黃花鐵線蓮中香豆乙酸的抗炎活性研究△

涂院海，楊曉軍

(1.延安大學附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000；2.延安大學化學與化工學院，陜西 延安 716000)

黃花鐵線蓮中香豆乙酸的抗炎活性研究△

涂院海1*，楊曉軍2

(1.延安大學附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000；2.延安大學化學與化工學院，陜西 延安 716000)

目的：研究延安本地植物黃花鐵線蓮化學成分香豆乙酸在風濕病治療中的藥用價值。方法：在獲得的5種化合物中，選香豆乙酸進行動物急性毒性及抗炎活性實驗。結(jié)果：化合物香豆乙酸無急性毒性反應(yīng)，且具有良好的抗炎活性。結(jié)論：延安本地生長植物黃花鐵線蓮所提取化學成分香豆乙酸具有良好的抗炎活性，對治療風濕病關(guān)節(jié)炎有很好的藥用價值。

黃花鐵線蓮；化學成分；香豆乙酸；抗炎活性；風濕病

黃花鐵線蓮Clematis intricata Bunge是毛茛科鐵線蓮屬野生草本植物，在我國北方各省普遍生長，別名狗豆蔓、蘿蘿蔓，商品名透骨草，以全草及葉入藥。夏秋采全草，曬干，摘葉曬干。味辛，性溫，有微毒，具有祛風除濕，活血止痛，消腫作用。外用主治風濕性關(guān)節(jié)炎，民間常有用鮮草搗爛外敷治療關(guān)節(jié)、軟組織腫痛[1-2]。

為了進一步挖掘中草藥在風濕病治療中的有效途徑，提高臨床療效，減少化學藥帶來的不良反應(yīng)，最終為進入臨床應(yīng)用研究奠定理論基礎(chǔ)，作者采集位于延安地區(qū)的野生植物黃花鐵線蓮全草，通過硅膠和凝膠柱色譜分離，利用多種波譜技術(shù)鑒定化學結(jié)構(gòu)[3-4]，獲得5種化合物。選擇其中3種成分進行了動物急性毒性實驗和抗炎活性實驗，結(jié)果3種成分均未發(fā)現(xiàn)急性毒性反應(yīng)，且均具有良好的抗炎消腫作用。本文僅對香豆乙酸(結(jié)構(gòu)式見圖1)的動物急性毒性、抗炎活性作單獨報道，探討其對風濕病的藥用價值。

圖1 香豆乙酸的化學結(jié)構(gòu)式

1 材料

1.1 藥物與試劑

復方七葉皂苷鈉凝膠(山東綠葉制藥有限公司，批號：20100953，陽性對照用)，交叉菜膠(美國Sigma公司)，二甲苯(北京益利精細化學有限公司)。

香豆乙酸的制備：黃花鐵線蓮(采集自陜西省志丹縣，由延安大學生命科學院劉世鵬老師鑒定為Clematis intricata Bunge，自然曬干至恒重，粉碎。在超聲波輻射下用70％乙醇提取，提取液減壓濃縮得暗褐色浸膏。暗褐色浸膏用硅膠柱層析分離得到香豆乙酸組分。

1.2 動物與儀器

1.2.1 實驗動物：ICR小鼠，體重18～22g；SD大鼠，體重80～110g，由西安交通大學實驗動物中心提供，合格證號：0003240，許可證號：SCXK(陜)2007-001。

1.2.2 儀器 1012-P電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；YLS-7A足趾容積測量儀(山東醫(yī)科大學)；YLS-Q4耳腫打耳器(山東醫(yī)科大學)。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性毒性實驗

取ICR小鼠2只，給藥前禁食12h，按16.67mg·mL-1最大濃度，按 0.4mL·(10g)-1的最大給藥體積(折算給藥劑量：666.8mg·kg-1)，24h內(nèi)灌藥2次，給藥后觀察小鼠一般情況。2只小鼠給藥后大便正常，無死亡，活動自如，進食、飲水正常，也無明顯中毒反應(yīng)，提示本品難以測出LD50，故選擇最大受試藥物量實驗[5]。

最大受試藥物量實驗：取小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g，隨機分為正常對照組及給藥組，每組各20只小鼠(雌雄各半)，給藥前禁食12h，給藥組以33.3mg·mL-1濃度的香豆乙酸乳懸液，按0.4mL·(10g)-1(折算給藥劑量：1 333.6mg·kg-1)，24h內(nèi)2次灌胃給藥，給對照組同體積色拉油，連續(xù)觀察14d，詳細記錄小鼠行為活動、狀態(tài)、飲食、大小便及毛色、分泌物等。

