正交試驗(yàn)法優(yōu)選血管康袋泡茶的最佳服用方法*

陳耀章，張小華，李憲奎

(甘肅省中醫(yī)院藥劑科，甘肅蘭州730050)

血管康袋泡茶是以槐米為主要成分制備的中藥茶劑，具有降低血管脆性、恢復(fù)血管彈性、維持血管抵抗力、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量、降血壓、降血脂、清除自由基的作用［1］，用于預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、腦溢血、心腦血管疾病及高血壓等病?，F(xiàn)為我院制劑并廣泛用于臨床，長(zhǎng)期服用效果良好，無(wú)不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)以血管康袋泡茶不同用法的蘆丁體外溶出度為考察指標(biāo)，測(cè)定其不同服用方法時(shí)的體外溶出情況，為選擇最佳的服用方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 藥品、試劑與儀器

血管康袋泡茶，為甘肅省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號(hào)為甘藥制字Z04000831，由甘肅省中醫(yī)院提供。蘆丁對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100080－200707；水為超純水；其余試劑均為分析純。LAMBDA35型紫外 －可見(jiàn)分光光譜儀，美國(guó)PerKin Elmer公司產(chǎn)品；METTLER AE240電子分析天平，賽多利斯公司產(chǎn)品；HS6150型超聲波清洗器，上海楚定分析儀器有限公司產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)定蘆丁對(duì)照品0.121 4g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解后定容至刻度。精密量取10.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容到刻度，作為蘆丁對(duì)照品儲(chǔ)備液備用。

2.1.2 供試品溶液的制備

取袋泡茶10 g，加水煎煮后，濃縮至50 mL，精密量取供試液5.0 mL，轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，搖勻；精密量取 2.5 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL；加50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min；加100 g/L的硝酸鋁溶液 1 mL，搖勻，放置 6 min；加氫氧化鈉試液10 mL，加水至刻度，放置 15 min，備用［2］。

2.1.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

參照文獻(xiàn)方法［3］，于200～800 nm波長(zhǎng)范圍掃描吸收光譜，確定在500 nm波長(zhǎng)處有最大吸收；同時(shí)參照2010版《中國(guó)藥典》一部，確定在500 nm測(cè)定吸收度。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取 2.1.1 項(xiàng)下蘆丁儲(chǔ)備液 1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 mL，分別置于 25 mL 容量瓶中；各加水至6 mL；加50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置 6 min；100 g/L的硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。按2010版《中國(guó)藥典》一部附錄VA紫外－可見(jiàn)分光光度法，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.009 44+0.376 01X，(r=0.998 0)。見(jiàn)表1。

表1 不同對(duì)照品溶液所測(cè)吸收度

2.2 樣品體外溶出度的測(cè)定

2.2.1 不同用法樣品制備的正交試驗(yàn)

根據(jù)血管康袋泡茶的服用方法，取10g袋泡茶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)表2的 L9(34)正交試驗(yàn)條件煎煮后，將各供試液濃縮至50 mL，精密量取5.0 mL，按照2.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備和測(cè)定方法進(jìn)行比色測(cè)定。對(duì)加水倍數(shù)(A)、煎煮次數(shù)(B)及煎煮時(shí)間(C)3個(gè)因素進(jìn)行考察［4］，以主要成分蘆丁的體外溶出度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選最佳服用方法。因素水平見(jiàn)表2。

表2 不同用法樣品制備的正交試驗(yàn)表

2.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，水提取正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 水提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 正交試驗(yàn)方差分析表

直觀分析表明：對(duì)蘆丁體外溶出影響因素程度為B＞A＞C，即影響程度最大的是煎煮次數(shù)，其次是加水倍數(shù)，再次是提取時(shí)間。由方差分析可得：以蘆丁體外溶出度為指標(biāo)，提取次數(shù)對(duì)其有顯著影響，加水倍數(shù)和提取時(shí)間對(duì)觀察指標(biāo)的影響較小。綜合分析，從實(shí)際出發(fā)，為了服用方便，同時(shí)節(jié)省人力物力，確定服用方法條件為：A1B3C1，即加8倍量水，煎煮3次，每次5 min。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可靠性，在上述優(yōu)選的條件下，對(duì)3 個(gè)批次(20120312，20120315，20120322，n=3)的樣品進(jìn)行了試驗(yàn)，蘆丁的平均含量分別為0.564，0.524，0.598 mg/g。驗(yàn)證試驗(yàn)表明該優(yōu)選工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

蘆丁是一種具有廣泛生理活性的天然植物藥有效成分，可用于預(yù)防與治療心血管疾病。由于療效確切，蘆丁在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上的需求呈逐年上升的趨勢(shì)［5］。目前，蘆丁主要從槐米、苦蕎等含量豐富的植物中提取獲得。血管康袋泡茶是以槐米為主要原料精制而成的院內(nèi)制劑。故本文將其主要成分蘆丁的體外溶出作為指標(biāo)考察，實(shí)驗(yàn)采用正交法對(duì)其最佳服用方法進(jìn)行篩選。

本文采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選出的血管康袋泡茶的服用方法，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法合理、穩(wěn)定可行。此為其優(yōu)選最佳服用方法提供了理論依據(jù)。

［1］羅燕梅，李喜香.血管康袋泡茶抗氧化機(jī)理探討［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(1)：36.

［2］羅燕梅，焦正花.RP－HPLC法測(cè)定血管康袋泡茶中蘆丁的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(7)：52－53.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，333.

［4］屈蓉.精制銀翹解毒片中對(duì)乙酰氨基酚的溶出度測(cè)定［J］.中國(guó)藥房，2012，23(7)：613 －615.

［5］顏軍，甘亞，茍小軍，等.星點(diǎn)設(shè)計(jì)－效應(yīng)面法優(yōu)化槐米中蘆丁提取工藝［J］.中藥材，2011，34(4)：628 －631.