雌、孕激素受體與p16蛋白在子宮肉瘤中的表達(dá)

王成書 張霞

子宮肉瘤(US)是一種較少見的惡性程度很高的女性生殖器腫瘤，為中胚葉肉瘤，可來(lái)源于子宮肌肉、結(jié)締組織、血管和上皮，具有豐富的組織學(xué)形態(tài)和生物學(xué)行為，美國(guó)婦癌協(xié)會(huì)2003將子宮肉瘤的病理類型分為三種：子宮平滑肌肉瘤(ULMS)、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤(ESS)、惡性苗勒管混合肉瘤(MMT)即癌肉瘤。本研究的目的擬通過免疫組化方法檢測(cè)ER、PR與p16蛋白在子宮肉瘤中的表達(dá)，旨在探討它們?cè)赨S發(fā)生發(fā)展過程中蛋白表達(dá)的意義，以了解US的發(fā)病機(jī)制并為其早期診斷和治療提供線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料 US62例來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科及協(xié)作單位1985至2008年存檔的手術(shù)切除的US的蠟塊標(biāo)本，其中 ULMS29例，ESS15例，MMT18例;取同期子宮肌瘤(LmA)20例作為對(duì)照;各病例標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診。

1.2 方法 采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶聯(lián)結(jié)免疫組織化學(xué)(S-P)方法檢測(cè)P16蛋白、ER和PR在62例US中的表達(dá)，以20例LmA作為對(duì)照。

1.3 結(jié)果測(cè)定 以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆?；驁F(tuán)塊著色為陽(yáng)性標(biāo)志。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，分別計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)，兩者的比值為陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分，＜10%評(píng)為0、10% ～30%評(píng)為1分、31% ～50%評(píng)為2分、＞50%評(píng)為3分，并分別定為陰性(-)、弱陽(yáng)性(+)、陽(yáng)性(++)、強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及Spearman秩相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

雌、孕激素受體陽(yáng)性物質(zhì)定位于胞核，以核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng);P16基因蛋白的免疫反應(yīng)產(chǎn)物主要存在于細(xì)胞核中，部分見于胞質(zhì)內(nèi)，但P16蛋白屬核蛋白，它在胞質(zhì)核蛋白體中合成后需轉(zhuǎn)入到胞核內(nèi)才能進(jìn)一步發(fā)揮其調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的功能，因此，細(xì)胞核陽(yáng)性才更有意義，故本研究中胞質(zhì)陽(yáng)性棄而不計(jì)，只計(jì)核陽(yáng)性。

2.1 ER、PR、P16蛋白在 LmA與US中的表達(dá)情況 US與LmA比較，ER、P16表達(dá)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，PR表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);子宮平滑肌肉瘤、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤及惡性苗勒管混合瘤之間，P16表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);ESS與ULMS及MMT之間比較，ER、PR表達(dá)均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 ER、PR、P16蛋白在子宮肉瘤中表達(dá)的相關(guān)性及其與臨床分期的意義 ER、PR、P16蛋白在子宮肉瘤中的表達(dá)情況經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)ER與P16表達(dá)關(guān)系較密切，呈負(fù)相關(guān)(r=-0.391，P=0.036)，ER與PR表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.098，P＞0.05);在臨床Ⅰ、Ⅱ期中的表達(dá)與Ⅲ、Ⅳ期相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 ER、PR與P16蛋白在子宮平滑肌瘤與子宮肉瘤中的表達(dá)情況 例

3 討論

已知子宮是卵巢激素靶器官之一，其疾病的發(fā)生與激素和激素受體水平密切相關(guān)，激素受體的存在是對(duì)激素易感的特征，但它們導(dǎo)致子宮病變的具體機(jī)制尚未闡明。

