三子散中川楝子的鑒別及梔子苷的含量測(cè)定

劉素梅，方忠意，韓 立，班付國(guó)，張躍京，臧合英

(河南省獸藥監(jiān)察所，鄭州 450008)

三子散為《中國(guó)獸藥典》2010版二部收載的一個(gè)獸藥品種［1］，主要含有訶子、川楝子和梔子等藥材，具有清熱解毒的功能，主要用于三焦熱盛，瘡黃腫毒，臟腑實(shí)熱的治療。該品種項(xiàng)下有顯微鑒別及訶子和梔子的薄層色譜鑒別，可以對(duì)方中各藥進(jìn)行有效鑒別，但沒有含量測(cè)定項(xiàng)，仍不能很好的控制藥品的質(zhì)量。通過高效液相色譜法測(cè)定梔子苷的含量，以及增加方中川楝子的薄層色譜鑒別，可以為藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試藥

1．1 儀器 高效液相色譜儀(Waters e2695，2489紫外檢測(cè)器)、電子天平(METTLER XP250)、超純水處理器(MILLIPORE MILLI－Q)等。

1．2 試藥與試劑 梔子苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110749－200511;沒食子酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110831－200302;川楝子對(duì)照藥材由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為121464－200506;供試品按處方制備。

乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 川楝子的薄層色譜鑒別 取三子散供試品6 g，加水80 mL，超聲處理1 h，放冷，離心，取上清液，用二氯甲烷振搖提取3次，每次25 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷－甲醇(16∶1)為展開劑［1］，展開，取出，晾干，噴以二甲氨基苯甲醛試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

按處方配比稱取除川楝子外其它藥材，按制備工藝制備樣品，作為川楝子陰性對(duì)照樣品，陰性對(duì)照樣品同法操作，在與藥材色譜相應(yīng)的位置上不顯斑點(diǎn)，陰性無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 川楝子薄層鑒別圖譜

2．2 梔子苷的含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件 色譜柱為 XBridge C18(5μm，4．6mm ×150mm)柱;流動(dòng)相為乙腈 － 水(88 ∶12);檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。

2．2．2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對(duì)照品15 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，制成每1 mL含300μg的溶液;精密量取5 mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含30μg的溶液，過0．45μm微孔濾膜，即得。

2．2．3 供試品溶液的制備 取本品0．3 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，精密稱定，超聲處理30 min，放至室溫，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。用微孔濾膜(0．45μm)濾過，即得。

2．2．4 線性范圍 取梔子苷對(duì)照品溶液(300 μg/mL)，用甲醇分別稀釋成10、15、30、50、150、300 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，按照濃度由低到高，精密吸取上述溶液各10μL，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值與相對(duì)應(yīng)的對(duì)照品溶液濃度計(jì)算回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=33146x+4089，相關(guān)系數(shù) r=0．99997，即在10～300μg/mL范圍內(nèi)，梔子苷峰面積與濃度有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖2。

圖2 梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2．2．5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品按照供試品溶液的制備方法同時(shí)制備6份，精密吸取上述溶液各10μL，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，計(jì)算梔子苷含量及其RSD。結(jié)果顯示(表1)，該方法具有很好的重復(fù)性。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2．2．6 回收率試驗(yàn) 取精密度項(xiàng)下已知含量的樣品0．15 g，分別加入與樣品所含梔子苷量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品，按照供試品溶液的制備方法處理，共制備6份，精密吸取上述溶液各10μL，進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，計(jì)算梔子苷含量，以下列公式計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

回收率=(實(shí)測(cè)值－供試品所含被測(cè)成分量)/對(duì)照品加入量×100%。

表2 梔子苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．2．7 專屬性試驗(yàn) 按處方配比稱取缺梔子外其它藥材并按制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品按照供試品溶液的制備方法處理，精密吸取10μL進(jìn)高效液相色譜儀進(jìn)行分析，結(jié)果陰性無干擾，液相色譜圖分別見圖3～圖5。

3 討論

3．1 川楝子薄層鑒別參考《中國(guó)獸藥典》2010版二部川楝子項(xiàng)下薄層鑒別方法［1］，用川楝子對(duì)照藥材做對(duì)照，顯色后色譜斑點(diǎn)有些模糊;在紫外燈(365 nm)下，供試品和對(duì)照藥材斑點(diǎn)比較多，均有一黃色斑點(diǎn)比較清晰，且和其他斑點(diǎn)分離較好，若能以該化合物做對(duì)照效果會(huì)更好，該物是否為川楝素，有待進(jìn)一步研究。

3．2 梔子苷含量測(cè)定時(shí)的流動(dòng)相參考了《中國(guó)獸藥典》2010版二部梔子項(xiàng)下含量測(cè)定方法，并根據(jù)儀器和色譜柱對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行了適當(dāng)調(diào)整。

3．3 在試驗(yàn)過程中還對(duì)訶子的薄層色譜法進(jìn)行了研究［3］，采用沒食子酸對(duì)照品作對(duì)照，結(jié)果供試品溶液色譜在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，但顯色劑三氯化鐵－鐵氰化鉀(1∶1)溶液會(huì)對(duì)硅膠造成一定的污染，使薄層板顯呈現(xiàn)不均勻的黃綠色。

3．4 梔子苷為梔子的特征性有效成分，故選擇梔子苷作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。

［1］ 中國(guó)獸藥典委員會(huì)．中國(guó)獸藥典2010年版二部［S］．

［2］ 李 麗，孟克巴牙爾，張久紅，等．蒙成藥三子散質(zhì)量控制方法概述［J］．中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2007，(4):60 －61．

［3］ 鄔衛(wèi)東，溫愛平，王烈群．薄層掃描法測(cè)定三子散中沒食子酸的含量［J］．中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2003，(2):34 －35．