn)依賴于IKK的NF-κB的活化;(2)類似于細(xì)胞凋亡蛋白酶 (caspase) 的蛋白,水解一些NF-κB相關(guān)因子,故MALT1又被稱為paracaspase[1-2]。MALT1在T細(xì)胞受體介導(dǎo)的NF-κB活化和調(diào)控淋巴細(xì)胞增殖和分化的過程中具有重要作用[3-4]。根據(jù)基因庫資料顯示MALT1基因存在2種轉(zhuǎn)錄本,但這2種轉(zhuǎn)錄本在正常人和血液腫瘤中的分布特點(diǎn)尚未見報(bào)道。本研究首先分析MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本在正常人和B細(xì)胞白血病中的分布和表達(dá)特點(diǎn),期望為以MALT1為靶點(diǎn)治療B細(xì)胞白血病的研究提供依據(jù)。
1樣本
收集正常人、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B-cell chronic lymphocytic leukemia,B-CLL)和B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-cell acute lymphocytic leukemia,B-ALL)患者外周血樣本各8例,利用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。Toledo(彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤B細(xì)胞)、EJ-1(彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤B細(xì)胞)、Jurkat(淋巴細(xì)胞瘤T細(xì)胞)、Motl4(急性淋巴母細(xì)胞白血病T細(xì)胞)、K562(慢性髓性白血病細(xì)胞)和HL-60(急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞)細(xì)胞株作為對照。
2主要方法
2.1RNA提取和cDNA合成 應(yīng)用RNAzol試劑盒提取RNA 并應(yīng)用隨機(jī)引物和反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA 第1鏈, 均按常規(guī)方法進(jìn)行。合成cDNA 經(jīng)過β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2M)的RT-PCR鑒定合成質(zhì)量。
2.2設(shè)計(jì)并合成PCR引物 根據(jù)基因庫報(bào)道的人類MALT1基因(Accession No. NM006785, NM173844)2種轉(zhuǎn)錄本的序列特點(diǎn)設(shè)計(jì)引物(表1), 引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。轉(zhuǎn)錄本2比轉(zhuǎn)錄本1缺少33個(gè)堿基,包含MALT1轉(zhuǎn)錄本1第6個(gè)外顯子的最后1個(gè)堿基,第7個(gè)外顯子和第8個(gè)外顯子的第1個(gè)堿基(圖1)。第1對引物分別位于第5和第9外顯子上,即能確定擴(kuò)增出2個(gè)相差33 bp的片段,MALT1轉(zhuǎn)錄本1和MALT1轉(zhuǎn)錄本2;而第2對引物的上游引物與第1對引物上游引物相同,下游引物位于第7外顯子上(轉(zhuǎn)錄本2缺失的區(qū)域內(nèi)),僅能擴(kuò)增出MALT1轉(zhuǎn)錄本1的基因片段。
表1 用于RT-PCR檢測的MALT1基因引物序列
Figure 1. Diagrams of the 2MALT1 transcript variants and the sequencing results. A: the diagram ofMALT1 transcript variant 1;B: the diagram ofMALT1 transcript variant 2; C:the sequencing result of part ofMALT1 transcript variant, arrows showing the segment deleted inMALT1 transcript variant 2 (33 bp); D: the sequencing result of part ofMALT1 transcript variant.
