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    絲葉唐松草鎮(zhèn)靜催眠作用實(shí)驗(yàn)研究

    2013-10-17 05:27:44鄭冰清王升啟胡晶紅王光峰張永清
    關(guān)鍵詞:巴比妥鈉提取物小鼠

    鄭冰清 王升啟 胡晶紅 王光峰 張永清

    1.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東濟(jì)南 250355;2.中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,北京 100850;3.沂源仁和堂中醫(yī)診所,山東沂源 256100

    失眠是一種睡眠障礙性疾病,是多種軀體、精神和行為疾病所具有的常見臨床表現(xiàn),嚴(yán)重影響著人們身心健康、生活質(zhì)量和工作效率。隨著社會(huì)生活節(jié)奏的逐步加快,越來越多的人受到失眠困擾,據(jù)統(tǒng)計(jì),全球約有27%的人存在失眠問題[1]。目前臨床上常用的治療藥物主要是苯二氮卓類化合物等,雖然鎮(zhèn)靜催眠作用良好,但其副作用大且易產(chǎn)生依賴性[2]。中醫(yī)藥自古以來就是治療失眠的有效方法[3-5],治療手段包括針灸、推拿及中藥等[6-10]。利用中藥治療失眠,具有療效確切、副作用小的優(yōu)勢(shì),所以近年來試圖從應(yīng)用歷史悠久、資源豐富、毒副作用小的中草藥中尋找更加安全有效的治療藥物,已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一[11-14]。絲葉唐松草(Thalictrum foeniculaceum Bunge)為毛茛科唐松草屬多年生草本植物,在山東章丘、博山、沂源一帶有分布,長(zhǎng)期以來當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)認(rèn)為其功能養(yǎng)心安神,內(nèi)服其全草治療各種失眠臨床療效確切。為充分開發(fā)利用絲葉唐松草植物資源,本研究對(duì)其進(jìn)行了植物學(xué)、生藥學(xué)、化學(xué)等方面的系統(tǒng)研究。本文是其藥理學(xué)研究的部分內(nèi)容,開展了全草粉末、醇與水提取物鎮(zhèn)靜催眠作用的行為學(xué)實(shí)驗(yàn),以確定是否具有鎮(zhèn)靜催眠活性,為開發(fā)利用新的藥用植物資源提供參考。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    小鼠自主活動(dòng)程序自動(dòng)控制儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SPF級(jí)ICR小鼠,體重18~22 g,雄性。由解放軍醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào):SCXK-(軍)2007-004。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)2 d。室溫24℃,相對(duì)濕度45%。光照12 h,自由攝食、飲水。

    1.3 藥品

    絲葉唐松草藥材:采集于山東省沂源縣石橋鄉(xiāng)大泉莊,經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)李建秀教授鑒定,確認(rèn)為毛茛科唐松草屬植物絲葉唐松草(Thalictrum foeniculaceum Bunge)干燥地上全草。戊巴比妥鈉:Sigma公司,批號(hào):69020100。地西泮:天津力勝制藥股份有限公司,批號(hào):1009008。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 方法

    2.1.1 供試樣品制備 精密稱取絲葉唐松草全草88.61 g兩份,剪碎,分別以10倍體積的95%乙醇和蒸餾水加熱回流提取3次,每次2 h,合并3次提取液并減壓濃縮、干燥,得醇溶性提取物(27.60%)和水溶性提取物(39.67%)。

    2.1.2 小鼠鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn) 將50只ICR小鼠,隨機(jī)分為5組,每組10只,按照表1設(shè)計(jì)的分組和劑量灌胃給藥,每日1次,連續(xù)給藥。①小鼠自主活動(dòng)測(cè)試:各組小鼠于第7天給藥1 h后,按照標(biāo)號(hào)分別將小鼠放入自主活動(dòng)儀中,適應(yīng)3 min后,開始記錄5 min內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)。②閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡率實(shí)驗(yàn):各組小鼠于第10天給藥1 h后,腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥鈉,同時(shí)開始計(jì)時(shí),以翻正反射消失記為小鼠進(jìn)入睡眠,觀察30 min內(nèi)小鼠的入睡率。③閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠延長(zhǎng)睡眠實(shí)驗(yàn):各組小鼠于第10天給藥1 h后,腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥鈉,同時(shí)開始計(jì)時(shí),以翻正反射消失1 min以上記為睡眠開始時(shí)間,以第一次恢復(fù)翻正反射時(shí)間記為睡眠結(jié)束時(shí)間,記錄小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間[15]。

