血清HBsAg水平評(píng)價(jià)替比夫定治療慢性HBV中的研究

李杰花 顧浩

乙型肝炎血清標(biāo)志物是乙型肝炎患者的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，其檢測(cè)方法是臨床技術(shù)人員一直以來(lái)高度重視的方面[1]。慢性乙型肝炎臨床療效的判斷通?？勘O(jiān)測(cè)患者血清中HBeAg和HBV DNA水平，而某些HBV攜帶者因前核心和核心啟動(dòng)子區(qū)域的變異可能存在HBeAg負(fù)性波動(dòng)，很難確定HBeAg陰性患者與HBV DNA水平的相關(guān)性[2]。本研究采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)定量檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清HBsAg水平，從而判斷替比夫定的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 入組標(biāo)準(zhǔn):(1)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)會(huì)制定的慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；(2)年齡 18～69 歲，血清HBeAg陽(yáng)性；(3)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平持續(xù)升高，且≥2 倍參考值上限；(4)HBeAg陽(yáng)性患者HBV DNA水平＞2.0×103copy/mL，陰性患者HBV DNA水平＞1.0×103copy/mL；(5)入組前患者未接受過(guò)干擾素、核苷類(lèi)似物抗病毒治療；(6)近12個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物的治療；(7)患者自愿加入本研究，簽訂知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)不符合入組標(biāo)準(zhǔn)；(2)合并肝硬化、代謝性肝病或自身免疫性肝炎等；(3)同時(shí)感染有其他類(lèi)型的病毒性肝炎，如甲型、丙型或丁型；(4)處于妊娠或哺乳期婦女；(5)預(yù)計(jì)生存期不能完成研究者。

1.2 研究對(duì)象 研究對(duì)象來(lái)源于 2009年12月～2012年1月期間在我院接受替比夫定治療的患者80例，男46例。女34例；年齡18～69歲，平均年齡(4.7±8)歲；其中HBeAg陽(yáng)性患者 48 例、HBeAg陰性患者32例。

1.3 方法 患者均口服替比夫定 600 mg，1 次/d，療程 1 年。治療前和治療后每 3 個(gè)月收集 1 次患者血清標(biāo)本，測(cè)定ALT、HBsAg和HBV DNA水平。血清ALT檢測(cè)采用GS400 全自動(dòng)生化分析儀和相應(yīng)的配套試劑;血清HBsAg和HBeAg測(cè)定采用CMIA法試劑盒和KS7041502 型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;HBV DNA測(cè)定采用HBV DNA試劑盒和 7300 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后患者HBsAg、HBV DNA和ALT水平比較經(jīng)過(guò) 1 年的治療，患者HBsAg、HBV DNA和ALT水平較治療前下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 治療前后患者HBsAg、HBV DNA和ALT水平比較（±s）

表1 治療前后患者HBsAg、HBV DNA和ALT水平比較（±s）

注：與治療前比較，aP<0.05

時(shí)間 HBsAg(IU/mL) HBV DNA（103 copy/mL） ALT(U/L)治療前 1830±329 6.1±1.2 100±12治療后 1026±274 a 3.2±1.0 a 32±11 a

2.2 治療前后患者HBsAg、ALT水平與HBV DNA的相關(guān)性 治療前后患者HBsAg水平與HBV DNA均存在相關(guān)性(P<0.05)，而ALT水平與HBV DNA無(wú)關(guān)聯(lián)(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 治療前后患者HBsAg、ALT水平與HBV DNA的相關(guān)性（±s）

表2 治療前后患者HBsAg、ALT水平與HBV DNA的相關(guān)性（±s）

組別 時(shí)間 HBsAg(IU/mL)ALT(U/L)HBeAg陰性組HBV DNA（103copy/mL）治療前 1386±356 5.8±1.1 98±12治療后 1106±290 3.2±1.0 44±10 HbeAg陽(yáng)性組治療前 2413±322 6.2±1.3 104±13治療后 1000±263 3.0±1.1 29±10

