牛血液采集及血清分離技術(shù)

李 強(qiáng)

（1.甘肅省張掖市甘州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 張掖 734000；2.國(guó)家肉牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系張掖綜合試驗(yàn)站，甘肅 張掖 734000）

近年來各級(jí)畜牧獸醫(yī)部門，每年都需要對(duì)畜禽進(jìn)行采血及血清分離的工作，數(shù)量逐年增多且日趨頻繁，如血常規(guī)檢查、血片制作、紅細(xì)胞泥采集分離、病原學(xué)檢查，尤其是一年數(shù)次的抗體（免疫抗體、感染抗體）監(jiān)測(cè)及范圍廣泛的布魯氏桿菌病檢疫監(jiān)測(cè)等。在工作中發(fā)現(xiàn)，有的技術(shù)人員在采血及分離血清時(shí)，時(shí)常有失敗現(xiàn)象發(fā)生，如溶血、分離不出血清、血清如膠凍樣物質(zhì)及腐敗等情況，這導(dǎo)致反復(fù)采血而引起養(yǎng)殖場(chǎng)戶的反感、不配合甚至拒絕，也造成人財(cái)物的浪費(fèi)，為此，筆者現(xiàn)將畜禽采血及血清分離技術(shù)等方面的一些做法與大家探討。

1 材料準(zhǔn)備

保定用牛韁繩、麻繩、牛鼻鉗，醫(yī)用鑷子、止血鉗、醫(yī)用膠貼、醫(yī)用止血帶、剪毛剪，微量移液器、移液頭，70%～75%酒精、5%～10%碘酊、滅菌干棉球，消毒18＃、16＃、12＃及9＃針頭，采血管或潔凈干燥的青霉素瓶、一次性靜脈采血真空管及針頭、一次性注射器，工作服、帽、口罩、一次性手套、膠鞋、鞋套，采血登記表（見表1）、記錄用筆、玻璃鉛筆及冷藏箱、消毒液（用于工作人員及器械消毒）等。

表1 采血登記表 年月 日

2 牛的采血技術(shù)

2.1 牛血液采集技術(shù)

2.1.1 頸靜脈采血法 穿戴好工作服、帽、口罩、膠鞋及手套等，用韁繩保定好牛，如牛跳動(dòng)不安，需要夾上牛鼻鉗；采血部位：其解剖位置為牛頸靜脈溝；采血部位先用剪毛剪剪毛后，用10%碘酊棉球消毒，再以75%酒精棉球脫碘消毒；如在頸部左側(cè)采血（以左側(cè)為例），用左手的食指、中指及無(wú)名指（或半握拳）壓住采血部位稍下（向心）端的頸靜脈，使靜脈回流受阻，靜脈怒張，這時(shí)用右手拇指、食指及中指持緊消毒后并干燥的18＃針頭，用飛針方式扎入頸靜脈（如用真空采血方法，因針頭尖銳且較細(xì)，輕輕即可刺入頸靜脈，當(dāng)針頭后方見血后，應(yīng)迅速將連接針頭的另一端插入真空管），血液便可從針頭流出（或滴出），助手迅速遞上已編號(hào)的采血管，接血時(shí)采血管應(yīng)稍傾斜，使血液沿管壁徐徐流入采血管中，切勿使血液直接滴入采血管底部，以免產(chǎn)生氣泡和因紅細(xì)胞破裂而引起溶血。采夠要求的血液量時(shí)，迅速拔出針頭，立即用滅菌棉球按壓止血5s左右，再用5%碘酊消毒傷口。采血完畢后，將采血管的管口蓋緊并平放或斜置，待血液完全凝固后再放入冷藏箱。

2.1.2 牛尾中靜脈采血法 首先將牛韁繩拴牢（應(yīng)盡可能拴短一些，以減少牛的活動(dòng)范圍），采血者站在牛正后方，用左手將牛尾1／2處握緊并盡量舉高，使牛尾從尾根處自然抬起，與背中線垂直，避免在中間形成彎曲或偏向一側(cè)，防止牛會(huì)因疼痛而躁動(dòng)不安，影響正常操作；右手持采血器（或一次性注射器，選用2.50～3.75cm 長(zhǎng)的12＃針頭為宜），在尾根中線腹側(cè)，距肛門10cm 左右（采血部位的解剖位置是：第2 與第3 尾椎之間）的凹陷部正中處，先用10%碘酊消毒、再用75%酒精棉球脫碘消毒，在該處垂直于尾縱軸進(jìn)針約1cm 左右，然后試著抽吸，若無(wú)回血，可將針頭緩慢退出1～5mm，再抽吸即可采出血液。其它與牛頸靜脈采血相同。

