全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Sysmex XE-2100復(fù)檢規(guī)則的建立及應(yīng)用評(píng)價(jià)＊

姜 華，吳軍錄，戴 燕，萬海英

（同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200065）

Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀是目前國內(nèi)中小型醫(yī)院應(yīng)用最為廣泛的一種血細(xì)胞分析工具，它將先進(jìn)的流式細(xì)胞技術(shù)、染料結(jié)合技術(shù)和電阻抗原理結(jié)合起來，可進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）、白細(xì)胞分類（DC）、有核紅細(xì)胞（NRBC）和網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET）多種模式檢測(cè)，具有較高的工作效率和準(zhǔn)確率。但由于血細(xì)胞分析儀尚不完全具備識(shí)別細(xì)胞形態(tài)的能力，在形態(tài)學(xué)檢查方面只能作為篩查手段，對(duì)可疑或異常的標(biāo)本必須進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢。因此，2001年，國際著名血液檢驗(yàn)專家Berend Houwen發(fā)起關(guān)于血細(xì)胞分析儀全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類的顯微鏡復(fù)檢規(guī)則的研究［1－2］。2005年國際血液學(xué)組織制定了復(fù)檢規(guī)則統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)“血涂片復(fù)審41條國際規(guī)則”［3］。2008年，由解放軍總醫(yī)院、四川大學(xué)華西醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院和Sysmex公司成立了“XE-2100復(fù)檢協(xié)作組”［4］，制定了針對(duì)Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則。但是，這只是指導(dǎo)意見，每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室必須根據(jù)科室情況制定出適合于本科室的復(fù)檢規(guī)則。

1 資料與方法

1.1 一般資料 血液標(biāo)本來自2011年3～5月同濟(jì)醫(yī)院門、急診和住院患者，標(biāo)本均用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）真空抗凝管采集，所有標(biāo)本均在2h內(nèi)用XE-2100自動(dòng)進(jìn)樣模式檢測(cè)并推片染色完畢。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、原裝配套試劑、質(zhì)控物由日本Sysmex公司提供；Olympus CX31雙筒顯微鏡購自日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社，用于血涂片的顯微鏡檢查；EDTA-K2真空抗凝管購自廣州陽普醫(yī)療用品有限公司；瑞氏染液購自貝索公司。

1.3 方法

1.3.1 人員培訓(xùn) 根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》和《白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法》中制定的操作程序，對(duì)參與人員進(jìn)行培訓(xùn)［5－6］。儀器操作和結(jié)果判斷由1名有經(jīng)驗(yàn)的主管技師負(fù)責(zé)；涂片染色和鏡下檢查分別由另外2名主管技師負(fù)責(zé)，進(jìn)行雙盲檢驗(yàn)。

1.3.2 儀器準(zhǔn)備 由Sysmex公司工程師對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，且每天的室內(nèi)質(zhì)控檢測(cè)必須在控。

1.3.3 檢測(cè)方法 將收集的標(biāo)本于采血后2h內(nèi)用Sysmex XE-2100自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行檢測(cè)，包括CBC、DC，將檢測(cè)結(jié)果備份存檔。同時(shí)，每份標(biāo)本制備2張血涂片，用瑞氏染液進(jìn)行染色，保證涂片和染色良好。由有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員按培訓(xùn)方法進(jìn)行鏡檢。內(nèi)容包括：（1）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：每張血涂片分類200個(gè)白細(xì)胞，并觀察形態(tài)；（2）白細(xì)胞和血小板數(shù)量估計(jì)；（3）紅細(xì)胞和血小板的大小及形態(tài)；（4）有無巨大血小板；（5）有無有核紅細(xì)胞及血液寄生蟲。

1.4 建立復(fù)檢規(guī)則

1.4.1 儀器復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn) 參考2008年XE-2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組制定的《XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則》［4］，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，添加了兒童的復(fù)檢規(guī)則和歷史結(jié)果審核規(guī)則組成了本實(shí)驗(yàn)室血常規(guī)復(fù)檢要求，具體見表1。

表1 血常規(guī)復(fù)檢要求

1.4.2 涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) （1）紅細(xì)胞明顯大小不等（細(xì)胞大小相差1倍以上）；中空淡染（大于1／2淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30%）；只要發(fā)現(xiàn)瘧原蟲均認(rèn)為有紅細(xì)胞形態(tài)改變；（2）巨大血小板大于15%；（3）血小板聚集；（4）Dohle小體的粒細(xì)胞大于10%；（5）中毒顆粒粒細(xì)胞大于10%；（6）空泡變性粒細(xì)胞大于10%；（7）原始和幼稚細(xì)胞大于或等于1%；（8）早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞大于或等于1%；（9）晚幼粒細(xì)胞大于2%；（10）異形淋巴細(xì)胞大于5%；（11）NRBC大于或等于1%；（12）漿細(xì)胞大于或等于1%［4］。

