地佐辛超前鎮(zhèn)痛對趾部切口疼痛模型大鼠血液NO及P物質(zhì)濃度的影響

王麗 翟麗萍 葛麗平 林涵淼 趙繼波 邢珍

地佐辛是一種新型阿片受體激動-拮抗藥，其主要對κ受體產(chǎn)生激動作用，對μ受體有部分激動作用，同時還有一定的拮抗作用，但其不會產(chǎn)生典型的μ受體依賴［1］。此藥有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，不良反應(yīng)少，對循環(huán)和呼吸抑制輕，精神依賴性極低。臨床研究發(fā)現(xiàn)地佐辛經(jīng)靜脈注射后15 min便達(dá)到鎮(zhèn)痛效果［2］。地佐辛是一種理想的術(shù)中和術(shù)后鎮(zhèn)痛藥物，目前已廣泛應(yīng)用于臨床［3，4］，主要用于急性疼痛、術(shù)中輔助鎮(zhèn)痛、癌性疼痛及術(shù)后鎮(zhèn)痛。本實驗采用腹腔注射地佐辛的方法，觀察地佐辛不同時間給藥對大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度的影響以及與鎮(zhèn)痛效果的關(guān)系，探討地佐辛超前鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 成年健康雄性Wistar大鼠24只(河北北方學(xué)院提供)，體重250～300 g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組8只。0.9%氯化鈉溶液組(A組)：切口疼痛模型前30 min腹腔注射0.9%氯化鈉溶液2 ml，大鼠平均體重為(276±16)g;地佐辛術(shù)前組(B組)：切口疼痛模型前30 min腹腔注射地佐辛0.1 mg/kg 2 ml，大鼠平均體重為(268±21)g;地佐辛術(shù)后組(C組)：切口疼痛模型后30 min腹腔注射地佐辛0.1 mg/kg 2 ml，大鼠平均體重為(278±13)g。3組大鼠的體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 藥品與儀器 地佐辛注射液(揚子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：蘇 2007001)，七氟醚(上海恒瑞藥業(yè)集團(tuán)，批號：20071002)，EDTA-Na2試劑和抑肽酶(北京?？其J生物技術(shù)中心)，P物質(zhì)試劑盒(北京奇松生物科技有限公司 QS41985)，NO試劑盒(上海雅吉生物科技有限公司 YSO1893B)，離心機(jī)(臺式TG18G湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司)。

1.3 切口疼痛模型的建立 將實驗大鼠置于自制的鐵絲編織的小籠子中，先稱量籠子和大鼠的重量，取出大鼠后再稱量籠子的重量，兩者相差即為大鼠的體重。取出大鼠后用自制的頭套(一端留有可系帶一端有供大鼠呼吸的通氣口)將其前半身套住并盡量固定大鼠使其通過通氣口吸入七氟烷，3～5 min后待大鼠麻醉(即大鼠對疼痛刺激沒有體動反應(yīng))后，用安爾碘對大鼠后肢進(jìn)行常規(guī)消毒，按Brennan法制作大鼠切口疼痛模型：在距大鼠足跟近端0.6 cm處進(jìn)行操作，向大鼠趾部方向做一長約1.2 cm的縱形切口，逐層切開大鼠趾部的皮膚及皮下筋膜后，遂可暴露肌肉，然后用鑷子挑起暴露的足底肌肉并小心縱向分離切割，操作時要盡量保持肌肉的起止和附著完整，操作完畢后用棉簽按壓止血，然后用0號細(xì)線縫合皮膚共2針即完成切口痛模型的制作。術(shù)后將大鼠置于自制的40 cm×40 cm×40 cm的加蓋玻璃容器中，并要保持環(huán)境的安靜和衛(wèi)生，室溫保持在25℃左右，同時要避免強(qiáng)光和噪音的刺激。

