玉屏風(fēng)散配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑對免疫抑制小鼠T細胞亞群影響的比較*

樊凱芳 趙建平 馮振宇

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024；2.山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，山西 太原 030013）

湯劑作為傳統(tǒng)中藥劑型，雖具有吸收快、療效好、隨證加減等優(yōu)點，但亦有服用攜帶不便、質(zhì)量標準不明等缺點。中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的優(yōu)質(zhì)藥材為原料，采用現(xiàn)代高新技術(shù)提取、濃縮、制粒而成的產(chǎn)品，具有可直接沖服、使用及攜帶方便等優(yōu)點，在臨床使用逐漸增多。玉屏風(fēng)散具有益氣固表、祛風(fēng)止汗、扶正固本功效，能促進淋巴細胞的增殖分化，對細胞免疫和體液免疫均有增強作用［1］。為給中藥配方顆粒替代中藥飲片提供依據(jù)，本研究通過實驗，將玉屏風(fēng)散配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑對免疫抑制小鼠的CD4+T，CD8+T的影響進行了比較。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小白鼠，6～8周，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，由中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所提供，許可證號：scxk20090017。

1.2 藥物 玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)組成，中藥飲片、配方顆粒（由同批次相應(yīng)飲片制備而成），均由廣州一方制藥有限公司提供。傳統(tǒng)飲片湯劑：黃芪30 g，白術(shù)30 g，防風(fēng)15 g，共計75 g/d，按傳統(tǒng)煎煮法制成水煎液，并濃縮至含生藥0.5、1 g/mL兩種濃度。配方顆粒湯劑：取與飲片劑量相當(dāng)?shù)呐浞筋w粒（黃芪顆粒6 g，白術(shù)顆粒9 g，防風(fēng)顆粒3 g），加水（80～100 ℃）配制成相應(yīng)的濃度（同傳統(tǒng)飲片）。

1.3 儀器與試劑 JA5003型電子分析天平（上海精科天平廠）；DDL-5冷凍離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱恒溫培養(yǎng)箱 （上海躍進醫(yī)療器械廠）；Facscalibur流式細胞儀（BD公司）；酶標儀（Laysystems Multiskan As-cent）。環(huán)磷酞胺（上海華聯(lián)制藥有限公司）；生理鹽水（山東齊都藥業(yè)有限公司，批號1D07091609）；FITC標記的大鼠抗小鼠CD8單克隆抗體 （美國EB公司）；PE標記的大鼠抗小鼠CD4單克隆抗體 （美國EB公司）。

1.4 分組與造模 72只實驗動物按隨機數(shù)字表法分為正常對照組、模型組、玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片湯劑低、高劑量組和配方顆粒湯劑低、高劑量組，每組12只。動物常規(guī)飼養(yǎng)1周后進行造模，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺制備免疫低下模型，除正常對照組外，各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg/kg，連續(xù)7 d，復(fù)制免疫低下模型，正常對照組腹腔注射等量的生理鹽水。

1.5 給藥方法 藥物劑量按人鼠體表面積折算等效比率劑量表［2］，計算出小鼠的等效劑量。傳統(tǒng)飲片湯劑低、高劑量組分別為 5、10 g/（kg·d），配方顆粒湯劑低、高劑量組同傳統(tǒng)飲片湯劑組，正常對照組和模型組對照組小鼠給予20 g/（kg·d）的生理鹽水溶液。各組于造模后均為每日灌胃1次，連續(xù)10 d。

1.6 標本采集與檢測 末次給藥24 h后，每組小鼠摘眼球收集血液。將血置于抗凝管中（含肝素），加入抗小鼠CD4單克隆抗體 （PE）和抗小鼠CD8單克隆抗體（FITC）各10μL，置4℃避光20min。加染色洗滌液1mL混勻，離心洗滌3次后棄上清。加入0.5 mL的固定液固定，置4℃存放30 min，流式細胞儀測定。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表1。與正常對照組比，模型組小鼠外周血CD4+T，CD8+T淋巴細胞率明顯降低（P＜0.01）。與模型組比，玉屏風(fēng)散飲片、玉屏風(fēng)散顆粒高劑量組外周血CD4+T，CD8+T淋巴細胞率均顯著升高 （P＜0.05），玉屏風(fēng)散飲片、配方顆粒低劑量組外周血CD4+T，CD8+T淋巴細胞率無明顯差異（P＞0.05）。玉屏風(fēng)散飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組間無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組小鼠外周血T細胞亞群細胞率比較（％，±s）

表1 各組小鼠外周血T細胞亞群細胞率比較（％，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 n CD4+T CD8+T正常對照組 12 62.52±1.90** 56.49±1.35**模型組 12 40.35±1.81 36.75±1.24玉屏風(fēng)散飲片低劑量組 12 47.18±2.00 39.67±1.46玉屏風(fēng)散飲片高劑量組 12 61.69±1.80* 54.58±1.64*玉屏風(fēng)散顆粒低劑量組 12 46.29±1.60 38.89±1.56玉屏風(fēng)散顆粒高劑量組 12 60.84±1.50* 53.58±1.78*

3 討論

玉屏風(fēng)散是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑，大量的實驗研究表明其對免疫功能低下的動物模型具有明顯的增強免疫功能作用［1］。T細胞亞群中的T輔助細胞和T抑制細胞對免疫反應(yīng)起調(diào)控作用，對維持免疫穩(wěn)定起重要作用。CD4+代表輔助性T細胞，CD8+代表抑制性和細胞毒性T細胞，CD4+，CD8+彼此相互調(diào)節(jié)，表現(xiàn)出輔助和抑制的作用，是免疫系統(tǒng)的核心。因而機體CD4T，CD8+T及CD4+/CD8+可以作為評價機體細胞免疫狀態(tài)的指標［3］。

為給中藥配方顆粒替代中藥飲片提供依據(jù)，本研究通過實驗觀察比較玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑對免疫抑制模型小鼠T細胞亞群的影響。實驗結(jié)果表明，模型組較正常對照組小鼠外周血CD4+T，CD8+T細胞率顯著降低，玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組均較環(huán)磷酰胺組小鼠外周血CD4T，CD8+T細胞率顯著升高，說明玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量均通過升高小鼠外周血CD4T，CD8+T細胞率，增強其T細胞免疫功能。且玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組間比較無顯著性差異，說明兩種湯劑等劑量間增強小鼠T細胞免疫功能作用基本相當(dāng)，為玉屏風(fēng)散配方顆粒在臨床上替代傳統(tǒng)飲片，進一步推廣其應(yīng)用提供一定的實驗依據(jù)。

［1］張紅軍，張曉莉，宋寶輝，等.玉屏風(fēng)散對免疫抑制小鼠的免疫功能的調(diào)節(jié)作用［J］.細胞與分子免疫學(xué)雜志，2001，17（4）：398.

［2］陳奇，王建華.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：33.

［3］王月飛，趙紅曄，王玉閣，等.玉屏風(fēng)散生物轉(zhuǎn)化液對免疫抑制小鼠細胞免疫的干預(yù)作用［J］.中國實驗方劑學(xué)，2010，16：（14）：176-178.