圖1MALT1基因2種轉(zhuǎn)錄本示意圖和測序結(jié)果
2.3RT-PCR 總反應(yīng)體系為20 μL,含1 μL cDNA模板、1.25 U Taq聚合酶、0.1 mmol/L dNTP、4 μL 5× PCR 緩沖液、1.5 mmol/L MgCl2和0.5 μmol/L的上、下游引物(同時(shí)檢測2種轉(zhuǎn)錄本所采用引物為MALT1-1F和MALT1-1R,即引物對MALT1-1;而檢測轉(zhuǎn)錄本1所采用引物為MALT1-1F和MALT1-2R,即引物對MALT1-2)。反應(yīng)在PCR 擴(kuò)增儀中進(jìn)行。反應(yīng)分別設(shè)陽性對照、陰性對照及樣品組。反應(yīng)條件: 94 ℃ 30 s (首次10 min),59 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,末次10 min, 共35個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物于3%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳并分析結(jié)果[5]。
2.4核苷酸測序 隨機(jī)選取引物擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物各1份進(jìn)行核苷酸序列分析。具體操作: 20 μL PCR產(chǎn)物置于3%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳, 引物對MALT1-2 PCR產(chǎn)物只有1條帶,而引物對MALT1-1的PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳得到2個(gè)產(chǎn)物,分別收集2產(chǎn)物條帶的瓊脂糖凝膠。將產(chǎn)物置于干凈的離心管中,普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物并純化, 純化的產(chǎn)物送上海英駿生物技術(shù)有限公司測序[6]。
2.5實(shí)時(shí)定量RT-PCR 利用SYBR GreenⅠ染料進(jìn)行各基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測,擴(kuò)增總反應(yīng)體系為20 μL,應(yīng)用Real Master Mix試劑盒(Tiangen,北京),其中包括2× Real Master Mix 9 μL、 10 mmol/L上、下游引物0.5 μL以及1 μL cDNA等。每一標(biāo)本均設(shè)復(fù)孔,每一基因均設(shè)陰性對照孔。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性15 min后,共進(jìn)行45個(gè)循環(huán)擴(kuò)增,每一循環(huán)包括95 ℃ 30 s,60 ℃ 40 s。隨后,以0.17 ℃/s變化速度從55 ℃到95 ℃每隔2 s記錄1次熒光值,獲得熔解曲線。反應(yīng)在CFX96熒光定量PCR儀(Bio-Rad)中進(jìn)行[7]。
2.6MALT1 mRNA表達(dá)水平的計(jì)算方法 采用相對定量法分別分析B-ALL患者、B-CLL患者和正常人PBMC中MALT1 mRNA表達(dá)水平的差異,以β2M為內(nèi)參照。計(jì)算公式[8]為:相對mRNA表達(dá)量=2-ΔCt×100%,其中,ΔCt=Ct(MALT1)-Ct(β2M)。
2.7灰度分析 應(yīng)用凝膠成像分析軟件Gel-Pro Analyzer 4(Media Cybernetics)對正常人、B-ALL和B-CLL 3份凝膠圖像進(jìn)行灰度分析,得出MALT1轉(zhuǎn)錄本1和MALT1轉(zhuǎn)錄本2所占的灰度比。
3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
利用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示,組間比較均采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
利用本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)針對MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本檢測的3個(gè)引物,分別檢測同時(shí)含有2種MALT1轉(zhuǎn)錄本(圖2A)和僅含MALT1轉(zhuǎn)錄本1(圖2B)的PCR產(chǎn)物。所擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物與預(yù)期產(chǎn)物片段大小相一致。圖2A可見擴(kuò)增出2條不同大小的片段分別為MALT1的2種轉(zhuǎn)錄本,224 bp和191 bp;而圖2B則可見所擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物為單一的MALT1轉(zhuǎn)錄本1基因片段,大小為195 bp。分別將凝膠電泳中所見的2種不同大小的PCR產(chǎn)物分離、純化和進(jìn)行序列分析,證明其核苷酸序列與2種轉(zhuǎn)錄本的序列相同,見圖1C、D。
Figure 2. The expression of the 2MALT1 transcript variants in different hematologic malignancy cell lines.A:PCR products amplified by MALT1-1F and MALT1-1R primers; B: PCR products amplified by MALT1-1F and MALT1-2R primers. M: DNA marker; 1: Toledo; 2: EJ-1; 3: Jurkat; 4: Motl4; 5: K562; 6: HL-60; 7, 8: healthy individuals.
圖2MALT12種轉(zhuǎn)錄本在不同血液腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá)
進(jìn)一步比較正常人、B-ALL患者和B-CLL患者樣本中MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,所有樣本均表達(dá)2種轉(zhuǎn)錄本,在正常人和B細(xì)胞白血病患者的大多數(shù)樣本中MALT1轉(zhuǎn)錄本2比轉(zhuǎn)錄本1表達(dá)量要高,見圖3。在所檢測的6種細(xì)胞株(Toledo、EJ-1、Jurkat 4、Motl4、K562和HL-60)中,2種轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平差別不大,見圖2A。
Figure 3. The expression of the 2MALT1 transcript variants in PBMC from healthy individuals (A), B-CLL patients (B) and B-ALL patients (C). M: DNA marker.
