p63 CK5/6 Napsin A及TTF－1抗體在肺鱗癌和腺癌病理鑒別診斷中應(yīng)用研究

趙子龍， 楊 勇， 任玉峰

(陜西省安康市中心醫(yī)院， 陜西 安康 725000)

肺小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌的區(qū)分作為病理診斷的重要問題，同時(shí)也關(guān)系到兩者治療意義。以前，非小細(xì)胞癌的組織學(xué)分型尚未給予足夠的重視，伴隨分子靶向藥物特異性治療某種肺癌的發(fā)展，新的靶向藥物對治療肺小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌的療效具有很大差異［1］。要求在診斷時(shí)對兩者進(jìn)行明確的區(qū)分。本次研究采用免疫組化EnVision法檢測，探討p63、CK5/6、NapsinA和TTF－1表達(dá)水平的意義。

1 資料與方法

1.1 研究資料:我院2009年12月至2011年12月進(jìn)行手術(shù)切除的肺癌標(biāo)本105例，其中包括57例肺鱗癌和48例肺腺癌。以肺鱗癌標(biāo)本為觀察組，肺腺癌標(biāo)本為對照組進(jìn)行對比研究。觀察組57例患者中高分化15例，中分化18例，低分化24例。男性31例，女性26 例，年齡(43－62)歲，平均(48.2±2.5)歲。對照組48例患者中高分化11例，中分化14例，低分化23例。年齡(45－65)歲，平均(47.8±1.7)歲。

1.2 方 法

1.2.1 研究方法:首先完成染色，將標(biāo)本以10%甲醛固定后，常規(guī)石蠟包埋，制成切片約4μm厚，共5張，進(jìn)行HE和免疫組化染色。EnVision法。將切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟和梯度酒精脫水，之后完成高溫抗原修復(fù)。根據(jù)試劑盒提示進(jìn)行測試，實(shí)驗(yàn)所用抗體p63、CK5/6、TTF－1、Napsin A均為即用型抗體(福州邁新)。使用正常乳腺組織做p63和CK5/6研究陽性對照，TTF1陽性對照使用常規(guī)甲狀腺組織，Napsin A以正常肺泡上皮作為陽性對照研究。PBS代替一抗作為陰性對照研究。

1.2.2 評價(jià):結(jié)果評價(jià)參照 Khayyata等［2］文獻(xiàn)擬定，位置:TTF－1、p63陽性表達(dá)于細(xì)胞核，CK5/6位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜，napsin A定位于細(xì)胞質(zhì)。陰性判定:腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)＜10%或呈陰性表達(dá)。陽性表達(dá):“+”陽性表達(dá)＞10%至25%，“++”陽性表達(dá)為26%－50%，“+++”陽性表達(dá)超過50%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料X2比較，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。根據(jù)指標(biāo)陽性表達(dá)率對特異性和敏感性進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 表達(dá)情況:觀察組57例患者中p63表達(dá)均為陽性，對照組48例患者僅有小部分具有較弱強(qiáng)度的陽性表達(dá)，其中“+”4例，陽性表達(dá)率僅為8.33%，觀察組表達(dá)水平顯著高于對照組，其中 X2=89.9385，p=0.000。觀察組CK5/6陽性55例，表達(dá)率為96.49%;對照組僅有2例為“+”，陽性表達(dá)率為4.17%。兩組比較具有顯著差異，X2=89.5002，p=0.000。觀察組TTF－1無顯示陽性表達(dá)，但染色切片時(shí)發(fā)現(xiàn)，肺鱗癌細(xì)胞邊緣具有TTF－1陽性表達(dá)，對照組中TTF1陽性表達(dá)46例，表達(dá)率95.83%，兩組 X2=97.2140。Napins A觀察組表達(dá)均為陰性，對照組中均有陽性表達(dá)，相較X2=105.0000，p=0.000，詳見表1。

表1 p63、CK5/6、TTF1、Napsin A 不同表達(dá)分析 n(%)

2.2 特異性和敏感性:根據(jù)標(biāo)志物的不同表達(dá)情況， 對特異性和敏感性進(jìn)行計(jì)算，詳見表2所示。

表2 p63、CK5/6、TTF－1、Napsin A 診斷的特異性和敏感性(%)

