黃芪注射液對大鼠失血性休克并內(nèi)毒素所致急性肺損傷的影響

張?jiān)龇澹?陳曉靜， 劉 郁， 段紹斌， 居來提，吾買爾江， 于 亮， 仝傳志， 董揚(yáng)帆

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院普外一科， 新疆 烏魯木齊 830000 2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院幸福路分院， 新疆 烏魯木齊 830000)

失血性休克后，由于腸道缺血引起腸道粘膜屏障受損，以致細(xì)菌移位進(jìn)入血液，導(dǎo)致腸源性菌血癥和內(nèi)毒素血癥，這是誘發(fā)急性肺損傷(ALI)或急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)的重要因素。也是導(dǎo)致MODS的常見及主要原因。目前對急性肺損傷的治療主要是病因治療，如早期進(jìn)行機(jī)械通氣，或應(yīng)用地塞米松、超氧化物歧化酶等激素或抗氧化劑，但目前這些藥物的療效尚不肯定。現(xiàn)代藥理研究表明黃芪可以清除體內(nèi)氧自由基、雙向調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗病毒、擴(kuò)張血管，減少血栓形成，增加腎血流量，利尿等多種藥理作用。且黃芪目前己經(jīng)用于ALI的臨床治療［1］，但其機(jī)制目前尚不清楚。本研究通過建立失血性休克合并內(nèi)毒素所致肺損傷動物模型，采用黃芪注射液治療急性肺損傷，探討其作用機(jī)制，為臨床治療急性肺損傷提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物與分組:SD雄性大鼠(由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)36只，雌雄不限，體重(260±10)g，將動物隨機(jī)分為三組，每組12只。A組生理鹽水對照組，B組黃芪注射液低劑量組，C組黃芪注射液高劑量組。

1.2 材料與設(shè)備:黃芪注射液(每支10mL相當(dāng)原生藥20g，批號Z23020786)由黑龍江珍寶島制藥有限公司生產(chǎn)、TNF－α試劑盒 (上海西唐生物科技有限公司)，IL－6試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)，高速臺式離心機(jī)(LD25－2北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，肝素鈉、粗制大腸桿菌內(nèi)毒素(1×1014個死菌/L)。手術(shù)器械及動脈插管、多導(dǎo)生物分析儀，輸液泵等。

1.3 模型的制作及方法:大鼠標(biāo)準(zhǔn)條件喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度25℃。大鼠用10%水合氯醛腹腔麻醉(3mL/kg)，左側(cè)頸總動脈并插管，外接三通，分別連接壓力傳感器和注射器，用于放血和監(jiān)測血壓，采集血標(biāo)本，尾靜脈置管用于給藥和復(fù)蘇，尾靜脈注入肝素后(500μ/kg)，15min內(nèi)從頸動脈放血至平均動脈壓(MAP)35mmHg，維持休克45min后，然后在2h內(nèi)一組由尾靜脈回輸全部采集的血液及2倍生理鹽水，另兩組由尾靜脈回輸全部采集的血液及黃芪注射液，兩組黃芪注射液皆用生理鹽水稀釋至所采集血液量的兩倍。其中分黃芪低劑量組(黃芪注射液10g/kg)和黃芪高劑量組(黃芪注射液20g/kg)，復(fù)蘇結(jié)束后，從尾靜脈給注入LPS1.4mg/kg，通過多導(dǎo)生物分析儀監(jiān)測實(shí)驗(yàn)動物的心率、血壓。2h后留取肺組織標(biāo)本。

1.4 肺組織切片制備:大鼠腹腔麻醉，胸部去毛，消毒后無菌剪剪開胸腔，取右肺，剔除結(jié)締組織，濾紙吸干表面滲液及血跡。稱濕重后，置于80℃的烤箱中烘烤48h至衡重，稱干重，計(jì)算濕重/干重比值(W/D)。同時取左肺組織(0.8－0.9)g，加9倍的4℃無菌生理鹽水，低溫制備體積分?jǐn)?shù)為10%的組織勻漿，3500 r/min(離心半徑8cm)離心10 min，取上清液置于－80℃冰箱內(nèi)冷凍備測。分別采用大鼠TNF－α、IL－6酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒(美國Sigma公司)，嚴(yán)格按照說明書要求測定肺組織勻漿液TNF－α、IL－6的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析(one－way ANOVA)進(jìn)行組間比較，以最小顯著差異法(LSD法)進(jìn)行不同組別之間的兩兩比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為 а=0.05。

