白僵蠶化學成分的基礎(chǔ)研究△

程鎖明，李國玉，王航宇，黃健，王金輝,*

(1.石河子大學藥學院 新疆特種植物藥資源重點實驗室，新疆 石河子 832000；2.沈陽藥科大學 中藥學院，遼寧 沈陽 110016)

中藥科技

白僵蠶化學成分的基礎(chǔ)研究△

程鎖明1，李國玉1，王航宇1，黃健2，王金輝1,2*

(1.石河子大學藥學院 新疆特種植物藥資源重點實驗室，新疆 石河子 832000；2.沈陽藥科大學 中藥學院，遼寧 沈陽 110016)

目的：對白僵蠶的化學成分進行分離鑒定。方法：采用溶劑提取、萃取、反復硅膠柱色譜(ODS、制備液相色譜法)等方法進行分離純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和譜學數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從白僵蠶分離得到4個化合物，分別鑒定為3β,5α-二羥基-(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-6-酮(1)、(22E,24S)-5α,8α-環(huán)二氧-24-甲基-膽甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇(2)、高精氨酸(3)、β-谷甾醇(4)。結(jié)論：化合物1～3為首次從該藥材中分離得到。

白僵蠶；化學成分；結(jié)構(gòu)鑒定

白僵蠶BombyxBatryticatus，異名僵蠶、天蟲、僵蟲、白僵蟲[1]，為蠶蛾科昆蟲家蠶BombyxmoriL.4～5齡的幼蟲感染(或人工接種)白僵菌[Beauveriabassiana(Bals.)Vuillant]而致死的干燥體，多于春、秋季生產(chǎn)，將感染白僵菌病死的蠶干燥。白僵蠶味咸、辛，性平；歸肝、肺、胃經(jīng)；具有息風止痙、祛風止痛、化痰散結(jié)功能；用于肝風夾痰、驚癇抽搐、小兒急驚、破傷風、中風口、風熱頭痛、目赤咽痛、風疹瘙癢、發(fā)頤痄腮[2]。白僵蠶主要分布于四川、廣西、江蘇、浙江、安徽、山東、甘肅等省，且以四川省質(zhì)量最優(yōu)[3]。

目前，關(guān)于白僵蠶藥理活性的研究，國內(nèi)外已有大量文獻報道，但對其化學成分的研究報道還比較少，為進一步開發(fā)利用白僵蠶，作者對白僵蠶的化學成分進行了分離、純化和鑒定，得到4個化合物，其中化合物1～3為首次從該藥材中分離所得，結(jié)構(gòu)式見圖1。

1 材料與儀器

X-5顯微熔點測試儀(北京泰克儀器有限公司)；Shimadzu UV-2401紫外可見分光光度計(日本島津公司)；IRAffinity-1 FTIR紅外光譜儀(Shimadzu)，Varian Vnmrs 600型核磁共振光譜儀(TMS作內(nèi)標，瑞士Bruker公司生產(chǎn))，Waters 600高效液相色譜儀；Waters 2489紫外檢測器，Waters LCT Premier XE time-of-flying質(zhì)譜儀(美國Waters公司)。

薄層色譜硅膠GF254和柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠有限公司)，ODS(30～50 m，日本YMC株式會社)，甲醇(色譜純，J.T Baker生產(chǎn))；石油醚(沸程60～90 ℃)、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等試劑均為市售分析純。

白僵蠶于2010年購于沈陽藥材市場,經(jīng)石河子大學藥學院譚勇教授鑒定為白僵蠶BombyxBatryticatus，標本號為No.20101001，標本存于石河子大學藥學院。

圖1 化合物1～3結(jié)構(gòu)

2 提取分離

白僵蠶10 kg，用95%乙醇水溶液回流提取3次，濃縮得浸膏810 g，將浸膏混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物376 g。該萃取物經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(100∶0～0∶100)系統(tǒng)梯度洗脫，所得流分經(jīng)TLC分析合并相同組分后，運用反復硅膠柱色譜、開放式ODS柱色譜、RP-HPLC及重結(jié)晶等方法分離得到化合物1(14.2 mg)、2(19.5 mg)、3(20.3 mg)、4(103.4 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)顯示有2個單峰的甲基質(zhì)子信號δ0.52和0.81；4個雙峰的甲基質(zhì)子信號δ0.77,0.79,0.88,0.98；3個含氧質(zhì)子信號δ3.69；1個三元取代的烯鍵質(zhì)子信號δ5.15；1組烯鍵質(zhì)子信號δ5.15,5.23。13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6)顯示有28個碳信號，1個酮羰基信號δ198.7；2組雙鍵碳信號δ119.4和131.6及δ135.1和163.3；23個sp3雜化的碳信號δ12.4,15.8,17.3,19.5,19.8,20.9,22.0,21.3,27.6,30.0,30.4,32.5,34.4,35.9,40.0,40.2,42.0,44.0,43.2,54.8，55.2,65.5,76.0，見表1。

波譜數(shù)據(jù)與文獻[4-5]報道基本一致，結(jié)合IR，HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為3β,5α-二羥基-(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-6-酮[3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-6-one]。

表1 化合物1和2的1H-NMR(600 MHz)和13C-NMR(150 MHz)數(shù)據(jù)

