不同生化檢測系統(tǒng)間結(jié)果可比性的探討

朱松山，殷 君，陸小彩，韋 勇

（1廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧530021；2廣西醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室，南寧530021）

近年來，伴隨著醫(yī)療技術(shù)水平的快速發(fā)展，檢驗(yàn)儀器、試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品也呈現(xiàn)了多樣化。本院先后購置了Olympus AU400和Beckman DXC800，在同時(shí)使用這兩臺(tái)生化分析儀時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩臺(tái)儀器的結(jié)果具有明顯差異性。如何使兩臺(tái)儀器的測定結(jié)果具有可比性，是實(shí)驗(yàn)室不容忽視的一個(gè)問題。為此，作者對兩臺(tái)儀器的測定結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析和校正，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明兩臺(tái)生化儀測定結(jié)果具有可比性，為實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 50份來自本院健康體檢的新鮮血清，濃度在檢測的線性范圍之內(nèi)。

1.1.2 儀器選擇 因Beckman DXC800參加臨檢中心的全區(qū)室間質(zhì)評成績優(yōu)秀，且日間質(zhì)控CV值均小于1／3美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法規(guī)′88（CLIA′88）所允許的誤差［1］，因此把其作為標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)，Olympus AU400全自動(dòng)生化分析儀作為待評系統(tǒng)。

1.1.3 試劑 DXC800使用廣州的標(biāo)佳試劑，AU400使用上海的德賽試劑。

1.1.4 校準(zhǔn)品 英國Randox的校準(zhǔn)品，批號(hào)分別為746UN，515UE。

1.1.5 質(zhì)控品 由本區(qū)臨檢中心統(tǒng)一提供的美國Bio－Rad人基質(zhì)質(zhì)控物水平1、2，批號(hào)分別為14411、14412。

1.2 方法

1.2.1 儀器的準(zhǔn)備 兩臺(tái)生化儀在測試前均按照說明書設(shè)置參數(shù)，清洗保養(yǎng)，使用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，將校準(zhǔn)品分別在兩臺(tái)儀器上測定3次，每臺(tái)儀器的各指標(biāo)均值應(yīng)在校準(zhǔn)值的±5%之內(nèi)，說明校準(zhǔn)合格。

1.2.2 重復(fù)性試驗(yàn) 在兩臺(tái)儀器上先后測定中值和高值質(zhì)控物，其項(xiàng)目均是兩臺(tái)儀器共同開展的項(xiàng)目，重復(fù)測定10次，測定值均在質(zhì)控范圍之內(nèi)，說明質(zhì)控合格。在Beckman DXC800和Olympus AU400上同時(shí)測定50份新鮮患者混合血清的尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH），每份標(biāo)本平行測定3次，取均值。以Beckman DXC800測定值為Y，Olympus測定值為X，進(jìn)行線性回歸分析Y＝aX＋b。利用各項(xiàng)目的校正因子a、b在Olympus AU400上分別設(shè)定截距和斜率，從而進(jìn)行校正，校正后，再次通過兩臺(tái)儀器測定50份新鮮患者混合血清，對各項(xiàng)目所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用配對t檢驗(yàn)和線性回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 抽取一個(gè)質(zhì)控水平進(jìn)行精密度分析 結(jié)果顯示兩種系統(tǒng)的日間CV均小于1／3CLIA′88，其精密度符合要求，可進(jìn)行比對試驗(yàn)，見表1。

表1 兩實(shí)驗(yàn)室中值質(zhì)控物測定結(jié)果

2.2 標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)Beckman DXC800與待評系統(tǒng)Olympus AU400校正前后各項(xiàng)目比對 結(jié)果見表2、3。

表2 校正前標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)和待評系統(tǒng)的比對結(jié)果（n＝50）

表3 校正后標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)和待評系統(tǒng)的比對結(jié)果（n＝50）

3 討 論

在臨床實(shí)驗(yàn)中，由于儀器的設(shè)置及試劑系統(tǒng)的配置不同，常會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。在2006年，歐洲70家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，他們使用國際臨床化學(xué)和實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)聯(lián)盟（IFCC）推薦的方法，將 ALT、AST、CK、GGT、LDH、和 AMY進(jìn)行了對比試驗(yàn)，結(jié)果顯示，只有CK和ALT的結(jié)果具有一致的可比性［2］。由表2也可以看出，大部分項(xiàng)目偏倚超過5%，而且回歸方程截距較大，r＜0.975或r2＜0.95，說明實(shí)驗(yàn)方法精密度和系統(tǒng)間的可比性較差。分析原因有以下幾點(diǎn)：（1）生化儀器間的差異。常見的是光學(xué)系統(tǒng)，Beckman DXC800采用的光源是先進(jìn)的氬氣激光燈，比色杯的材料是石英玻璃，沖洗時(shí)采用的是高壓沖洗，這長時(shí)間保證了比色杯良好的透光度，最大限度的消除了反應(yīng)杯的干擾［3］。Olympus AU400一般以普通鹵燈為光源，比色杯的材料常用的是塑料，但沖洗時(shí)無高壓沖洗，且使用硬膠擦清洗，長時(shí)間使用比色杯易造成磨損，透光度下降。（2）使用的儀器試劑間的差異，由于作者使用的不是儀器配套的試劑，廠家為適應(yīng)不同型號(hào)儀器的需要，常對IFCC推薦的方法作不同程度的改動(dòng)，比如試劑底物濃度、緩沖液的組成等。這就使得每臺(tái)儀器構(gòu)成了各自獨(dú)立的分析體系，由此會(huì)產(chǎn)生不同的基質(zhì)效應(yīng)，造成檢測結(jié)果間的偏倚［4］。

