卡介苗／結(jié)核菌純蛋白衍化物治療哮喘患兒的機(jī)制研究

李慶忠，張秀瓏

（1.海南省?？谑袐D幼保健院兒科571000；2.河北省北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河北張家界075601）

支氣管哮喘是世界公認(rèn)的醫(yī)學(xué)難題，被世界衛(wèi)生組織列為疾病中四大頑癥之一，以嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主要表征，常以多種細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)參與的氣道變態(tài)反應(yīng)性炎癥［1－2］?？ń槊纾˙CG）接種可能會(huì)改變機(jī)體的免疫應(yīng)答，早期接種BCG可以用來(lái)預(yù)防哮喘。結(jié)核菌純蛋白衍生物（PPD）作為結(jié)核桿菌的減毒活疫苗，臨床用于診斷小兒結(jié)核病和判斷小兒接種BCG的效果，有類似BCG的抗原性，且有較好的安全性［3－4］。早在1997年，Shirakawa等［5］觀察到，接種BCG后PPD陽(yáng)性的患者，不僅是過(guò)敏反應(yīng)的癥狀，而且哮喘的發(fā)病率及嚴(yán)重程度均較PPD陰性者明顯減少。鑒于此，作者擬用BCG／PPD聯(lián)合治療哮喘患兒，通過(guò)反復(fù)加強(qiáng)刺激患兒體內(nèi)免疫功能來(lái)治療哮喘患兒，通過(guò)檢測(cè)患者血清白細(xì)胞介素（IL－4）、IFN－γ、IL－10水平的變化，為哮喘患兒的免疫治療方法提供新的手段。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年7月至2010年6月來(lái)本院兒科就診的哮喘患兒，患者年齡5～14歲，男女不限，皮內(nèi)注射5個(gè)結(jié)核菌素單位的PPD試驗(yàn)進(jìn)行篩選，剔除哮喘外無(wú)其他疾病，剔除標(biāo)準(zhǔn)：（1）不符合上述標(biāo)準(zhǔn)的兒童；（2）PPD實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。將哮喘患兒按隨機(jī)原則分為BCG干預(yù)組（A組），平均（6.8±2.4）歲，其中輕度患兒19例，中度患兒17例，共36例和未干預(yù)組（B組），平均（6.6±2.7）歲，輕度患兒16例，中度患兒18例，共34例；另外，選擇健康兒童31名作為對(duì)照組（C組）。

1.2 方法 A組按照全球哮喘治療創(chuàng)議方案給予常規(guī)治療，治療的同時(shí)進(jìn)行接種BCG（0.25mg／0.5mL，在上臂外側(cè)三角肌中部略下處皮內(nèi)注射0.1mL）4周PPD轉(zhuǎn)陽(yáng)后每月予PPD5單位皮內(nèi)注射，B組按照全球哮喘治療創(chuàng)議方案給予常規(guī)治療。C組為對(duì)照組，未給予任何治療。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及評(píng)估方法 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)控制：患兒6個(gè)月內(nèi)哮喘未發(fā)作；顯效：治療后患兒哮喘未再發(fā)作或偶爾發(fā)作，但病情輕微很快即可緩解；改善：治療后發(fā)作頻率大幅度降低，癥狀、體征得到改善；無(wú)效：患兒的哮喘發(fā)作頻率及癥狀體征均無(wú)改善或加重?？傆行В娇刂疲@效＋改善。

1.3.1 PPD試驗(yàn)方法 采用皮內(nèi)注射，以1mL注射器抽取0.1mL含5個(gè)結(jié)核菌素單位的BCG／PPD，過(guò)48～72h后觀測(cè)反應(yīng)結(jié)果。

1.3.2 IL－4、IL－10、INF－γ含量檢測(cè) 分別在治療前及總療程治療6個(gè)月后，檢測(cè)患兒血IFN－γ、IL－4、IL－10水平，評(píng)估哮喘患兒臨床癥狀及哮喘控制等級(jí)。采集患者及對(duì)照組外周靜脈血3mL（避免溶血），3 000r／min離心10min，收集上層血清，置－20℃環(huán)境保存待測(cè)。用美國(guó)R＆D公司試劑盒，采用ELISA法，檢測(cè)IL－4、IFN－γ、IL－10。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，多組均數(shù)比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同治療組之間療效比較 兩組患兒控制效果比較觀察組哮喘控制率及總有效率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 干預(yù)組及非干預(yù)組療效比較［n（%）］

2.2 3組血清細(xì)胞因子的比較 治療前干預(yù)組、未干預(yù)組在血清IFN－γ、IL－4、IL－10和IFN－γ／IL－4比值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；干預(yù)組、未干預(yù)組與對(duì)照組IL－4、IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后干預(yù)組、未干預(yù)組血清IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4較治療前上升、IL－4水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)組與未干預(yù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 治療前各組IFN－γ、IL－10、IL－4水平（±s）