結(jié)果給藥后0.5～3h，小鼠出現(xiàn)大汗、蜷縮等現(xiàn)象，隨后觀察，小鼠大便正常呈濕潤顆粒狀，無死亡，活動自如，進食、飲水均正常，皮毛光潔，口、鼻、眼及肛門清潔無分泌物，連續(xù)觀察兩周，體重有增加，給藥前體重、第7d、第14d體重見表1，給藥組體重與對照組體重差異無統(tǒng)計學意義。解剖小鼠，發(fā)現(xiàn)胸腔、腹腔未見異常液體，腸管未見脹氣，心、肝、脾、肺、腎等重要臟器未見顏色、形態(tài)異常，沒有出血點或其他病理改變，胃黏膜顏色紅潤，無出血點或潰瘍，尸檢無異常。在此劑量下未觀察到香豆乙酸的急性毒性反應(yīng)。/g

表1 香豆乙酸急性毒性小鼠體重(±s，n＝20)

表1 香豆乙酸急性毒性小鼠體重(±s，n＝20)

注：給藥組與對照組比較，P＞0.05

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2.2 抗炎活性實驗

實驗組通過角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及二甲苯致小鼠耳腫脹，利用復方七葉皂苷鈉乳膏作對照，觀察香豆乙酸外涂致炎部位對腫脹的減輕程度。

2.2.1 對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 按方法[6]取SD大鼠40只，體重80～110g，雌雄各半。隨機分為4組，每組10只。分別為模型組，陽性藥組，香豆乙酸大、小劑量組。每鼠采用足趾容積測量儀測量標記位置以下右后肢的容積(mL)，作為致炎前正常值，然后分別在大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1mL/只致炎，即可涂藥：大劑量組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.4mL(濃度16.67mg·mL-1)，小劑量組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.2mL，陽性對照組每鼠右后肢足跖皮膚涂0.4mL。給藥后1h，采用足趾容積測量儀測量標記位置以下的右后肢的容積(mL)，以后每隔1h用以上方法測右后肢足跖容積，共測量5h。計算腫脹度，腫脹度(mL)＝給藥后足容積-給藥前足容積，各組與模型對照組比較，組間進行t檢驗，結(jié)果見表2。由表2可見，與模型組比較，陽性藥，香豆乙酸大、小劑量組從致炎后1～5h均能明顯抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，提示香豆乙酸對化學性致炎有抑制作用。

2.2.2 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 按文獻方法[7]，取健康ICR小鼠40只，體重18～22g，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，分別為模型組，陽性藥組(復方七葉皂苷鈉凝膠)，香豆乙酸大、小劑量組。給小鼠右耳前后兩面涂二甲苯約50μL，左耳作為正常對照。即可涂藥：大劑量組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂100μL，小劑量組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂50μL，陽性對照組每小鼠右耳前后兩面皮膚涂100μL。給藥后1h后，將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mm打孔器在左右耳同一位置打孔，電子天平上稱重，右耳重量減去左耳重量為腫脹度，計算腫脹百分率，腫脹百分率＝(右耳重量-左耳重量/左耳重量)×100，組間比較，進行t檢驗，結(jié)果見表3。從表3可以看出，香豆乙酸大、小劑量組均能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，提示香豆乙酸對急性炎癥有一定的抑制作用。

表2 KSHT-II對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(±s，n＝10)/mL

表2 KSHT-II對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(±s，n＝10)/mL

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

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表3 KSHT-II對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s，n＝10)

表3 KSHT-II對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s，n＝10)

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

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3 結(jié)果

黃花鐵線蓮中提取的香豆乙酸通過動物急性毒性實驗，顯示均無明顯的毒性反應(yīng)，給藥組與對照組比較，P＞0.05。通過大鼠耳腫實驗和小鼠足跖腫實驗，與復方七葉皂苷鈉凝膠模型對照組對比，有良好的抗炎消腫作用。與模型對照組比較，急性毒性實驗P＞0.05；抗炎活性大鼠足跖腫實驗P＜0.05，P＜0.01；小鼠耳腫實驗P＜0.01。

4 討論

風濕病涉及醫(yī)學多學科領(lǐng)域，病因復雜，病程長，療效慢，且多數(shù)伴隨骨關(guān)節(jié)、滑膜腫脹，屬于一組疑難雜癥。臨床治療中因長期口服用藥導致肝腎及血液系統(tǒng)和胃腸道損害，是臨床醫(yī)生難于顧全的疑難問題[8]。作者在多年風濕病臨床工作中，通過民間調(diào)查走訪，翻閱資料，挑選陜北延安野生植物黃花鐵線蓮為研究對象，著手開展了對其化學成分、急性毒性和抗炎活性研究，分析黃花鐵線蓮單體化合物在風濕病治療中的作用。

