倒地鈴提取物降血糖作用研究△

譚銀豐，張小坡，李洪福，賴偉勇，李海龍，符乃光

(海南醫(yī)學(xué)院 海南省熱帶藥用植物研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571159)

倒地鈴提取物降血糖作用研究△

譚銀豐，張小坡，李洪福，賴偉勇，李海龍，符乃光*

(海南醫(yī)學(xué)院 海南省熱帶藥用植物研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571159)

目的：研究倒地鈴不同提取部位降血糖的作用。方法：用高脂高糖飼料喂養(yǎng)加小劑量注射鏈脲佐菌素(STZ)方法誘導(dǎo)小鼠2型糖尿病模型，用不同劑量的倒地鈴不同提取部位進(jìn)行干預(yù)，測定小鼠體重變化、空腹血糖、口服糖耐量和血清膽固醇(CHO)。結(jié)果：各組小鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，倒地鈴水提取物及30%醇洗脫物能顯著降低糖尿病小鼠空腹血糖(P<0.05)，提高1 h葡萄糖耐量(P<0.01)，60%醇洗脫物能提高小鼠1 h葡萄糖耐量(P<0.01)。結(jié)論：倒地鈴降血糖作用的主要有效部位為30%醇洗脫物、60%醇洗脫物。

倒地鈴；降糖；提取物

倒地鈴CardiospermumhalicacabumL.為無患子科倒地鈴屬植物，分布于兩廣、福建、海南等我國西南地區(qū)，廣泛生長于曠野田間，在海南民間常用倒地鈴全草熬水作為治療糖尿病偏方。Chinnadurai Veeramani等[1]研究了倒地鈴葉的乙醇提取物降血糖作用，發(fā)現(xiàn)倒地鈴葉乙醇提取物能顯著降低血糖和糖化血紅蛋白HbA1c，增加胰島素和血紅蛋白Hb，陳君等[2]對(duì)倒地鈴全草乙醇提取物的急性毒性和降血糖作用也進(jìn)行了初步研究，結(jié)果倒地鈴乙醇提取物能明顯降低四氧嘧啶和腎上腺素誘導(dǎo)的小鼠急性糖尿病的血糖值。本文擬根據(jù)民間用法經(jīng)驗(yàn)，用水提取倒地鈴全草，提取物上大孔樹脂，以不同濃度乙醇洗脫，考察不同洗脫部位的降血糖作用，以期確定倒地鈴降血糖作用的有效部位。

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、儀器和材料

昆明種小鼠，雄性，18～22 g，湖南省東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，動(dòng)物合格證號(hào)：HNACSDC20120866。高脂高糖飼料由廣東醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心加工提供。

D101大孔樹脂(安徽皖東樹脂科技有限公司)，安穩(wěn)血糖測試儀(長沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司)，V-650紫外-可見分光光度計(jì)(日本JASCO公司)，膽固醇試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司)。

倒地鈴藥材采自海口市周邊地區(qū)，經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室曾念開講師鑒定為無患子科植物倒地鈴CardiospermumhalicacabumL.全草。消渴丸(廣州中一藥業(yè)有限公司，批號(hào)：P01317)，鏈脲佐菌素(Sigma S0130-100 mg),檸檬酸、檸檬酸鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 試藥的制備

稱取曬干后切碎的倒地鈴2 kg，加入50 L水加熱煎煮2 h，過濾后濾渣再加50 L水加熱煎煮2 h，合并2次煎煮液，濃縮至一定體積，留取約200 mL,其余濃縮液上大孔樹脂，依次用30%，60%，90%乙醇洗脫，洗脫物蒸發(fā)干燥，計(jì)算得率依次分別為5.6%，1.1%，0.3%。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

取18～22 g雄性昆明種小鼠，隨機(jī)分為空白組、倒地鈴水提物組、30%乙醇洗脫物不同劑量組、60%乙醇洗脫物不同劑量組、90%乙醇洗脫物不同劑量組、陽性對(duì)照組、模型組，每組8只?？瞻捉M喂食常規(guī)飼料，其他組喂食高脂高糖飼料(飼料配方：2%膽固醇、10%豬油、0.4%膽鹽、10%蔗糖、77.6%常規(guī)飼料混合)。對(duì)不同時(shí)期小鼠進(jìn)行稱重，觀察體重變化。4周后，各給藥組分別灌胃給予相應(yīng)劑量藥物，陽性對(duì)照組給予消渴丸1.0 g·kg-1，空白組、模型組灌胃給予等體積0.9%氯化鈉溶液，每天給藥1次，連續(xù)給藥3周。給藥第2周后空白組注射0.1 mol·L-1檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=4.5),其余各組腹腔注射用緩沖液配制的鏈脲佐菌素(STZ)75 mg·kg-1，注射STZ后第3天尾靜脈取血測空腹血糖值(FBG)。注射STZ后第6天，小鼠禁食12 h后，灌胃葡萄糖溶液2.5 g·kg-1，1 h后尾靜脈取血測血糖值(糖耐量試驗(yàn)，GOTT)。注射后第7天，摘眼球取血，4 000 r·min-1離心10 min,取血清按試劑盒方法測定血清膽固醇(CHO)含量。實(shí)驗(yàn)過程如圖1所示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，結(jié)果見表1、表2。

