4種植物性蛋白質(zhì)飼料原料在不同日齡肉仔雞的標準回腸氨基酸消化率的比較

雷 廷 咼于明 杜恩存 邵玉新

(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京 100193)

飼料原料中氨基酸含量及消化率的準確測定對于飼料生產(chǎn)中滿足畜禽氨基酸和蛋白質(zhì)營養(yǎng)需求，提高飼料蛋白質(zhì)氨基酸利用效率，減少排泄物氮排放是至關(guān)重要的。過去對雞飼料氨基酸消化率的評價多用蛋用型品種的成年公雞，在生長雞或肉雞上的評價極少。由于生長雞或肉雞與成年公雞在消化生理上有差異［1］，導(dǎo)致以往由成年蛋雞得出的飼料氨基酸消化率不能完全適用于生長雞或肉雞［2-3］。消化率測定方法過去常采用全收糞法或去盲腸手術(shù)全收糞法。全收糞法由于操作費時費力、糞尿難以分開、糞中羽毛和飼料難以完全揀出、盲腸微生物對氨基酸消化影響較大等因素［4-6］使得測定結(jié)果誤差較大;而去盲腸公雞對外科手術(shù)要求較高，去掉盲腸后雞處于非正常生理狀態(tài)，Parson等［7］研究發(fā)現(xiàn)去盲腸法測定飼料氨基酸消化率總會低于正常雞。標準回腸氨基酸消化率法采用指示劑測定回腸食糜氨基酸消化率，同時考慮了內(nèi)源氮損失的影響，由于不受盲腸微生物的影響，因此更能代表動物的真實氨基酸消化率，測定結(jié)果更具有可加性［8-11］。肉雞在不同日齡對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率不同，肉雞在剛出殼的1周內(nèi)消化器官發(fā)育不成熟，消化酶分泌不足，對營養(yǎng)物質(zhì)利用率較低，之后隨著日齡增長而升高［12-13］。但肉雞對營養(yǎng)物質(zhì)的利用率不是隨日齡一直升高，一些報道指出肉雞隨著日齡增長消化率會降低［14-17］，另外一些報道則表明氨基酸消化率會隨著日齡的增長而升高［18-20］，而關(guān)于肉仔雞在14日齡和35日齡的氨基酸消化率的比較國內(nèi)外目前鮮有報道。本研究綜合考慮飼料原料和日齡對肉仔雞氨基酸消化率的影響，選取了肉仔雞中具有代表性的2個品種(科寶500和羅斯308)以及能代表其消化特點的日齡(14日齡和35日齡)，結(jié)合本實驗室長期試驗總結(jié)出的標準回腸氨基酸消化率測定方法，以二氧化鈦為指示劑，采用無氮飼糧法估測內(nèi)源氨基酸損失，測定肉仔雞的標準回腸氨基酸消化率，為高效、準確地配制肉仔雞飼糧提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設(shè)計

試驗1選用540只體重和健康狀況一致的1日齡科寶500肉仔雞，采用公母各半混養(yǎng)，隨機分為5個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)平均體重變異控制在不超過平均體重的3%，每個重復(fù)18只雞。4個處理分別飼喂豆粕型飼糧、菜籽粕型飼糧、玉米蛋白粉型飼糧及玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)型飼糧，另外1個處理飼喂無氮飼糧。試驗以0.5%二氧化鈦為指示劑，采用無氮飼糧法估測內(nèi)源氨基酸損失，測定肉仔雞在14日齡和35日齡的豆粕、菜籽粕、玉米蛋白粉和玉米DDGS的標準回腸氨基酸消化率。

試驗2選用360只體重和健康狀況一致的雌性1日齡羅斯308肉仔雞，隨機分為3個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)平均體重變異控制在不超過平均體重的3%，每個重復(fù)20只雞。2個處理飼喂豆粕型飼糧、菜籽粕型飼糧，另外1個處理飼喂無氮飼糧，采用與試驗1同樣的方法測定肉仔雞在14日齡和35日齡的豆粕、菜籽粕的標準回腸氨基酸消化率以及空腸食糜酶活性和腸道指標。

2個試驗在不同時間階段展開，但飼養(yǎng)過程完全一致。

1.2 基礎(chǔ)飼糧和試驗飼糧

非試驗期肉仔雞飼喂按照我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制的基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗期(10～14日齡以及31～35日齡)肉仔雞飼喂試驗飼糧和無氮飼糧，試驗飼糧為半純合飼糧，以待測飼料原料作為唯一的飼糧蛋白質(zhì)來源，盡量保證除氨基酸外的營養(yǎng)平衡，飼糧粗蛋白質(zhì)含量在20%左右，其組成見表2。無氮飼糧參照蔣純衛(wèi)等［21］方法配制，其組成見表3。原料中常規(guī)營養(yǎng)成分和氨基酸含量的測定值及試驗飼糧中氨基酸和粗蛋白質(zhì)含量的測定值分別見表4和表5。

1.3 樣品采集與指標測定

1.3.1 空腸、回腸食糜的采集

2個試驗中采集食糜過程完全相同，肉仔雞在10日齡和31日齡時絕食8 h后，根據(jù)體重調(diào)整雞群，使處理間和重復(fù)間雞的平均體重的變異最小，之后開始預(yù)飼試驗飼糧，預(yù)試期為4 d。在14日齡和35日齡時，肉仔雞先饑餓2～3 h，再自由采食1 h，再過3 h后開始殺雞取樣。14日齡和35日齡時每個重復(fù)分別取12和6只雞，翅靜脈注射苯巴比妥鈉麻醉后稱重，立即剖腹，分離整段空腸和回腸，空腸取前半段輕輕擠出食糜于10 mL離心管中，每個重復(fù)全部收集在一起，用液氮保存，用于酶活性的測定;回腸對折后取回腸后段1/2(棄去最后2 cm)，剩余腸段食糜輕輕擠于鋁盒中，每個重復(fù)食糜混在1個鋁盒內(nèi)，采集完后迅速轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱冷凍，之后采用冷凍干燥機凍干食糜后備測。