表2 治療前各組IFN－γ、IL－10、IL－4水平（±s）

＊：P＜0.05，與C組比較；＊＊：P＜0.05，與同組比較；△：P＜0.05，與B組治療后比較。

IL－4 A組 36 治療前 135.14±12.31＊ 28.17±7.25＊＊ 16.92±4.71＊ 5.11±0.98組別 n IFN－γ（ng／L） IL－4（μg／L） IL－10（pg／mL） IFN－γ／＊治療后 204.32±16.26＊＊△ 8.71±2.95＊＊△ 31.18±4.54＊＊△ 25.32±8.75＊＊△B組 34 治療前 134.17±13.24＊ 29.21±7.13＊＊ 17.11±4.36＊ 4.92±1.13＊治療后 142.18±15.81＊＊ 23.15±5.32＊＊ 22.34±5.21＊＊ 6.17±1.61＊＊C組 31 對(duì)照組 204.29±19.43 6.91±1.42 34.21±2.41 29.52±8.54

3 討 論

目前，關(guān)于支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱哮喘）發(fā)病機(jī)制研究較多，但發(fā)病機(jī)制至今仍然不是很明確，可能與遺傳、免疫、神經(jīng)及精神等多種因素有關(guān)，并提出了多種學(xué)說(shuō)解釋哮喘的發(fā)病機(jī)制。目前廣為接受的是Th1／Th2比例失衡學(xué)說(shuō)［6］。Th0向Th1、Th2細(xì)胞分化時(shí)發(fā)生偏移，而哮喘是一種Th2細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。Th2型細(xì)胞因子如IL－3、IL－4、IL－5的增多及 Th1型細(xì)胞因子IL－2、IL－12及IFN－γ的減少［7－8］。免疫學(xué)上將哮喘的發(fā)病過(guò)程分成3個(gè)階段，即初級(jí)致敏階段；包括過(guò)敏原刺激，T細(xì)胞活化、IL－4產(chǎn)生、IE合成增多及效應(yīng)細(xì)胞施放介質(zhì)；第二階段及慢性過(guò)敏階段：以Th1／Th2比例降低，IL－5產(chǎn)生增多，嗜酸性粒細(xì)胞活化、增生及聚集為主要特征；第三階段：慢性炎癥引起氣道結(jié)構(gòu)重塑［9］?？梢?jiàn)，在上述過(guò)程中Th1／Th2比例失衡貫穿在各個(gè)階段中，Th1／Th2比例失衡對(duì)哮喘的發(fā)生及發(fā)展有重要的意義。研究Th1／Th2失衡機(jī)制，有可能闡明哮喘的發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制。

IFN－γ和IL－4是一對(duì)相互拮抗的細(xì)胞因子，IFN－γ可以抑制IL－4mRNA轉(zhuǎn)錄水平，抑制由IL－4誘導(dǎo)的B細(xì)胞表達(dá)FcεRⅡ，達(dá)到抑制體內(nèi)IgE合成的目的。IL－10屬于一種抗炎因子，在哮喘發(fā)病機(jī)制的調(diào)節(jié)過(guò)程中，通過(guò)抑制抗原遞呈細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而控制由抗原誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)［10］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)哮喘患者存在Th1細(xì)胞功能低下時(shí)，IL－10為一種抑炎而非致炎因子，可以促使Th2細(xì)胞功能亢進(jìn)。這表明IL－10可以作用于自身免疫性疾病炎癥發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié)，參與了哮喘的發(fā)病機(jī)制［11］。

1997年，Shirakawa等［5］觀察到，接種BCG后PPD陽(yáng)性的

患者，哮喘的發(fā)病率及嚴(yán)重程度均較PPD陰性者明顯減少。隨后動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)BCG在哮喘中的預(yù)防作用［12－13］，它可使IFN－γ產(chǎn)生增多，上調(diào) Th1／Th2的比例，能糾正 Th1／Th2的偏移。那么在人體中，接種BCG是否也能通過(guò)影響細(xì)胞因子的分泌，調(diào)整Th1／Th2比例，發(fā)揮治療哮喘的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予BCG／PPD干預(yù)后，哮喘的總有效率明顯上升，較常規(guī)組明顯。同時(shí)血清IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4較治療前上升、IL－4水平下降，同時(shí)較常規(guī)組也有明顯差異。說(shuō)明了給予BCG／PPD干預(yù)后能明顯通過(guò)上調(diào)IFN－γ及IL－10，抑制IL－4的表達(dá)發(fā)揮作用。由于既往研究表明哮喘患者免疫系統(tǒng)通過(guò)IFN－γ、IL－10、IL－4抑制 Th1，而活化了 Th2細(xì)胞功能，促進(jìn)疾病的發(fā)生、發(fā)展［14－15］。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可以得出BCG／PPD促進(jìn)Th1，抑制Th2的作用，可以逆轉(zhuǎn)Th1／Th2細(xì)胞比例和功能失衡，調(diào)節(jié)免疫功能，抑制哮喘的發(fā)生、發(fā)展。

總之，BCG／PPD聯(lián)合治療給藥不僅能降低哮喘患兒血清細(xì)胞因子IL－4水平，升高血清IFN－γ和IL－10水平，逆轉(zhuǎn)Th1／Th2細(xì)胞比例和功能失衡，改善哮喘患兒免疫失衡。

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