    表1 正常小鼠實(shí)驗(yàn)給藥方案

    2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2.2 結(jié)果

    2.2.1 對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 不同用藥組小鼠5 min內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)見表2。表2結(jié)果顯示,相對(duì)于對(duì)照組,地西泮組和絲葉唐松草乙醇提取物組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)有明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);絲葉唐松草粉末組與水提取物組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)稍有減少,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。

    表2 對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響

    2.2.2 對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡情況的影響 閾下劑量戊巴比妥鈉不同用藥組小鼠在30 min內(nèi)的入睡只數(shù)及入睡率見表3。表3結(jié)果顯示,對(duì)照組小鼠入睡2只,入睡率為10%,地西泮組小鼠入睡10只,入睡率達(dá)100%,絲葉唐松草粉末組與乙醇提取物組僅入睡2只,入睡率為20%,絲葉唐松草水提取物組入睡4只,入睡率為40%,對(duì)照組與絲葉唐松草用藥組均顯著低于地西泮組。

    表3 閾下劑量戊巴比妥鈉不同用藥組小鼠入睡情況

    2.2.3 對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間的影響 經(jīng)實(shí)驗(yàn),閾上劑量戊巴比妥鈉不同用藥組小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間見表4。表4結(jié)果顯示:在閾上劑量戊巴比妥鈉狀況下,除絲葉唐松草乙醇提取物組外,其他用藥組的小鼠睡眠潛伏期均比對(duì)照組有所縮短,以陽(yáng)性藥地西泮組效果最好,但與對(duì)照組比較,差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明各用藥組縮短睡眠潛伏期的效果均不明顯;與對(duì)照組比較,地西泮組和絲葉唐松草乙醇提取物組均顯示有延長(zhǎng)睡眠時(shí)間的效果,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05),粉末組和水提取物組也能延長(zhǎng)睡眠時(shí)間,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。

    表4 閾上劑量戊巴比妥鈉不同用藥組小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間(min,±s)

    表4 閾上劑量戊巴比妥鈉不同用藥組小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間(min,±s)

    注:與對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01

    組別 動(dòng)物只數(shù)(只) 睡眠潛伏期 睡眠時(shí)間對(duì)照組地西泮組絲葉唐松草粉末組絲葉唐松草乙醇提取物組絲葉唐松草水提取物組10 10 10 10 10 4.64±2.75 3.77±0.98 4.46±1.30 5.27±2.74 4.45±1.07 48.09±6.95 105.93±13.91**66.88±23.34 94.14±33.87*57.59±28.56

    3 討論

    絲葉唐松草為近年發(fā)現(xiàn)的山東新紀(jì)錄種,有著較為廣泛的分布,長(zhǎng)期以來在民間用于治療失眠療效顯著,部分長(zhǎng)期失眠患者服藥1~2個(gè)月即可痊愈。本研究結(jié)果顯示,絲葉唐松草粉末、水提取物、乙醇提取物均顯示有一定的鎮(zhèn)靜催眠作用,其中乙醇提取物使小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少(P<0.05),使閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05),但粉末及水提物的作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。導(dǎo)致失眠的原因非常復(fù)雜,根據(jù)病因可將失眠劃分為不同的類型[16]。就目前的研究結(jié)果來看,絲葉唐松草鎮(zhèn)靜催眠藥理作用與實(shí)際臨床治療效果有著較大差距,究竟是其確實(shí)沒有鎮(zhèn)靜催眠作用,還是由于劑量不當(dāng)及現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)?zāi)P臀茨芘c失眠發(fā)病機(jī)制相適應(yīng)所導(dǎo)致,尚有待深入研究。

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