黃花鐵線蓮屬于透骨草體系的1種，不同來源的透骨草，其療效不完全一致[9-11]。資料調(diào)查有不少學者應(yīng)用黃花鐵線蓮植物外敷或配伍煎汁儀器導入治療風濕病及關(guān)節(jié)炎、腰腿痛、頸椎病等[1-2]。但是將提純的單體化學成分研究應(yīng)用于風濕病臨床尚未見報道。通過對黃花鐵線蓮提取的化學成分香豆乙酸進行動物急性毒性實驗和抗炎活性實驗，結(jié)果證明未發(fā)現(xiàn)急性毒性反應(yīng)。通過大、小鼠耳腫和足跖腫實驗，與復方七葉皂苷鈉凝膠對比，有良好的抗炎活性。

研究結(jié)果表明，延安本地野生黃花鐵線蓮植物中提純的單體化學成分香豆乙酸無毒性，且具有良好的抗炎活性，在風濕病治療方面有較高的藥用價值，并消除了局部起水泡的不良反應(yīng)，為進一步實施我國黃花鐵線蓮中單體化合物體內(nèi)外用藥研究與開發(fā)提供了有利的依據(jù)，有可能成為高效、低毒、無內(nèi)臟損害的治療風濕病的理想藥物。

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《自然保護區(qū)展望：以歷史使命、生存戰(zhàn)略為視覺》簡介

陶思明的《自然保護區(qū)展望：以歷史使命、生存戰(zhàn)略為視覺》一書由科學出版社出版發(fā)行。作者以自己從事中藥材生產(chǎn)管理的十年親歷體驗，在“人的生存保障”、“康體健身”等多個章節(jié)涉及到對中藥材的論述，認為追根溯源，振興中醫(yī)藥事業(yè)的基本問題之一就是要保護好中藥材的天然來源——動物、植物、微生物，發(fā)展生產(chǎn)，保障供給，通過自然保護區(qū)加強保護，首先保證種源不滅絕，資源量也會隨之增加，不只是后代人，現(xiàn)在的人就可以大受其益。

作者闡述了自然保護區(qū)的歷史使命和生存戰(zhàn)略兩大基本問題，試圖建立自然保護區(qū)與經(jīng)濟、社會、文化、教育、科學以及人們?nèi)粘Ｉa(chǎn)、生活等廣泛領(lǐng)域的密切聯(lián)系，認為大力增強社會各界和廣大公眾對保護區(qū)多種功能的更全面了解，積極發(fā)展公民參與決策，永存人民心中的自然保護區(qū)，才能永遠立于不敗之地；揭示了自然保護區(qū)以“自然為本”的本質(zhì)和“以人為本”社會中“人”在捍衛(wèi)自然生態(tài)利益上的局限性，認為每個保護區(qū)的每一天都受到經(jīng)濟利益的覬覦和挑戰(zhàn)，必須始終堅持生態(tài)優(yōu)先的思想和決策方向，始終追求有利于落實保護的管理制度和措施，以實現(xiàn)國家保護目標為導向，真正管住有明顯危害的開發(fā)建設(shè)活動，真正避免人主動施加的不可控威脅，解放自然力，從而展現(xiàn)自然保護區(qū)事業(yè)樂觀的未來。

該書可供各級政府經(jīng)濟發(fā)展、自然保護、公共服務(wù)、財政支持等部門，國土規(guī)劃、產(chǎn)業(yè)布局、區(qū)域發(fā)展、資源環(huán)境等研究單位，以及涉及自然保護區(qū)政策法規(guī)制定、開發(fā)建設(shè)管理、社區(qū)工作、公眾傳媒、環(huán)保志愿者和大專院校相關(guān)專業(yè)師生等閱讀和參考。

Study on Anti-inflammatory Activity of Coumadin Acetic Acid in Clematis intricata

TU Yuan-hai1，YANG Xiao-jun2
(1.Yanan University Affiliated Hospital，Yanan 716000，China；2.Yanan University Chemistry and Chemical Engineering Institute，Yanan 716000，China)

Objective：To study coumadin acetic acid in Clematis intricata on the treatment of rheumatism medicinal value.M ethods：Choose coumadin acetic acid from the 5 kinds of compound to observe effects on animal acute toxicity and anti-inflammatory activity experiment.Results：Compound coumaric acid had no acute toxicity reaction，and had good anti-inflammatory activity.Conclusion：Coumadin acetic acid has good anti-inflammatory in the treatment of rheumatism arthritis，which had very good medicinal value.

Clematis intricata；Coumadin acetic acid；Anti-inflammatory；Activity rheumatism

2011-12-12)

延安市科技局資助科研項目(2008年)

*[通訊作者]涂院海，E-mail：qifengqi＠163.com