圖3MALT12種轉(zhuǎn)錄本在B-ALL患者、B-CLL患者和正常人PBMC中的表達(dá)
對B-ALL和B-CLL 患者2種轉(zhuǎn)錄本的凝膠成像進(jìn)行灰度分析,并分別與正常人進(jìn)行秩和檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),B-ALL患者中MALT1轉(zhuǎn)錄本1的灰度比(中位數(shù)為13.3725)與正常人(中位數(shù)為7.205)相比顯著增高(P<0.05),MALT1轉(zhuǎn)錄本2的灰度比(中位數(shù)為86.626)與正常人(中位數(shù)為92.795)相比顯著降低(P<0.05);B-CLL患者中MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本的灰度比(中位數(shù)分別為6.765和93.235)與正常人(中位數(shù)分別為7.205和92.795)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而B-ALL患者中的MALT1轉(zhuǎn)錄本1的灰度比(中位數(shù)為13.372)較B-CLL(中位數(shù)為6.765)有明顯增高(P<0.05),MALT1轉(zhuǎn)錄本2的灰度比(中位數(shù)為86.628)較B-CLL(中位數(shù)為93.235)有明顯降低(P<0.05)。
對MALT1 mRNA表達(dá)量的定量PCR結(jié)果進(jìn)行秩和檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在B-ALL患者中MALT1 mRNA的表達(dá)量(中位數(shù)為1.253)較正常人(中位數(shù)為1.976)降低(P=0.05);在B-CLL患者中,MALT1 mRNA表達(dá)量(中位數(shù)為3.560)與正常人(中位數(shù)為1.976)相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而B-ALL MALT1 mRNA表達(dá)量較B-CLL差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
Figure 4. Relative expression level of MALT1 mRNA in PBMC from B-ALL patients,B-CLL patients and healthy individuals. ·2: outlier.
圖4B-ALL患者、B-CLL患者與正常人中MALT1mRNA的相對表達(dá)水平
在淋巴細(xì)胞中,MALT1與B細(xì)胞淋巴瘤10 (B-cell lymphoma/leukemia 10, Bcl-10)和含caspase募集結(jié)構(gòu)域的膜相關(guān)鳥苷酸激酶1 [caspase-recruitment domain (CARD)-containing membrane-associated guanylate kinase protein 1, CARMA1] 結(jié)合形成CBM復(fù)合物,活化NF-κB,對于調(diào)控淋巴細(xì)胞的增殖和分化有著重要的作用。故MALT1 mRNA或蛋白的異常表達(dá),可造成NF-κB的持續(xù)性表達(dá)[2,9],是一些淋巴瘤發(fā)病的主要原因[10]。
MALT1基因位于染色體18q21區(qū)域,全長78 753 bp,含有位于N端的死亡結(jié)構(gòu)域、與其緊連的2個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和C端的caspase樣結(jié)構(gòu)域[10]?;驇熨Y料顯示人類MALT1存在2種轉(zhuǎn)錄本。但并沒有詳細(xì)文獻(xiàn)報(bào)道2種轉(zhuǎn)錄本在正常人和不同疾病患者中表達(dá)的差異性,為了進(jìn)一步研究MALT1在淋巴細(xì)胞腫瘤中的作用特點(diǎn),本研究首先比較分析正常人與B細(xì)胞白血病患者中MALT1轉(zhuǎn)錄本分布差異特點(diǎn)。MALT1轉(zhuǎn)錄本2相較于轉(zhuǎn)錄本1缺少第7個(gè)外顯子、第6外顯子的最后1個(gè)和第8外顯子第1個(gè)堿基。根據(jù)這個(gè)基因結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn),本研究通過設(shè)計(jì)可同時(shí)擴(kuò)增2種轉(zhuǎn)錄本的引物和定點(diǎn)在轉(zhuǎn)錄本2缺失區(qū)域的引物,后者只能擴(kuò)增轉(zhuǎn)錄本1這一種產(chǎn)物,PCR和核苷酸序列分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了與預(yù)期設(shè)計(jì)完全相同。