3.2 化合物2

1H-NMR(600 MHz,CDCl3)顯示有2個單峰的甲基質(zhì)子信號δ0.71,1.09；4個雙峰的甲基質(zhì)子信號δ0.81,0.82,0.89,1.00；1個含氧質(zhì)子信號δ3.99；1個三元取代的烯鍵質(zhì)子信號δ3.99；2組烯鍵質(zhì)子信號δ5.14,5.17和δ6.27,6.59。13C-NMR(150 MHz,CDCl3)顯示有29個碳信號，包括3組雙鍵碳信號δ142.4和119.6、δ135.0和132.2、δ135.4和130.5；3個含氧碳信號δ66.0,78.2,82.7；19個sp3雜化的碳信號δ12.8,17.5,19.5,19.9,20.6,20.8,25.4,28.5,30.3,32.4,32.9,35.9,37.8,39.8,41.0,42.6,43.5,48.0,55.8,見表1。

波譜數(shù)據(jù)與文獻[6-7]報道基本一致，結(jié)合IR,HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為(22E,24S)-5α,8α-環(huán)二氧-24-甲基-膽甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇[(22E,24S)-5α,8α-epidioxy-24-methyl-cholesta-6,9(11),22-trien-3β-ol]。

3.3 化合物3

1H-NMR(600 MHz,CD3OD)顯示有1個與-NH-相連的質(zhì)子信號δ2.84 (2H,td,H-6)；1個與-NH2相連的質(zhì)子信號δ3.91(1H,dd,H-2)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)顯示有6個碳信號，其中有1個羰基碳信號δ176.9；1個與NH相連的雙鍵碳信號δ156.6；5個sp3雜化的碳信號δ23.6,26.0,28.7,39.9，59.8。HMBC譜顯示δ3.91 (1H,dd,H-2)與C-1,3,5遠程相關(guān)，δ2.11(2H,dd,H-3)與C-2,4,5相關(guān)，δ1.72 (2H,H-4)與C-3,5相關(guān)，δ1.95 (2H,H-5)與C-2,3,4,6相關(guān)，δ2.84 (2H,td,H-6)與C-4,5,6′相關(guān)，具體數(shù)值見表2。

波譜數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，結(jié)合UV,IR,HR-ESI-TOF-MS數(shù)據(jù)最終確定其結(jié)構(gòu)為高精氨酸(Homoarginine)。

表2 化合物3的1H-NMR(600 MHz)和13C-NMR(150 MHz)數(shù)據(jù)

3.4 化合物4

無色針狀結(jié)晶(石油醚-丙酮)，不溶于冷甲醇,可溶于三氯甲烷和熱甲醇,mp 136～137 ℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)呈污綠色，示存在甾體母核。與已知對照品β-谷甾醇共薄層檢測，在3種溶劑系統(tǒng)下TLC分析，二者薄層色譜行為完全一致，在紫外燈(254 nm)下觀察無熒光斑點,10%硫酸乙醇溶液105 ℃加熱顯紫紅色斑點，香草醛-濃硫酸顯紫紅色，鑒定其為β-谷甾醇(β-sitosterol)[9]。

4 討論

白僵蠶為中國中醫(yī)臨床常用的中藥材，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)具有抗凝、抗血栓、抗驚厥、抗癌、降糖、降脂等作用，目前多用于治療癲癇、頑固性頭痛等疾病[3],含有的化學成分比較復雜，主要有甾體、生物堿、環(huán)肽、氨基酸等，對白僵蠶化學成分的研究有助于我們發(fā)現(xiàn)其中的活性成分，為白僵蠶質(zhì)量標準的建立和進一步開發(fā)打下基礎(chǔ)。

致謝：感謝石河子大學譚勇教授鑒定藥材； 感謝新疆大學分析測試中心、新疆理化所分析測試中心、新疆醫(yī)科大學分析測試中心在測試時給予的大力幫助。

[1] 南京中醫(yī)藥大學. 中藥大辭典[M]. 第二版.上冊.上海：上海科學技術(shù)出版社,2006：1020-1022.

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[3] 黃曉雪. 僵蠶的生藥學及藥理活性研究[D]. 長春：吉林農(nóng)業(yè)大學,2008.

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StudyonChemicalConstituentsofBombyxBatryticatus

CHENG Suo-ming1,LI Guo-yu1,WANG Hang-yu1,HUANG Jian2,WANG Jin-hui1,2*

(1.SchoolofPharmacy,ShiheziUniversity/KeyLaboratoryofPhytomedicineResources&ModernizationofTCM,ShiheziXinjiang832002,China；2.SchoolofTraditionalChineseMatericaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110016,China)

Objective： To investigate the chemical constitutents ofBombyxbatryticatus.Methods： The compounds were isolated by means of solvent extraction,abstraction,chromatography on silica gel,ODS,and preparative RP-HPLC. The structures were identified by spectral analysis and physicochemical evidence.Results： Four compounds were isolated from theBombyxBatryticatusand identified as 3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-6-one (1),(22E,24S)-5α,8α-epidioxy-24-methylcholesta-6,9(11),22-trien-3β-ol (2),homoarginine (3),andβ-sitosterol (4).Conclusion： Compounds1～3were isolated fromB.Batryticatusfor the first time.

Bombyxbatryticatus； Chemical constituents； Structure identification

2013-03-28)

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國家科技支撐計劃(2012BAI30B02),石河子大學科學技術(shù)研究發(fā)展計劃(ZRKX2009ZD05)

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王金輝，E-mail：tcm_shz@yahoo.cn