2.1.3 牛乳靜脈采血法 母牛乳房發(fā)育較好且乳靜脈明顯的，也可在乳房靜脈采血；這時(shí)需要用結(jié)實(shí)的繩子，將牛兩后肢分別拴牢（兩后肢中間應(yīng)有約20～30cm 左右的距離）的方法保定好；常規(guī)消毒后，用一次性注射器或真空采血管采血。

3 采集的血液保存及血清分離技術(shù)

采集的血液趁未凝固前將采血管平放或斜置，以增加血清析出面；在血液未完全凝固前，嚴(yán)禁晃動(dòng)采血管，以防溶血；待血液完全凝固后，將采血管置于冷藏箱內(nèi)，冬季置于較為溫暖的地方，切忌凍結(jié)；夏季置于陰涼處，以防腐敗。

采集的血液凝固后，在室溫下一般12h內(nèi)即可析出血清，在炎熱的夏季，3～6h 即可充分析出血清，此時(shí)應(yīng)及時(shí)將血清移出，以防腐敗及因晃動(dòng)采血管等因素而影響血清質(zhì)量；有時(shí)血清析出量少或未析出血清的，可把凝固后12h以上的全血，置于離心機(jī)內(nèi)（放置采血管時(shí)需要注意的是：離心機(jī)是否平衡，掌握好管的大小、長(zhǎng)度和對(duì)側(cè)放置的管內(nèi)血液容量是否一致等），離心分離血清（3 000～4 000r／min，離心時(shí)間為2～3 min），使血清析出，待血清析出后，用移液器小心（移液頭尖端部勿觸及凝血塊，以防影響血清質(zhì)量）將血清移入另一潔凈、干燥、無(wú)菌試管或小瓶中。分離后得到的血清，應(yīng)盡快用冷藏或冷凍方法保存，及時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。

4 常見不良“采血法”導(dǎo)致的結(jié)果

1）不剪毛、不消毒，導(dǎo)致皮毛上的雜物及病原微生物等污染針頭、掉入采血容器，影響血清質(zhì)量，造成動(dòng)物發(fā)生感染和養(yǎng)殖戶的反感。

2）用自來水煮沸消毒的針頭，不經(jīng)干燥、不用力甩凈針頭內(nèi)的水、或不用滅菌生理鹽水沖洗，因?yàn)樗c血液是不等滲的，采集的血液很容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。

3）用1個(gè)針頭采數(shù)頭只牛，導(dǎo)致血清質(zhì)量差及溶血，也會(huì)造成畜禽間的交叉感染，畜主也很反感。

4）用酒精浸泡后的針頭直接采血，容易造成溶血。

5）個(gè)別人員專業(yè)技術(shù)素質(zhì)差，采不出血就用采血管直接在出血的皮膚處接、或未剪毛時(shí)在毛尖上接血，更有甚者，將畜禽屠宰后用采血管接，這時(shí)的組織液、各種雜物隨同血液進(jìn)入采血管，這樣的血液含有大量的微生物、雜質(zhì)等，會(huì)導(dǎo)致血液受到污染、溶血，分離出的血清呈膠凍樣，這樣的“血清”當(dāng)然是不能用的。

5 討論與分析

1）采血人員要合理分工，如采血員、保定員、記錄員、器械遞送員等，不要慌亂，不可漏采和重復(fù)采，注意人畜安全。

2）采血時(shí)間應(yīng)在，早晨喂飼前或停食（但要保證充足的飲水）后6h進(jìn)行，以免出現(xiàn)血清混濁等質(zhì)量問題。

3）使用一次性注射器、連試管式的真空采血器，避免因器械消毒不嚴(yán)，操作人員直接接觸動(dòng)物血液受到病原微生物感染及畜禽人為的疫病傳播。

4）在采血和分離血清時(shí)做到①采血針頭、瓶（管）潔凈、干燥、無(wú)菌；②采血過程中確保人畜安全；③采血時(shí)按“畜（禽）采血登記表”逐一詳細(xì)登記；④采血時(shí)必須無(wú)菌操作，不溶血、無(wú)污染、無(wú)腐??；⑤做到表、號(hào)、血、畜四統(tǒng)一，以防混淆。

5）牛尾中靜脈采血法的優(yōu)缺點(diǎn) 對(duì)牛應(yīng)激反應(yīng)微小，牛不需要特殊的保定，此種操作方法相對(duì)比較安全，不影響乳牛的產(chǎn)奶量；操作簡(jiǎn)便，采血人員容易掌握；具有單人即可操作、采血快速、保定簡(jiǎn)單、防止人畜受傷等優(yōu)點(diǎn)。但不適用于犢牛的血液采集，以免造成犢牛尾部血管的永久性損傷。

筆者每年都要進(jìn)行大量的牛采血、血清分離及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)工作，每年采血少時(shí)上百頭只，多時(shí)上千頭只，通過20多年的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，無(wú)感染、無(wú)溶血、無(wú)腐敗及事故等等現(xiàn)象發(fā)生。