保肝復(fù)功丸水煎劑對(duì)大鼠急性肝損傷防護(hù)作用機(jī)制的研究

許 丹 于紅剛 金戰(zhàn)勇 吳洪斌

1.武漢大學(xué)人民醫(yī)院消化內(nèi)科 (湖北武漢，430060) 2.武漢市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科

保肝復(fù)功丸是武漢市中醫(yī)醫(yī)院名老中醫(yī)研制的驗(yàn)方，臨床研究發(fā)現(xiàn)具有護(hù)肝、改善肝功能作用。為探討其作用機(jī)制，又采用脂多糖 (LPS)誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的動(dòng)物模型，對(duì)其進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar雄性大鼠 (180～200g)，購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥物和試劑 黃芪20g，山藥、枸杞、當(dāng)歸、丹參、芍藥、沙參、桑椹子、麥冬各15g，柴胡、紅花、生地、熟地、山茱萸、五味子、山楂、刺蒺藜、郁金、木香各10g，川楝子8g，加水1500ml，浸泡30分鐘，煮沸15分鐘，蒸餾，制作不同濃度保肝復(fù)功丸水煎劑。試劑:脂多糖 (Lipoplysaccharides，LPS):L2880 E.colio55∶B5，美國(guó)Sigma公司;ALT、AST、SOD、MDA、GSH-Px測(cè)定試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物有限公司。

1.3 造模和給藥方法 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1天，按體重隨機(jī)分為5組:空白組、模型組、保肝復(fù)功丸低劑量組、保肝復(fù)功丸中劑量組、保肝復(fù)功丸高劑量組，每組10只。除空白組外，其余動(dòng)物腹腔注射LPS 10 mg/kg造模。造模后大鼠常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水，飼養(yǎng)室光照10小時(shí)，黑暗14小時(shí)，溫度21～25℃，濕度30% ～70%。造模成功后，空白組及模型組均給予10 ml/kg體積蒸餾水灌胃;保肝復(fù)功丸低、中、高劑量組分別于灌胃保肝復(fù)功丸415 g/kg、910g/kg、1804 g/kg濃度煎液，1次/d，連續(xù)12天。

1.4 血清ALT、AST及肝臟指數(shù)測(cè)定 全血離心后，取上清液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。肝臟指數(shù)=肝臟濕重/體重×100%。

1.5 肝臟MDA、SOD、GSH-Px的測(cè)定 取肝臟0.2～0.4g，加冷生理鹽水9倍，勻漿，離心后去上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)間均采用(±s)表示，多組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝臟指數(shù)及血清ALT、AST水平檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠ALT、AST及肝臟指數(shù)比較(±s)

表1 各組大鼠ALT、AST及肝臟指數(shù)比較(±s)

與空白組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05

組別 n ALT(U/L) AST(U/L) 肝臟指數(shù) (%)10 65.38±8.47 217.75±11.00 4.79±1.06模型組 10 703.37±64.2* 837.88±71.45* 6.16±0.78*小劑量組 10 346.20±67.27# 556.88±52.92# 5.74±0.54#中劑量組 10 123.75±30.26# 284.62±25.18# 5.64±0.87#大劑量組 10 79.63±13.45# 209.14±8.43# 5.38±0.58空白組#

2.2 各組大鼠肝組織中MDA、SOD、GSH-PX的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠肝勻漿中SOD、MDA和GSH-PX的結(jié)果比較(xˉ±s)

2.3 各組大鼠肝病理組織學(xué)觀察結(jié)果 光鏡下空白組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列整齊，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)清晰;模型組大鼠肝細(xì)胞存在大量點(diǎn)狀及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，壞死、小灶性壞死及灶性纖維化，肝細(xì)胞索排列紊亂;各治療組大鼠與模型組大鼠相比肝細(xì)胞索排列相對(duì)整齊、壞死灶明顯減少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減少。

3 討論

LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜內(nèi)毒素的主要成分，由親水性的多糖O抗原、特異性核心多糖和疏水的類脂A組成。類脂A是革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素的毒性成分，可引起革蘭氏陰性細(xì)菌激發(fā)宿主免疫應(yīng)答、導(dǎo)致機(jī)體損傷［1］。

MDA是自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，其含量的多少可間接反映機(jī)體細(xì)胞受氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度［2］。SOD主要作用是催化超氧陰離子的歧化反應(yīng)，抑制自由基啟動(dòng)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用，它可減少自由基的產(chǎn)生，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成，減輕肝細(xì)胞的損傷［3］。GSH-Px是一重要的催化過(guò)氧化物分解的酶類，它可以催化過(guò)氧化氫和脂質(zhì)過(guò)氧化物的還原。GSH是細(xì)胞合成的一種非酶性抗氧化劑，在細(xì)胞內(nèi)起抗氧化作用，是SOD、GSH-Px等酶類的供氫體。GSH保護(hù)細(xì)胞膜中含巰基的蛋白質(zhì)和含巰基的酶不被破壞，同時(shí)還可對(duì)抗自由基對(duì)重要臟器的損害，在活體細(xì)胞抗氧化中起重要保護(hù)作用［4，5］。

血清和肝組織中的ALT活性主要反映肝細(xì)胞損傷，AST可反映線粒體的受損程度;肝臟指數(shù)是肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量之比，在一定程度上反映肝臟炎性反應(yīng)的強(qiáng)度及腫脹程度。

研究表明，黃芪的有效成份之一黃芪多糖具有明確的抗氧化作用［6］，能提高血SOD、過(guò)氧化氫酶 (CAT)及GSH-Px活力，降低血漿、腦勻漿及肝勻漿中LPO水平;丹參的水溶性成分丹參酸乙能夠直接保護(hù)細(xì)胞膜，對(duì)肝細(xì)胞損傷具有防護(hù)作用［7］;當(dāng)歸提取物 (ELCAS)能通過(guò)增強(qiáng)抗氧化能力，激活ERK信號(hào)傳導(dǎo)途徑，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受氧自由基的損傷［8］;郁金具有保護(hù)肝細(xì)胞、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、抗癌、抗菌、抗氧化的作用［9］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，保肝復(fù)功丸可顯著降低ALT、AST水平;病理結(jié)果也表明保肝復(fù)功丸可減輕肝組織炎癥反應(yīng)，促進(jìn)損傷肝組織的修復(fù)。并且在不同劑量的保肝復(fù)功丸之間存在著一定的量效關(guān)系?？娠@著升高模型大鼠肝勻漿中SOD活性和GSH-Px水平，并降低模型大鼠肝勻漿中MDA的含量。提示保肝復(fù)功丸對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷具有一定的防護(hù)作用，其機(jī)制可能與其減少自由基生成，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，減少過(guò)氧化脂質(zhì)的形成，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力有關(guān)。

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