1.4 累積疼痛評分 在大鼠趾部術(shù)后30 min后，參照Brennan法［12］待大鼠麻醉藥代謝完全大鼠清醒后觀察其術(shù)側(cè)后爪著地和負(fù)重情況，術(shù)側(cè)后爪著地并且被壓迫致發(fā)白表示負(fù)重;術(shù)側(cè)后爪因為疼痛而翹起不著地計2分;術(shù)側(cè)后爪著地但不負(fù)重(即后爪不致發(fā)白)計1分;術(shù)側(cè)后爪著地并負(fù)重計0分。非手術(shù)側(cè)足的觀察評分同術(shù)側(cè)足。實驗設(shè)計每5分鐘觀察1次大鼠的行為變化，每次觀察1 min，在觀察的1 min內(nèi)大鼠最常采用的站立姿勢作為疼痛評分記錄，共觀察1 h(0～24分)，每只切口疼痛模型大鼠都用術(shù)側(cè)足評分減去對側(cè)足評分即為其累積疼痛評分值。以上觀察記錄均是將大鼠置于自制的40 cm×40 cm×40 cm加蓋玻璃容器中進(jìn)行，容器底部為透明玻璃方便實驗者觀察和記錄，所有操作觀察和記錄由實驗者自己完成。

1.5 標(biāo)本采集和檢測 制造大鼠趾部切口痛模型后1 h，用5 ml的無菌注射器采取大鼠尾部靜脈血2 ml，將采取的2 ml靜脈血注入事先在冰箱預(yù)冷過的含有EDTA-Na250 ml和抑肽酶1 000 U的試管內(nèi)，然后將其充分混勻，在4℃的低溫下以3 000 r/min速度離心10 min，將其上層血漿分離后置于-70℃的冰箱中保存以待測。用P物質(zhì)試劑盒測定大鼠血液中P物質(zhì)的濃度，其采用的是放射免疫技術(shù)。制造大鼠趾部切口痛模型后1 h，用5 ml的無菌注射器采取大鼠尾部靜脈血2 ml，將2 ml靜脈血置于空試管中在4℃下以3 000 r/min速度離心10 min，分離上層血清，后將分離出的血清置入-20℃冰箱中待測，用硝酸還原酶法測定血清中NO濃度。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，3組大鼠累積疼痛評分的比較以及每組大鼠的免疫組織化學(xué)實驗結(jié)果，均采用單因素方差分析，每組實驗組間的比較先進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊采用最小顯著差法，方差不齊采用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 累積疼痛評分 A組與B組和C組比較，累積疼痛評分值明顯高(P＜0.01)，B組與C組累積疼痛評分值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 3組累積疼痛評分比較n=8，±s

表2 3組累積疼痛評分比較n=8，±s

注：與A組比較，*P ＜0.05;與B組比較，#P ＜0.01

B組 6.15±0.33 0 6.15±0.33 C組 9.98±0.24 0 9.98±0.24*#

2.2 大鼠血液中NO與P物質(zhì)的濃度比較 B組、C組與A組比較，NO和P物質(zhì)(SP)含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。B組與C組比較，NO和P物質(zhì)(SP)含量差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 3組大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度比較n=8，±s

表3 3組大鼠血液中NO和P物質(zhì)濃度比較n=8，±s

注：與A組比較，*P ＜0.05;與B組比較，#P ＜0.01

SP(ng/L) 165±10 76±8# 100±10*#

3 討論

鎮(zhèn)痛機(jī)制為：痛覺信息向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)過程中，會刺激感覺神經(jīng)末梢并促使其釋放葡萄糖(Glu)和P物質(zhì)(SP)，Glu和SP作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中相應(yīng)的受體從而完成痛覺沖動向中樞的傳遞過程，進(jìn)而引起疼痛［5］。內(nèi)源性阿片肽物質(zhì)由特定的神經(jīng)元釋放后，可以激動感覺神經(jīng)突觸前后膜上的阿片類受體，然后通過G-蛋白偶聯(lián)機(jī)制，抑制腺苷酸環(huán)化酶的合成、促進(jìn)鉀離子(K+)的外流、減少鈣離子內(nèi)流，使突觸前膜釋放遞質(zhì)減少、突觸后膜發(fā)生超機(jī)化，最終會減弱或阻滯痛覺信號在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳遞，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。