2.3 HBsAg、HBV DNA和ALT與耐藥時(shí)間的關(guān)系80例患者在治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn) 9 例對(duì)替比夫定耐藥，在檢測(cè)過(guò)程中，HBsAg與HBV DNA水平在治療后3個(gè)月開(kāi)始發(fā)生反彈，而血清ALT水平在治療后6個(gè)月開(kāi)始反彈，明顯滯后。

3 討論

慢性乙型肝炎治療終點(diǎn):HBeAg陽(yáng)性患者，血清HBsAg清除(理想終點(diǎn))或血清學(xué)HBeAg轉(zhuǎn)換(滿意終點(diǎn))，HBV DNA檢測(cè)不到；HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者，HBsAg血清清除，HBV DNA檢測(cè)不到[4]。替比夫定是天然胸腺嘧啶脫氧核苷的自然L對(duì)映體，是人工合成的胸腺嘧啶脫氧核苷類(lèi)抗HBV藥物。替比夫定在細(xì)胞激酶的作用下被磷酸化，變?yōu)橛谢钚缘拇x產(chǎn)物，并與HBV天然底物胸腺嘧啶的 5’-腺苷競(jìng)爭(zhēng)，從而抑制HBV DNA多聚酶的活性;然后整合到HBV DNA中，終止HBV DNA鏈的延長(zhǎng)，抑制其復(fù)制，起到抗病毒的作用。我們采用替比夫定治療 80 例慢性乙型肝炎患者，其中HBeAg陽(yáng)性患者48例、HBeAg陰性患者32例，1年后患者血清HBsAg、HBV DNA和ALT水平較治療前比較，均顯著下降。結(jié)果表明:替比夫定治療慢性乙型肝炎，具有較好的病毒學(xué)應(yīng)答和生化應(yīng)答，減少病毒對(duì)肝臟的攻擊，改善肝功能和延緩病情進(jìn)展。

定量檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA水平，是判斷臨床治療效果和修正抗病毒治療方案的重要臨床指標(biāo)，雖然實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定HBV DNA水平具靈敏度高和重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，但是一般醫(yī)院實(shí)驗(yàn)條件有限，難以開(kāi)展。有文獻(xiàn)報(bào)道[5]，HBeAg定量與HBV DNA存在相關(guān)性，與HBV DNA復(fù)制的關(guān)系緊密，但是很難適用于HBeAg陰性患者。我們通過(guò)測(cè)定并分析患者血清HBsAg、HBV DNA和ALT水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療前后患者HBsAg水平與HBV DNA均存在正相關(guān)性，而ALT水平與HBV DNA無(wú)關(guān)聯(lián)。在治療過(guò)程中9例患者對(duì)替比夫定耐藥，HBsAg與HBV DNA水平在治療后 3 個(gè)月開(kāi)始發(fā)生反彈，而血清ALT水平在治療后6個(gè)月開(kāi)始反彈。結(jié)果提示:患者血清HBsAg水平可反映HBV DNA的復(fù)制情況，具有較高的敏感性，可以用于指導(dǎo)臨床抗病毒治療的效果評(píng)價(jià)。

綜上所述，定量HBsAg水平可反映HBV DNA復(fù)制情況，為慢性乙型肝炎臨床治療提供客觀依據(jù);CMIA測(cè)定HBsAg具有簡(jiǎn)單、方便、快捷、高效、準(zhǔn)確和自動(dòng)化程度高等優(yōu)勢(shì)，值得臨床推廣應(yīng)用。

[1]盧桂香.不同方法學(xué)檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果評(píng)價(jià)[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18(8)：152-153.

[2]毛雄英，王衛(wèi)華，沈廣宇，等.引物延伸/變性高效液相色譜檢測(cè)HBV拉米夫定耐藥突變[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2010，28(3)：11-13.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南[J].中華內(nèi)科雜志，2006，45(2)：162-170.

[4]劉巖紅，錢(qián)方興.HBsAg和HBeAg定量檢測(cè)對(duì)乙型肝炎抗病毒治療的評(píng)估[J].肝臟，2011，16(4)：326-327.

[5]王貴強(qiáng).應(yīng)重視HBeAg陰性慢性乙型肝炎的診斷和治療[J].中華內(nèi)科雜志，2005，44(9)：643.