從電泳結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn),B-ALL患者、B-CLL患者和正常人外周血中都表達(dá)MALT1的2種轉(zhuǎn)錄本,并且轉(zhuǎn)錄本2比轉(zhuǎn)錄本1表達(dá)量高,兩者之間表達(dá)量相差較大。經(jīng)過灰度分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在B-ALL中,MALT1轉(zhuǎn)錄本1灰度比正常人要高。B-ALL中MALT1轉(zhuǎn)錄本1相對高表達(dá)的特點(diǎn)是否與B-ALL發(fā)生發(fā)展有著一定的相關(guān)性,有待進(jìn)一步研究。有趣的是,定量分析則發(fā)現(xiàn)MALT1 mRNA(包括2種轉(zhuǎn)錄本)的表達(dá)水平低于正常人,該結(jié)果與既往發(fā)現(xiàn)的MALT1高表達(dá)在黏膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤發(fā)生中具有重要作用的結(jié)果有所不同[4],這可能由于MALT1調(diào)控細(xì)胞的增殖和分化是通過與Bcl-10結(jié)合激活NF-κB來實(shí)現(xiàn)的,單獨(dú)的MALT1并沒有激活NF-κB的能力。有報(bào)道認(rèn)為,MALT1的缺失對NF-κB的活化影響不大[10-11],因此,MALT1的低表達(dá)可能不是介導(dǎo)B-ALL發(fā)生的主要因素。其次,MALT1是腫瘤抑制因子A20的降解介導(dǎo)分子,后者擁有抗凋亡和抑制腫瘤的雙重功能,而MALT1的低表達(dá),可能有助于A20發(fā)揮抗凋亡作用而在B-ALL的發(fā)生中起到相應(yīng)的作用[12-15]。然而,這些推測還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究發(fā)現(xiàn)B-CLL患者M(jìn)ALT1的2種轉(zhuǎn)錄本分布和表達(dá)水平與正常對照組沒有明顯差異,提示MALT1可能與B-CLL細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路表達(dá)變化關(guān)系不大。而對B-ALL和B-CLL患者 2種轉(zhuǎn)錄本的分布和表達(dá)水平的分析發(fā)現(xiàn),兩方面都存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,值得進(jìn)一步比較B-ALL與B-CLL之間的差異,以期發(fā)現(xiàn)其可能的新分子機(jī)制。此外,我們在多個(gè)不同的白血病細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)MALT1 2種轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)水平很接近,與我們檢測樣本有很大的不同,這一結(jié)果值得我們進(jìn)一步研究不同白血病中MALT1轉(zhuǎn)錄本1的高表達(dá)特點(diǎn)和意義。
總之,本研究建立了檢測2種MALT1轉(zhuǎn)錄本的方法,并首先報(bào)道了其在正常人和B細(xì)胞白血病之間分布和表達(dá)的差異特點(diǎn),這些結(jié)果有助于深入探討MALT1在B-ALL細(xì)胞中的作用特點(diǎn)。進(jìn)一步構(gòu)建MALT1基因轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)載體,分析其功能差異將是一項(xiàng)有意義的工作。
[1] Brüstle A, Brenner D, Knobbe CB, et al. The NF-κB regulator MALT1 determines the encephalitogenic potential of Th17 cells[J]. J Clin Invest, 2012, 122(12):4698-4709.
[2] Schulze-Luehrmann J, Ghosh S. Antigen-receptor signaling to nuclear factor κB[J]. Immunity, 2006, 25(5): 701-715.
[3] Thome M. CARMA1, BCL-10 and MALT1 in lymphocyte development and activation[J]. Nature Rev Immunol, 2004, 4(5):348-359.
[4] Hara H, Iizasa E, Nakaya M, et al. L-CBM signaling in lymphocyte development and function[J]. J Blood Med, 2010,1: 93-104.
[5] 毛文哲, 許 超, 李揚(yáng)秋, 等. 長期培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表達(dá)[J]. 中國病理生理雜志,2012,28(6):1051-1056.
[6] 陳 宇, 鄭海濤, 陳少華, 等.PPP2R5C轉(zhuǎn)錄本在正常人和血液腫瘤病人中的分布情況[J]. 暨南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版, 2010, 31(6): 550-554.
[7] 曾可靜,李 萡,牛宇哲,等. 職業(yè)苯接觸工人外周血T-bet和GATA-3表達(dá)變化的特點(diǎn)[J].中國病理生理雜志,2011, 27(9):1807-1810.
[8] Stams WA, den Boer ML, Beverloo HB, et al. Sensitivity to L-aspara-ginase is not associated with expression levels of asparagine synthetase in t(12; 21)+pediatric ALL[J]. Blood, 2003, 101(7): 2743-2747.
[9] Thome M. Multifunctional roles for MALT1 in T-cell activation[J]. Nat Rev Immunol, 2008, 8(7): 495-500.