ER基因定位于6q25(ERα)和14q24(ERβ)，表達(dá)于正常子宮的上皮、肌層細(xì)胞及正常乳腺上皮細(xì)胞;孕激素受體(PR)基因定位于11q22，是一種雌激素調(diào)節(jié)蛋白;二者均調(diào)節(jié)性器官細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。當(dāng)細(xì)胞癌變時(shí)，部分細(xì)胞仍保留其ER、PR，這意味著這些細(xì)胞分化好，仍保留著其激素依賴性生長(zhǎng)的特點(diǎn)。Zhai等［1］研究表明ER、PR在US中的表達(dá)量顯著低于子宮肌瘤;ER、PR的測(cè)定在某些惡性腫瘤處理方面的意義已得到肯定，如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌中測(cè)到高濃度ER和/或PR，據(jù)此可預(yù)計(jì)內(nèi)分泌治療的效果。本研究結(jié)果也表明：在29例ULMS中，ER的表達(dá)率(48.3%)明顯低于 LMA，差異有顯著性(80%;P＜0.05);PR表達(dá)率也有下調(diào)但差異不顯著。而在ESS與LMS及MMT之間比較，ER、PR表達(dá)均有顯著性差異，這與趙超等［2］的研究結(jié)果相似;經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)ER與PR表達(dá)負(fù)相關(guān)性不密切，表達(dá)近乎相似(r=-0.098，P=0.612)，這些結(jié)果提示ER調(diào)節(jié)過程的功能完整性有利于PR的合成;另外，子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞具有成肌纖維細(xì)胞性質(zhì)，可分化為完全發(fā)育的平滑肌細(xì)胞，所以，ESS可伴平滑肌分化，ESS和子宮平滑肌腫瘤之間在形態(tài)學(xué)上存在交叉，單憑臨床表現(xiàn)，組織形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)往往較難準(zhǔn)確診斷，ER、PR表達(dá)的檢測(cè)可為其診斷提供依據(jù)，并可指導(dǎo)治療。

P16又稱多重腫瘤抑制基因，定位于人類染色體9P21，可通過抑制細(xì)胞分裂周期的關(guān)鍵酶CDK4，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，在細(xì)胞周期中起負(fù)性調(diào)節(jié)的作用，其編碼的蛋白產(chǎn)物分子直接參與正常細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控。P16基因缺失或突變?cè)谀[瘤發(fā)生過程中起著重要作用，當(dāng)P16基因突變或缺失時(shí)，P16蛋白就不能正常表達(dá)，使細(xì)胞增殖失去控制。細(xì)胞分裂無(wú)限進(jìn)行，最終形成腫瘤。已有充分的證據(jù)表明，P16免疫染色與細(xì)胞或組織異常的嚴(yán)重程度相關(guān)［3］，本研究結(jié)果顯示，P16蛋白在ULMS中的表達(dá)缺失率為34.5%，表達(dá)陽(yáng)性率為65.5%，而在LMA中85%為弱陽(yáng)性表達(dá)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，具有顯著性差異(P＜0.05)，而P16蛋白在ULMS中陽(yáng)性表達(dá)水平又明顯高于LMA(P＜0.05)，這表明P16蛋白的異常表達(dá)在US變中起了重要作用。Lee等［4］研究結(jié)果顯示：P16強(qiáng)陽(yáng)性區(qū)分LMA與ULMS的敏感性為92%、特異性為98%，并可作為ULMS的標(biāo)志物。目前，雖然臨床上針對(duì)US分子標(biāo)記物的研究較多，但都缺乏大樣本研究，P16蛋白能否作為子宮平滑肌腫瘤良惡性鑒別有用的標(biāo)記物有待進(jìn)一步研究。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的過程，其中多個(gè)基因的改變導(dǎo)致細(xì)胞周期失調(diào)并導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，細(xì)胞增殖失控在腫瘤形成的過程中發(fā)揮了重要作用。對(duì)乳腺癌的研究表明，雌激素通過刺激與G1期到S期轉(zhuǎn)化有關(guān)的cyclinD1過表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的擴(kuò)增［5］;而p16與ER基因表達(dá)明顯負(fù)相關(guān)［6］。本研究發(fā)現(xiàn)，ER與p16蛋白在US中的表達(dá)關(guān)系較密切，呈負(fù)相關(guān)(r=-0.391，P=0.036)，二者相結(jié)合有可能成為子宮子宮肉瘤鑒別診斷的分子標(biāo)記物。

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