3 討論

分子技術(shù)的不斷發(fā)展和對肺癌發(fā)展機(jī)制認(rèn)識的增加，分子靶向治療已經(jīng)成為肺癌患者治療的主要手段，近年來的治療效果較為滿意［3］。相關(guān)研究指出，靶向藥品或部分治療方案與組織學(xué)類型具有一定相關(guān)性，并且會影響患者治療效果。因此，在治療方案擬定前的診斷尤為重要。肺小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌的區(qū)分作為病理診斷的重要問題，同時(shí)也關(guān)系到兩者治療意義［4］。以前，非小細(xì)胞癌的組織學(xué)分型尚未給予足夠的重視，伴隨分子靶向藥物特異性治療某種肺癌的發(fā)展，新的靶向藥物對治療肺腺癌與非腺癌的療效具有很大差異［5］。

TTF－1作為肺癌研究中報(bào)道最多的標(biāo)志物，其主要表達(dá)于肺腺癌和小細(xì)胞癌，Napsin A通過凝膠電泳后在肺細(xì)胞癌檢查出天冬氨酸蛋白酶，其多肽與TA02同源，并參與了蛋白B的成熟，在II型肺泡細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中有所表達(dá)［6］。肺癌檢測中NapsinA與TTF1表達(dá)結(jié)果相似，均不表達(dá)于肺鱗癌［7］。這一結(jié)果對診斷肺腺癌具有重要意義。p63與CK5/6在肺腺癌中有小部分表達(dá)陽性且強(qiáng)度較弱，肺鱗癌中表達(dá)顯現(xiàn)出高特異性和敏感性，聯(lián)合檢測時(shí)特異性可達(dá)100%，有助于肺鱗癌診斷和相關(guān)治療方案的制定［8］。Terry等［9］通過對200例肺腺癌以及 225例鱗狀細(xì)胞癌P63、TTF1、CK5/6、napsinA在內(nèi)的9種免疫標(biāo)志物進(jìn)行回歸分析發(fā)現(xiàn)P63、TTF1、CK5/6、napsinA對區(qū)分肺鱗癌與肺腺癌有較好的參考價(jià)值，本次研究發(fā)現(xiàn)p63、CK5/6、Napsin A及TTF－1抗體在鑒別肺腺癌和鱗癌具有一定意義。其作為區(qū)分肺腺癌與非腺癌，制定相應(yīng)治療方案具有重要意義。

［1］劉英.非小細(xì)胞肺癌基于文獻(xiàn)輪廓相關(guān)基因功能分析［J］.河北醫(yī)學(xué)，2012，18(6):813－814.

［2］Khayyata S，Yun S，Pasha T，et al.Value of p63 and CK5/6 in distinguishing squamous cell carcinoma from adenocarcinoma in lung fine－needle aspiration specimens［J］.Dign Cytopathol，2009，37(3):178－183.

［3］張同海，王勁松，黃文斌，等.聯(lián)合檢測 TTF1、CK5/6、p63、napsin A在肺鱗癌和肺腺癌鑒別診斷中的價(jià)值［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012，28(8):918－920.

［4］王紅梅.周曉鴿.TTF1在肺癌診斷和鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值［J］.診斷病理學(xué)雜志，2005，12(6):441－443.

［5］Mkuhopadhyay S，Katzenstein A L.Subclassification of non－small cell lung carcinomas lacking morphologic differentiation on biopsyspecimens:Utility of an immunohistochemical panel conaining TTF－1，napsin A，p63，and CK5/6［J］.Am Surg Pathol，2011，35(1):15－25.

［6］Terry J，Leung S，Laskin J，et al.Optimal immunohistochemical markers for distinguishing lung adenocarcinomas from squamous cell carcinomas in small tumor samples［J］.Am Surg Pathol，2010，34(12):1805－7811.

［7］韓一平，張鵬，黃玲，等.肺癌組織Napsin A和TTF－1表達(dá)及臨床價(jià)值［J］.中華腫瘤防治雜志，2010，17(3):194－197.

［8］王銀萍，曲麗梅，郝玉丹.肺小細(xì)胞癌支氣管鏡活檢的陷阱－附64例免疫組化研究［J］.中國肺癌雜志，2009，12(8):901－904.

［9］Terry J，Leung S，Laskin J，et al.Optimal immunohistochemical markers for distinguishing lung adenocarinomas from squamous cell carcinomas in small tumor samples［J］.Am Surg Pathol，2010，34(12):1805－1811.