2 結(jié)果

黃芪注射液高劑量組肺組織勻漿中TNF－α、IL－6含量和肺W/D各項(xiàng)指標(biāo)低于低劑量組，且兩組均低于對照組。具體結(jié)果(見表1)。

表1 三組肺組織勻漿中TNF－α、IL－6含量和肺W/D的變化(±s，n=12)

表1 三組肺組織勻漿中TNF－α、IL－6含量和肺W/D的變化(±s，n=12)

組別 TNF－α(bp/mg)IL－6(bp/mg)W/D A 15.87±0.48 113.8±3.00 5.37±0.23 B 15.00±0.43 106.8±1.92 4.82±0.32 C 13.12±0.47 47.15±4.10 4.39±0.12

3 討論

急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是指由嚴(yán)重創(chuàng)傷或感染等所引起的肺實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。細(xì)菌感染所致的膿毒血癥是引起急性肺損傷(ALI)的主要原因［2］。TNF－α可以激活損傷的粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板等進(jìn)一步釋放氧自由基、脂質(zhì)代謝產(chǎn)物、溶酶體酶等介質(zhì)，形成瀑布樣連鎖反應(yīng)，引起組織細(xì)胞損害，因此被認(rèn)為是引起ARDS的最重要細(xì)胞因子之一［3］。多項(xiàng)研究說明IL－6可以作為監(jiān)測炎癥治療后指標(biāo)，用于評價全身性感染患者炎癥反應(yīng)的程度，全身性感染患者血清IL－6水平與疾病的嚴(yán)重程度成正相關(guān)［4］。

通過實(shí)驗(yàn)我們本發(fā)現(xiàn)黃芪注射液組肺組織勻漿中TNF－α、IL－6含量和肺W/D低于對照組，且高劑量組各項(xiàng)指標(biāo)低于低劑量組。說明黃芪注射液對失血性休克合并內(nèi)毒素所致急性肺損傷具有保護(hù)作用，且大劑量組優(yōu)于低劑量組?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪對機(jī)體非特異性細(xì)胞免疫和體液免疫功能有增強(qiáng)作用，可明顯提高T細(xì)胞的增殖，促進(jìn)吞噬功能［5，6］。黃芪的活性成分中黃芪總黃酮為黃芪抗氧化的主要活性成分，對多種自由基均有良好的清除作用，可預(yù)防生物膜的脂質(zhì)過氧化［7］。黃芪甙可抑制內(nèi)毒素引起的內(nèi)皮細(xì)胞呼吸爆發(fā)和氧自由基釋放，可減輕內(nèi)毒素對內(nèi)皮細(xì)胞膜的損傷，對細(xì)胞間連接起保護(hù)作用。黃芪多糖可抑制創(chuàng)傷后體內(nèi)自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，可增強(qiáng)創(chuàng)傷小鼠體內(nèi)的SOD活性［8］。

通過本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，黃芪注射液在對失血性休克合并內(nèi)毒素所致急性肺損傷起明顯的保護(hù)作用，減輕了創(chuàng)傷后由炎性介質(zhì)所介導(dǎo)的肺損傷，通過黃芪注射液的藥理作用，可初步考慮其保護(hù)作用可能與黃芪注射液的非特異性細(xì)胞免疫、體液免疫及其活性成分對多種自由基的清除作用有關(guān)，為臨床應(yīng)用黃芪注射液治療急性肺損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提高搶救成功率。

［1］顧儉勇，黃配志.黃芪對脂多糖致急性肺損傷的保護(hù)機(jī)制［J］.中國臨床醫(yī)學(xué)，2005，12(6):1147－1149.

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