鼠創(chuàng)傷性失血性休克對其細(xì)胞生物膜脂質(zhì)過氧化水平的影響*

李大鵬，時利民，張永軍，呂春雷，王鳳嬌

為探討創(chuàng)傷性失血性休克(THS)對細(xì)胞生物膜脂質(zhì)過氧化水平的影響，筆者建立收縮壓下降曲線形成THS動物模型，選擇反映脂質(zhì)過氧化及自由基代謝的重要指標(biāo)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)為檢測指標(biāo)，探討THS發(fā)生過程中失血量變化及對血漿SOD、MDA的影響，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1．1 實驗動物選擇 選擇健康雌性Wistar大鼠10只，SPF 級，體重480 ～530 g，平均(502.9±15.1)g，購于山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司［實驗動物生產(chǎn)許可證:SCXK(魯)2008－0002］。實驗動物在十萬級亞屏障環(huán)境中恒溫、恒濕條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實驗前禁食12 h，自由飲水。

1．2 動物模型制備

1．2．1 動物麻醉與插管 10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，按0.3 ml/100 g大鼠體質(zhì)量的劑量，腹腔注射方式。麻醉穩(wěn)定后，將大鼠仰臥固定在解剖臺上，右側(cè)腹股溝區(qū)備皮，消毒后仔細(xì)解剖出其股動脈，分離完畢后對血管進(jìn)行PE套管插管，并與八導(dǎo)生理記錄儀(美國Biopac公司)相連，連接完畢打開三通監(jiān)測大鼠收縮壓、舒張壓、平均血壓、心率等變化。選擇以上消毒方式，解剖出大鼠頸動脈，經(jīng)頸動脈插入PE套管并與消毒的定量收集管相連，放血及留取血標(biāo)本。

實驗前插管注射肝素生理鹽水(2.5 U/ml)進(jìn)行肝素化抗凝。

1．2．2 模型制備 實驗操作前穩(wěn)定大鼠30 min，檢測及記錄相關(guān)生理功能指標(biāo)基礎(chǔ)值(T1)。選擇頸動脈放血管路放血，大鼠收縮壓隨其放血量增加而快速下降，形成收縮壓下降曲線。記錄每只大鼠收縮壓降至基礎(chǔ)值3/4(T2)、基礎(chǔ)值2/3(T3)、基礎(chǔ)值1/2(T4)、基礎(chǔ)值 2/5(T5)、30 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa;T6)、基礎(chǔ)值 1/5(T7)、10 mmHg(T8)共7個位置的收縮壓與相應(yīng)位置放血量。7個位置定量收集管留取血樣(－80℃保存待檢)檢測T－SOD及MDA。

1．3 T－SOD及MDA檢測 主要檢測儀器設(shè)備包括:722型光柵分光光度計(上海第三分析儀器廠、波長550～532 nm、1 cm光徑比色杯)、5415R臺式冷凍小型離心機、5810R臺式冷凍高速離心機(德國Eppendorf公司)等。

T－SOD及MDA測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。T－SOD檢驗為羥胺法，MDA檢驗為TBA法，操作方法及要求按說明書。

2 結(jié)果

10只大鼠在T2～T8共7個位置取得失血量、TSOD活力、MDA含量數(shù)據(jù)，分別按T2～T8進(jìn)行分組，T2～T8各組失血量、T－SOD活力、MDA含量分別進(jìn)行比較。

根據(jù)統(tǒng)計學(xué)散點圖，失血量、T－SOD活力、MDA含量之間不存在相關(guān)性。

失血量組間比較:T2T3、T5T6、T7T8之間存在顯著性差異(P ＜0.05)，T3T4、T4T5、T6T7之間無顯著性差異(P＞0.05)。T－SOD活力組間比較:T4T5、T6T7之間存在顯著性差異(P ＜0.05)，T2T3、T3T4、T5T6、T7T8之間無顯著性差異(P＞0.05)。MDA含量組間比較:T3T4、T5T6、T7T8之間存在顯著性差異(P＜0.05)，T2T3、T4T5、T6T7之間無顯著性差異(P ＞0.05)，見表 1。

3 討論

筆者選擇大鼠頸動脈插入PE套管的創(chuàng)傷手段致動脈損傷，用大量放血方式致大量、快速失血引起休克，建立THS模型。由于失血性低血容量休克主要病理生理改變是有效循環(huán)血容量急劇減少，導(dǎo)致組織低灌注、再灌注損傷等［1］，加之血管收縮反應(yīng)、總血容量、凝血機制、血液攜氧能力、組織氧供等因素影響，失血量在THS發(fā)生過程中變化各不相同，而維持腦、腎、肝等重要臟器臨界灌注血壓值是其中重要因素。

本文收縮壓下降曲線中，數(shù)據(jù)表明失血量在T2～T8各位置變化不相同，組間比較T2～T3有顯著性差異，相關(guān)位置失血量顯著減少，表明 T1～T2位置為THS發(fā)生基礎(chǔ);T3～T5無顯著性差異，相關(guān)位置失血量無顯著變化，提示進(jìn)入代償階段;T5～T6有顯著性差異，相關(guān)位置失血量顯著增加。

表1 大鼠失血量、T－SOD活力及MDA含量±s)

表1 大鼠失血量、T－SOD活力及MDA含量±s)

T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8失血量(ml) 0．67±0.38 0.31±0.170.56±0.54 0.45±0.220.91±0.44 0.65±0.43 1.18±0.67 T－SOD活力(U/ml)295.7±47.8 304.6±60.2 326.8±60.7 383.8±83.5 371.0±46.5 294.9±56.2 304.4±53.5 MDA(nmol/ml) 2.91±1.00 3.21±2.03 4.33±2.70 3.46±1.31 2.48±1.78 2.38±0.97 3.27±1.70

THS發(fā)展可使組織低灌流時間持久，導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)損傷及功能障礙，其中關(guān)鍵是引起細(xì)胞生物膜上脂質(zhì)過氧化及破壞膜結(jié)構(gòu)與功能的機體自由基［2］。SOD是一種氧自由基清除劑，其活力可反映機體清除氧自由基的能力;MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，可反映氧自由基水平及間接反映細(xì)胞受自由基攻擊后脂質(zhì)過氧化的嚴(yán)重程度，MDA升高是機體氧自由基損傷標(biāo)志［3］。SOD和MDA變化可間接反映氧自由基在體內(nèi)生成和清除情況，以及對組織損傷程度和體內(nèi)抗氧化防御作用的功能情況［4－6］。

本文數(shù)據(jù)表明:THS過程中隨大鼠收縮壓快速下降，T2～T3時T－SOD活力及MDA組間無顯著性差異，T3～T4時隨失血量增加MDA水平出現(xiàn)顯著升高并維持高水平，之后T4～T5時T－SOD活力也出現(xiàn)顯著升高并維持高水平，提高體內(nèi)清除氧自由基能力;T5～T6時失血量顯著增加，MDA組間存在顯著性差異，提示高水平MDA含量隨失血量增加出現(xiàn)顯著下降，之后T6～T7時T－SOD活力隨失血量增加也出現(xiàn)顯著下降，提示體內(nèi)清除氧自由基能力顯著下降，表明體內(nèi)大量蓄積自由基、抗氧化保護(hù)能力減弱，過量自由基促進(jìn)脂質(zhì)過氧化并導(dǎo)致機體生物膜損傷。

本實驗可為THS發(fā)生及救治過程中控制脂質(zhì)過氧化、清除自由基、抑制組織細(xì)胞氧化損傷等研究提供有益的數(shù)據(jù)支持。

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