HPLC測(cè)定明目地黃丸(濃縮丸)中馬錢苷的含量

梁云，賈忠，韓世龍

(1.甘肅省蘭州市肺科醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730046；2.蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046)

HPLC測(cè)定明目地黃丸(濃縮丸)中馬錢苷的含量

梁云*，賈忠1，韓世龍2

(1.甘肅省蘭州市肺科醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730046；2.蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046)

目的：建立明目地黃丸(濃縮丸)中馬錢苷的含量測(cè)定方法。方法:采用高效液相色譜法。色譜柱為C18柱，流動(dòng)相為四氫呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為236 nm。結(jié)果:馬錢苷平均回收率為98.18%，RSD=1.70%(n=6)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于明目地黃丸(濃縮丸)質(zhì)量控制。

明目地黃丸；馬錢苷；高效液相色譜法；含量

明目地黃丸(濃縮丸)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第九冊(cè)，由山茱萸、牡丹皮、枸杞子、菊花、當(dāng)歸等組成，具有滋腎，養(yǎng)肝，明目功能，用于肝腎陰虛，目澀畏光，視物模糊，迎風(fēng)流淚[1]。目前標(biāo)準(zhǔn)中尚無(wú)含量控制指標(biāo)。山茱萸中藥效成分馬錢苷具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎和抗休克等諸多藥理作用[2-6]?；隈R錢苷在復(fù)方制劑中作為指標(biāo)成分的必要性，許多學(xué)者在馬錢苷的提取和含量測(cè)定方面進(jìn)行了大量研究[7-11]，本實(shí)驗(yàn)在相關(guān)研究的基礎(chǔ)上采用高效液相色譜法測(cè)定明目地黃丸(濃縮丸)中馬錢苷的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，為該制劑的質(zhì)量控制提供了定量檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

島津(SHIMADZU)LC-10AVP高效液相色譜儀(日本島津)；CQ250超聲清洗器(上海醫(yī)療器械廠)。

馬錢苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111640-200401，供含量測(cè)定用)；明目地黃丸(濃縮丸)(蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號(hào)：20050712，20050715，20050816)；乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：phenomenex?，desc：Luna 5 u C18100A C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相：四氫呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：236 nm。理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。色譜圖見圖1～3。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取馬錢苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取馬錢苷對(duì)照品約10.1 mg，精密稱定，用甲醇溶解并稀釋至50 mL，搖勻，作為貯備液(0.202 mg·mL-1)。精密量取貯備液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 mL，分別置于25 mL量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=1 145 962X-3 576.086(r=0.999 9)，線性范圍：0.04～0.404 μg。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取馬錢苷對(duì)照品溶液(21.0 μg·mL-1)，連續(xù)進(jìn)樣5次，其RSD=0.510%，本法的重復(fù)性較好，能滿足定量分析要求。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 按上述供試品溶液的制備方法及色譜條件，重復(fù)測(cè)定同一批明目地黃丸(濃縮丸)(批號(hào)：20050712)6次，其平均含量為0.674 3 mg·g-1，RSD=0.85%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取明目地黃丸(濃縮丸)(批號(hào)：20050712)，制備供試品溶液，分別于0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 h分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定馬錢苷峰面積，其RSD=0.59%，結(jié)果表明供試品溶液在9 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 取明目地黃丸(濃縮丸)(批號(hào)：20050712)，(測(cè)定其馬錢苷含量為0.676 5 mg·g-1)，精密稱取0.5 g，共取6份，置量瓶中，分別精密加入馬錢苷對(duì)照品溶液(濃度為0.012 5 mg·mL-1)25 mL，按含量測(cè)定方法中色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 明目地黃丸中馬錢苷回收率測(cè)定

注：馬錢苷對(duì)照品加入量均為0.304 0 mg

2.3.6 專屬性考察 按明目地黃丸(濃縮丸)制備工藝制備山茱萸陰性樣品，按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明山茱萸陰性樣品色譜圖在與馬錢苷峰相同保留時(shí)間處無(wú)雜質(zhì)峰干擾。試驗(yàn)表明本測(cè)定方法具有較強(qiáng)的專屬性。馬錢苷對(duì)照品色譜圖、供試品色譜圖、山茱萸陰性色譜圖分別見圖1～3。

2.4 樣品含量測(cè)定

取20050712，20050715，20050816 3批明目地黃丸(濃縮丸)，按上述方法測(cè)定，結(jié)果馬錢苷含量分別為0.675 2，0.420 3，0.478 6 mg·g-1。

圖1 馬錢苷對(duì)照品HPLC圖

圖2 明目地黃丸樣品HPLC圖

圖3 缺山茱萸陰性對(duì)照品HPLC圖

3 討論

實(shí)驗(yàn)對(duì)比了四氫呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(13∶87)、四氫呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)、乙腈-水(15∶85)、甲醇-水(23∶77)4種流動(dòng)相，結(jié)果表明以四氫呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)作為流動(dòng)相時(shí)馬錢苷峰與雜質(zhì)峰的分離效果最佳，決定采用其作為測(cè)定方法的流動(dòng)相。

在確定供試品溶液的提取方法時(shí)，我們選用超聲和回流兩種提取方法，并選擇了不同提取時(shí)間，以馬錢苷含量測(cè)定值為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明超聲處理與加熱回流提取均可有效提取制劑中的馬錢苷，但由于超聲處理更易于操作，決定采用超聲處理提取。

該方法穩(wěn)定可靠，精密度高，操作簡(jiǎn)便，可用于明目地黃丸(濃縮丸)的質(zhì)量控制。

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ContentDeterminationofLoganininMingmuDihuangPillsbyHPLC

LIANG Yun1*, JIA Zhong1, HAN Shi-long2

(1.PulmonaryHospitalofLanzhou,Lanzhou730046,China;2.LanzhouFociPharmaceuticalCo.,Ltd.,Lanzhou730046,China)

Objective：To establish a HPLC method for the content determination of loganin in Mingmu dihuang pills.Methods: Samples were determined by HPLC on the C18column. The column temperature was -30 ℃. The mobile phase was consisted of tetrahydrofuran-acetonitrile-methanol (1∶8∶4)-0.05% phosphoric acid (9∶91). The flow rate was 1.0 mL·min-1at UV detection wavelength of 236 nm.Results: The average recovery of loganin is 98.18% (RSD=1.70%,n=6).Conclusion: The method is specific, sensitive and reproducibility for quality control of Mingmu dihuang pills.

Mingmu dihuang pills; Loganin; HPLC; Content

2011-08-12)

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梁云，Tel:(0931)8361836，E-mail：lzlicaidong@163.com