[10] 李百周. CARMA1-BCL10-MALT1,NF-κB信號(hào)通路傳導(dǎo)與淋巴瘤[ J ]. 中國癌癥雜志,2007, 17(9): 733-739.
[11] Thome M, Charton JE, Pelzer C, et al. Antigen receptor signaling to NF-kB via CARMA1, BCL10, and MALT1[J]. Cold Spring Harb Perspect Biol, 2010, 2(9):a003004.
[12] Malinverni C, Unterreiner A, Staal J, et al. Cleavage by MALT1 induces cytosolic release of A20[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2010, 400(4):543-547.
[13] Coornaert B, Baens M, Heyninck K, et al. T cell antigen receptor stimulation induces MALT1 paracaspase-mediated cleavage of the NF-κB inhibitor A20[J]. Nat Immunol, 2008, 9(3):263-271.
[14] Beyaert R, Heyninck K, Van Huffel S. A20 and A20-binding proteins as cellular inhibitors of nuclear factor-kappa B-dependent gene expression and apoptosis[J]. Biochem Pharmacol, 2000, 60(8):1143-1151.
[15] 李揚(yáng)秋,楊力建,陳少華,等. 從炎癥調(diào)節(jié)因子到腫瘤抑制因子——A20的特點(diǎn)及其在淋巴細(xì)胞腫瘤發(fā)生中的作用[J]. 循證醫(yī)學(xué), 2011, 11(1):54-59.
TranscriptsofMALT1geneinhealthyindividualsandB-cellleukemiapatients
WANG Xu1, ZHANG Fan2, XU Yan1, WU Xiu-li2, CHEN Shao-hua2, YANG Li-jian2, LI Bo2, LU Yu-hong3, LI Yang-qiu1,2
(1KeyLaboratoryforRegenerativeMedicineofMinistryofEducation,2InstituteofHematology,SchoolofMedicine,3DepartmentofHaematology,theFirstAffiliatedHospital,JinanUniversity,Guangzhou510632,China.E-mail:jnyangqiuli@163.com)
AIM: To investigate the difference of the distribution and expression of mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation gene 1(MALT1) transcripts in healthy individuals and B-cell leukemia patients.METHODSTwo pairs of primers were designed according to the sequences of differentMALT1 transcripts. RT-PCR was performed to detect the distribution ofMALT1 gene in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 8 healthy individuals, 8 patients with B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL) and 8 patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL). The mRNA expression of MALT1 in all samples from the 3 groups was determined by real-time PCR.RESULTSExpected amplicons were amplified by the 2 primer pairs, and 2 PCR products of different sizes were amplified by the first primer pair (the larger one included exons 5, 6, 7, 8 and 9, and the small one included exons 5, 6, 8 and 9). Moreover, theMALT1 transcript variant 1 was conformed by the second primer pair. All the PCR products were confirmed by the nucleotide sequencing analysis. Two transcripts ofMALT1 were identified in all samples from both healthy individuals and B-cell leukemia patients, and the expression level ofMALT1 was predominant in transcript variant 2. The gray level ofMALT1 transcript variant 1 in B-ALL patients was significantly higher than that in healthy individuals, whereas theMALT1 transcript variant 2 was significantly lower than that in healthy group. However, no significant difference of the gray level was found in the 2MALT1 transcript variants in B-CLL group as compared with healthy group. In addition, the expression level of MALT1 mRNA in B-ALL group (median=1.253) was lower than that in healthy group (median=1.976,P=0.05), while no significant difference of the expression level of MALT1 mRNA between B-CLL patients and healthy individuals was found.CONCLUSIONTwo transcripts ofMALT1 have common distribution in both healthy individuals and B-cell leukemia patients, while the significant differences of distribution ofMALT1 transcript variants and the expression level of MALT1 mRNA are characterized in B-ALL patients. The abnormal expression ofMALT1 gene might involve in the genesis and development of leukemia via MALT1 signaling pathway.
Mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation gene 1; Transcript variants; Leukemia, B-cell; Gene expression
R329.21
A
10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.06.028
1000- 4718(2013)06- 1124- 06
2012- 12- 12
2013- 04- 24
國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.91129720);廣東省科技計(jì)劃(國際合作)項(xiàng)目(No.2012B050600023)
△通訊作者 Tel: 020-85226877; E-mail: jnyangqiuli@163.com