結(jié)果表明，小鼠喂食高脂高糖飼料7周后，與喂食正常飼料小鼠比較，體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，倒地鈴水提取物及30%醇洗脫物能顯著降低糖尿病小鼠空腹血糖，提高1 h葡萄糖耐量，60%醇洗脫物能提高小鼠1 h葡萄糖耐量，水提取物和90%醇洗脫物能降低血清膽固醇。

圖1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)流程

表1 不同時(shí)期各組小鼠體重/g

表2 各組小鼠血糖血脂水平

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，與空白組比較，#P<0.05，#P<0.01

3 結(jié)論與討論

研究前期通過預(yù)試驗(yàn)研究了3種不同劑量的倒地鈴水提物對(duì)糖尿病模型小鼠血糖的作用，確定了倒地鈴水提物10 g·kg-1具有降低糖尿病模型小鼠血糖作用。進(jìn)一步研究倒地鈴水提物上大孔樹脂不經(jīng)水洗脫直接用不同濃度乙醇洗脫后，其降血糖主要有效部位集中在30%乙醇洗脫物、60%乙醇洗脫物；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示90%乙醇洗脫物能降低小鼠血清膽固醇，但該部位得率非常低(0.3%)，其降血脂作用潛在開發(fā)意義不大。文獻(xiàn)報(bào)道從倒地鈴中分離得到的化合物較少，目前已發(fā)現(xiàn)木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、金圣草黃素、棕櫚酸等成分[3]，為進(jìn)一步闡明倒地鈴降血糖作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，有必要進(jìn)行進(jìn)一步的化學(xué)分離及藥效學(xué)驗(yàn)證研究。

高熱量食物加低劑量STZ注射小鼠是較為常用的2型糖尿病模型造模方法，但是該造模方法不適用于雌性小鼠[4-5]，同時(shí)還要注意的是大部分高熱量飼料都添加大量的油脂，使飼料變得松軟油膩，不太適合小鼠的口味及嚙齒類動(dòng)物磨牙的習(xí)性，因此在飼養(yǎng)時(shí)常?；齑钌倭砍Ｒ?guī)飼料,作者印證了前人的研究[6]。

[1] Chinnadurai Veeramani,Ganesan Pushpavalli,Kodukkur Viswanathan Pugalendi.Antihyperglycaemic effect ofCardiospermumhalicacabumLinn.leaf extract on STZ-induced diabetic rats[J].J Appl Biomed,2008,6:19-26.

[2] 陳君，韋建華，苗偉生,等.倒地鈴急性毒性及降血糖作用的初步研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(5)：1083-1085.

[3] 韋建華，陳君，蔡少芳，等.倒地鈴化學(xué)成分研究(Ⅰ)[J].中草藥，2011,42(8)：1509-1511.

[4] 牛屹東，梁蜀龍，王新生.雌性小鼠不適于構(gòu)建HFD-STZ聯(lián)合誘導(dǎo)的2型糖尿病模型[J].四川動(dòng)物，2008，27(4):547-551.

[5] 王嘉惠，沈小玲，符崇威，等.高脂喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)大鼠2型糖尿病模型研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2011，32(4)：629-633.

[6] 楊娜，孟憲麗，董光新,等.鏈脲佐菌素加膳食誘導(dǎo)的小鼠2型糖尿病模型研究[J].中藥藥理與臨床，2007，23(1):74-76.

StudyonHypoglycemicEffectofCardiospermumhalicacabumL.Extracts

TAN Yin-feng，ZHANG Xiao-po，LAI Wei-yong,LI Hai-long,FU Nai-guang*

(HainanMedicalUniversity，HainanProvincialKeyLaboratoryofR&DofTropicalHerbs，Haikou571101，China)

Objective： To study the hypoglycemic activity of different extractive fraction fromCardiospermumhalicacabumL.Methods： Type 2 mice diabetic model were induced by high-fat,high-sugar fed and low dose streptozotocin(STZ)intraperitoneal injection.Every group mices were treated with different extractive fraction ofCardiospermumhalicacabumL.,the body weight,fasting blood-glucose and glucose tolerance were determined.Results: Compared with control group,the body weight had no significant difference.Compared with model group,water extract and 30% ethanol elution significantly reduced fasting blood-glucose(P<0.05),increased glucose tolerance(P<0.01)，60% ethanol elution significantly increased glucose tolerance(P<0.01).Conclusion: The hypoglycemic active fraction ofCardiospermumhalicacabumL.are 30% and 60% ethanol elutions.

Cardiospermumhalicacabum; Hypoglycemic; Extracts

2012-12-20)

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海南醫(yī)學(xué)院科研培育基金(HY2010-015)

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符乃光，男，高級(jí)工程師，主要從事藥物研究工作，Email:funaiguang@126.com