考慮到本實(shí)驗(yàn)所采用的方法均為酶法，而且各項(xiàng)目多是按照廠家所給的參數(shù)進(jìn)行儀器設(shè)置，最后利用K值計(jì)算酶活性。理論上這符合IFCC的要求，但從結(jié)果看，一些項(xiàng)目出現(xiàn)較大差異。分析認(rèn)為酶試劑隨著反應(yīng)時(shí)間延長，K值并不會(huì)隨反應(yīng)條件改變而改變，從而使結(jié)果出現(xiàn)偏倚。

如何獲得準(zhǔn)確及具有可比性的結(jié)果已成為人們急需解決的問題。一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)室要想得到準(zhǔn)確的酶學(xué)結(jié)果，作者認(rèn)為應(yīng)具備以下幾點(diǎn)：（1）做好每天的質(zhì)量控制及定期進(jìn)行定標(biāo)。由于試劑揮發(fā)和各方面因素的影響，結(jié)果會(huì)隨時(shí)間推移發(fā)生偏差，因此要定期進(jìn)行定標(biāo)校準(zhǔn)。有報(bào)道指出［5］，生化檢測項(xiàng)目校準(zhǔn)周期Cr 2d，BUN 5d，UA 7d，一些酶類基本上都能達(dá)到30d左右。（2）進(jìn)行K值的校正，最好的方法是利用配套或統(tǒng)一的酶校正液。蘇增留等［6］用一種酶校正液統(tǒng)一校正4臺(tái)儀器的K值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)校正后可降低各系統(tǒng)間的CV值。而顧國龍［7］則利用3種進(jìn)口酶校正液校正不配套儀器的K值，結(jié)果反而增大系統(tǒng)間的CV值。（3）利用酶參考測定程序和酶參考物結(jié)合，建立酶參考系統(tǒng)，該系統(tǒng)將不會(huì)受測定時(shí)間，不同試劑和不同實(shí)驗(yàn)室的影響，最終使常規(guī)方法的結(jié)果具有可比性和溯源性［8］。

在缺乏上述（2）、（3）兩點(diǎn)的情況下，通過大量標(biāo)本的測試和分析對比，然后利用線性回歸方程對待評系統(tǒng)Olympus AU400進(jìn)行校正，發(fā)現(xiàn)校正后待評系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)P＞0.05，r≥0.975或r2≥0.95，偏倚小于5%，表示數(shù)據(jù)分布范圍合理，實(shí)驗(yàn)方法精密度良好及結(jié)果具有可比性。應(yīng)該指出的是，由于生化反應(yīng)體系、試劑的變化程度、儀器的穩(wěn)定性等因素的影響，對待評系統(tǒng)的校正并非是一勞永逸的。本文認(rèn)為在缺乏被食品與藥物管理局（FDA）認(rèn)可的原體系，即沒有配套的試劑、校準(zhǔn)品的情況下，可以通過不同系統(tǒng)間的比對及校正，使檢測結(jié)果達(dá)到一致性，滿足實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化的要求。

［1］ Anonymity.Medicare，Medicaid and CLIA programs；regulations implementing the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988（CLIA）——HCFA.Final rule with comment period［J］.Fed Regist，1992，57（40）：7002－7186.

［2］Infusino I，Schumann G，Panteghini M，et al.Standardization in clinical enzymology：a challenge for the theory of metrological traceability［J］.Clin Chem Lab Med，2010，48（3）：305.

［3］ 王永卿，李春蕓.日立、貝克曼生化分析儀結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和使用注意事項(xiàng)［J］.中國醫(yī)療設(shè)備，2009，24（12）：99－100.

［4］ 張軍力，王育民，劉云彪，等.兩個(gè)檢測系統(tǒng)測定同種生化項(xiàng)目結(jié)果偏倚的評估［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29（6）：400－403.

［5］ 羅富銀，宋宗琴.全自動(dòng)生化分析儀生化檢測項(xiàng)目校準(zhǔn)周期的確立［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（14）：1471－1472.

［6］ 蘇增留，張克堅(jiān)，郭健，等.酶校正品在血清酶測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化中的應(yīng)用［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2001，16（2）：79－83.

［7］ 顧國龍.選擇適合測定系統(tǒng)的酶校準(zhǔn)品［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2002，20（1）：36－38.

［8］ 趙昕，郭健.臨床酶學(xué)測定標(biāo)準(zhǔn)化［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11（6）：846－850.