近年大量研究證實P物質(zhì)是一種由初級感覺神經(jīng)元末梢釋放的可以傳遞痛覺信息的神經(jīng)遞質(zhì)。傷害性信息由傳入感覺神經(jīng)纖維傳遞到脊髓中樞，引起背根神經(jīng)細(xì)胞釋放P物質(zhì)，SP作用于細(xì)胞的突觸后膜，使突觸后膜的離子通透性發(fā)生改變，進(jìn)而引起突觸后膜電位發(fā)生改變，最終使突觸后神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)能狀態(tài)發(fā)生改變，傷害性感受神經(jīng)元被激活，完成了傷害性信息在中樞的傳遞［6］。

研究顯示，NO不僅是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種神經(jīng)信號的傳遞分子而且在外周神經(jīng)系統(tǒng)痛覺信息的傳遞和調(diào)制中起著促進(jìn)的作用［7］。

本實驗運用趾部切口痛大鼠模型，采用腹腔注射地佐辛給藥途徑，實驗結(jié)果證明：術(shù)前和術(shù)后腹腔注射地佐辛均可減少大鼠血液中NO及P物質(zhì)的濃度。測得血液中NO及P物質(zhì)濃度的表達(dá)與外周給予的傷害性刺激程度呈明顯的相關(guān)性，并且與大鼠行為學(xué)的疼痛累積評分呈一致性，這說明地佐辛可能通過作用于脊髓中相應(yīng)的阿片受體從而阻滯和減弱了痛覺信息向脊髓中樞的傳導(dǎo)和調(diào)制，大量實驗研究已證實NO及P物質(zhì)與傷害性信息在中樞的傳導(dǎo)和調(diào)制有關(guān)，本實驗中通過腹腔注射地佐辛產(chǎn)生脊髓鎮(zhèn)痛作用，阻止了痛信號在脊髓內(nèi)的傳導(dǎo)，產(chǎn)生抗傷害的作用。

許多研究證實P物質(zhì)和H、5-HT、BK是術(shù)后組織發(fā)生炎性反應(yīng)形成“炎性湯”的重要物質(zhì)，他們之間的惡性循環(huán)一旦形成便會建立一個級聯(lián)放大的炎性反應(yīng)，使機(jī)體的炎性反應(yīng)加劇，而這一網(wǎng)絡(luò)反應(yīng)很難被阻斷。如果在惡性循環(huán)形成之前被地佐辛的鎮(zhèn)痛作用所打破，那么就會減少P物質(zhì)的釋放，阻滯了P物質(zhì)介導(dǎo)的外周和中樞敏感化，減弱了痛覺信息在中樞的傳導(dǎo)，減輕了炎癥所致的疼痛反應(yīng)，發(fā)揮了地佐辛的超前鎮(zhèn)痛作用。

1 閆軍峰，郭麗霞，浦從義，等.不同劑量地佐辛復(fù)合異丙酚在無痛人工流產(chǎn)術(shù)中的應(yīng)用.河北醫(yī)藥，2011，33：1363-1364.

2 齊萬紅，陳暉，徐萍，等.地佐辛用于甲狀腺癌根治術(shù)的超前鎮(zhèn)痛.中國實用醫(yī)藥，2011，6：137-138.

3 江明性主編.藥理學(xué).第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1989.134-140.

4 Gharagozlou P，Hashemi E，DeLorey TM，etal.Pharmacological pro-files of opioid ligands at kappa opioid receptors.BMC Pharma-col，2006，6：3.

5 黃鐵花.地佐辛鎮(zhèn)痛作用與安全性研究.醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，8(29增)：3-4.

6 Wu ZZ，Guan BC，Li ZW，etal.Sustained potentiation by sub-stance P of NMDA-activated current in rat primary sensoryneurons.Brain Res，2004，10：117-126.

7 董錫臣，岳禮生，李文志.硬膜外腔嗎啡和氟呱利多超前鎮(zhèn)痛的臨床研究.臨床麻醉學(xué)雜志，2003，19：473.