1.4.3 復(fù)檢規(guī)則的驗(yàn)證及結(jié)果判斷方法 以鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)1 020例標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)應(yīng)用本科室制定的復(fù)檢規(guī)則后的涂片復(fù)檢率（真陽性率加上假陽性率）、真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率。真陽性定義為觸犯復(fù)檢規(guī)則且人工鏡檢結(jié)果為陽性；假陽性定義為觸犯復(fù)檢規(guī)則但人工鏡檢結(jié)果為陰性；真陰性定義為未觸犯復(fù)檢規(guī)則且人工鏡檢結(jié)果為陰性；假陰性定義為未觸犯復(fù)檢規(guī)則但人工鏡檢結(jié)果為陽性。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)檢規(guī)則的應(yīng)用 標(biāo)本在檢測(cè)時(shí)，如果觸及到相關(guān)復(fù)檢規(guī)則時(shí)，則按照不同提示進(jìn)行操作，（1）觸及標(biāo)本情況類：觀察標(biāo)本情況，溶血、脂血、黃疸、乳糜血、抗凝劑比例不合適時(shí)，若有必要重新采樣后再行檢測(cè)。（2）觸及儀器復(fù)測(cè)類：儀器未出結(jié)果、各類計(jì)數(shù)結(jié)果超出規(guī)定的范圍、與既往結(jié)果不符的，立即與臨床聯(lián)系和詢問病情并進(jìn)行復(fù)測(cè)。（3）推片染色評(píng)估類：觀察紅細(xì)胞形態(tài)、染色有無異常，有無寄生蟲，血小板和白細(xì)胞形態(tài)和數(shù)目（通過血片中的分布比例估計(jì)與儀器給出的數(shù)據(jù)的比較）有無異常。（4）人工計(jì)數(shù)各類細(xì)胞類：儀器計(jì)數(shù)超出規(guī)定范圍的，與鏡下估算不一致的，儀器提示有細(xì)胞碎片或有核紅細(xì)胞、圖形有偏移的需人工血細(xì)胞計(jì)數(shù)。（5）鏡下 WBC分類計(jì)數(shù)類：需鏡檢標(biāo)本，重點(diǎn)是儀器報(bào)警的標(biāo)本。

2.2 復(fù)檢規(guī)則的效果驗(yàn)證

2.2.1 應(yīng)用1 020例標(biāo)本對(duì)血常規(guī)復(fù)檢情況進(jìn)行了分析，見表2。

表2 血常規(guī)復(fù)檢情況分析

2.2.2 統(tǒng)計(jì)分析了1 020例標(biāo)本真陽性率、假陽性率及真陰性率、假陰性率4項(xiàng)指標(biāo)，真陰性761例（74.6%），真陽性193例（18.92%），假陰性26例（2.55%），假陽性40例（3.92%）。

3 討 論

Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀具有靈活的檢測(cè)和隨機(jī)進(jìn)樣分析模式，能滿足臨床不同標(biāo)本檢測(cè)要求。然而全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀雖然有良好的分析性能，但細(xì)胞形態(tài)多樣性、復(fù)雜性使得儀器對(duì)細(xì)胞的具體形態(tài)和結(jié)構(gòu)的識(shí)別仍具有一定的局限性，而染色后手工鏡檢除根據(jù)細(xì)胞大小還根據(jù)染色后胞核的大小、形狀、染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)、胞質(zhì)的顏色及胞質(zhì)內(nèi)顆粒的變化而確定細(xì)胞種類，是直觀而準(zhǔn)確的結(jié)果，這是血細(xì)胞分析儀無法完成的［7］。為了彌補(bǔ)血細(xì)胞分析儀對(duì)細(xì)胞形態(tài)識(shí)別能力的不足，需要建立適合本實(shí)驗(yàn)室的復(fù)檢規(guī)則，對(duì)儀器提示的報(bào)警信息進(jìn)行必要的復(fù)檢。其復(fù)檢率的高低與諸多因素相關(guān)，如儀器的狀況、患者的情況、臨床醫(yī)生的要求以及檢驗(yàn)者的經(jīng)驗(yàn)等［1］。所以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部應(yīng)制定統(tǒng)一的復(fù)檢規(guī)則，來確保檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量，而假陰性率是復(fù)檢規(guī)則制定的關(guān)鍵參數(shù)，既不能出現(xiàn)漏掉有診斷價(jià)值的陽性結(jié)果，也要盡量使復(fù)檢率低。本科室制定的28條復(fù)檢規(guī)則，經(jīng)1 020例標(biāo)本的驗(yàn)證，假陰性率僅為2.55%，且無血液病細(xì)胞漏檢。其中漏報(bào)的2例術(shù)后患者雖然漏檢了幼稚細(xì)胞，但是二者的中幼粒細(xì)胞僅為1%。

使用1 020例標(biāo)本對(duì)本實(shí)驗(yàn)室28條血常規(guī)復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示需要復(fù)檢的有233例（其中包括血液病患者的標(biāo)本），復(fù)檢率為22.84%；準(zhǔn)確率（真陽性率和真陰性率）為93.52%，其中假陽性率為3.92%，其主要原因是儀器提示有未成熟的粒細(xì)胞和異常淋巴細(xì)胞，但鏡檢只發(fā)現(xiàn)有少量的桿狀核細(xì)胞和少量的異形淋巴細(xì)胞（≤5%）。假陰性率為2.55%，符合國際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組關(guān)于假陰性率小于5.0%的規(guī)定，且無血液病患者漏檢，最大限度地減少了不必要的復(fù)檢工作，提高了檢驗(yàn)人員的工作效率，有助于規(guī)范檢測(cè)操作及進(jìn)一步完善儀器性能的評(píng)價(jià)，為臨床提供更加可靠、直觀的信息，協(xié)助臨床診斷。

［1］ 盧興國，叢玉隆.應(yīng)重視和提升傳統(tǒng)血液形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)診斷水平［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（6）：481-482.

［2］ 熊立凡，劉成玉.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)［M］.4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：86.

［3］Elkin Simson.全自動(dòng)血液分析儀的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)［J］.崔巍譯.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（4）：371-373.

［4］ XE2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組.Sysmex XE2100自動(dòng)血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，31（7）：752-757.

［5］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：133.

［6］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：4.

［7］ Pierre RV.Peripheral blood film review，the demise of the eyecount leukocyte differential［J］.Clin Lab Med，2002，22（1）：279-297.