1.3.2 腸道指標的測定

試驗2中，肉仔雞在13日齡和34日齡時，從每個重復(fù)中挑選1只雞饑餓12 h后用于測定肉仔雞體重、小腸重和小腸各部分腸段長度。計算小腸相對重量和十二指腸和空腸相對長度，計算公式如下:

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

表2 試驗飼糧組成(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition of experimental diets(air-dry basis)%

續(xù)表2

表3 無氮飼糧組成(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 3 Composition of the nitrogen-free diet(air-dry basis) %

1.3.3 樣品中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和二氧化鈦含量的測定

干物質(zhì)含量測定參照GB 5497—85，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測定，二氧化鈦含量參照Short等［22］和鄧雪娟等［23］方法進行測定。

1.3.4 樣品中氨基酸含量的測定

胱氨酸和蛋氨酸含量先用過甲酸氧化再用高效液相色譜(HPLC)進行測定;色氨酸含量先用氫氧化鋇水解再用HPLC進行測定，其余氨基酸含量先用6 mol/L鹽酸水解再用氨基酸自動分析儀(日立835-50)進行測定，檢測單位為農(nóng)業(yè)部飼料效價與安全監(jiān)督檢驗測試中心(北京)，具體方法參照國家標準GB/T 18246—2000。

1.3.5 空腸食糜酶活性的測定

胰蛋白酶和糜蛋白酶活性采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定，試劑盒編號分別為A080-2、A080-3。胰蛋白酶活性單位定義:在pH 8.0，37℃條件下，每毫克蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為1個酶活性單位;糜蛋白酶活性單位定義:在37℃條件下，每毫克組織蛋白質(zhì)每分鐘分解蛋白質(zhì)生產(chǎn)1μg氨基酸即為1個酶活性單位。

1.4 計算公式

1.4.1 表觀回腸氨基酸消化率

表4 原料中常規(guī)營養(yǎng)成分和氨基酸含量的測定值(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 4 Measured values of conventional nutrient composition and amino acid contents of ingredients(air-dry basis)%

續(xù)表4

表5 試驗飼糧中氨基酸和粗蛋白質(zhì)含量的測定值(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 5 Measured values of amino acid and crude protein contents of experimental diets(air-dry basis) %

續(xù)表5

1.4.2 回腸末端內(nèi)源氨基酸損失

1.4.3 標準回腸氨基酸消化率

式中:SIDaa表示標準回腸氨基酸消化率，AAd表示待測飼糧干物質(zhì)狀態(tài)下某氨基酸含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

利用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件中ANOVO對試驗結(jié)果進行單因素方差分析，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果

2.1 科寶500肉仔雞在不同日齡的豆粕、菜籽粕、玉米蛋白粉和玉米 DDGS的標準回腸氨基酸消化率

由表6可知，玉米蛋白粉中亮氨酸、精氨酸、色氨酸和酪氨酸標準回腸消化率在14日齡和35日齡之間無顯著差異(P＞0.05)，異亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、蛋氨酸和丙氨酸標準回腸消化率在35日齡有下降趨勢(P=0.080、P=0.056、P=0.066、P=0.096和P=0.081)，其余所有標準回腸氨基酸消化率在14日齡均顯著高于35日齡(P＜0.05);菜籽粕中除丙氨酸外的所有標準回腸氨基酸消化率在14日齡均顯著高于35日齡(P＜0.05);豆粕中除胱氨酸標準回腸消化率在35日齡有降低趨勢(P=0.076)外，其余所有標準回腸氨基酸消化率在14日齡均顯著高于35日齡(P＜0.05);玉米DDGS中色氨酸和脯氨酸標準回腸消化率在2個日齡間無顯著差異(P＞0.05)，賴氨酸標準回腸消化率在35日齡有降低趨勢(P=0.098)，其余所有標準回腸氨基酸消化率在14日齡均顯著高于35日齡(P＜0.05)。

2.2 羅斯308肉仔雞在不同日齡的豆粕和菜籽粕的標準回腸氨基酸消化率

由表7可知，豆粕中亮氨酸、色氨酸和脯氨酸標準回腸消化率在2個日齡間無顯著差異(P＞0.05)，酪氨酸標準回腸消化率在35日齡顯著高于14日齡(P＜0.05)，其余所有標準回腸氨基酸消化率在14日齡均顯著高于35日齡(P＜0.05);菜籽粕中蘇氨酸、纈氨酸、賴氨酸、胱氨酸、天門冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸和丙氨酸標準回腸消化率在14日齡顯著高于35日齡(P＜0.05)，苯丙氨酸和脯氨酸標準回腸消化率表現(xiàn)出降低趨勢(P=0.062、P=0.058)，酪氨酸標準回腸消化率出現(xiàn)升高趨勢(P=0.084)，色氨酸標準回腸消化率則顯著升高(P＜0.05)，其余標準回腸氨基酸消化率在2個日齡間無顯著差異(P＞0.05)。

2.3 羅斯308肉仔雞在不同日齡的空腸食糜酶活性和腸道指標

由表8可知，由于空腸食糜酶活性測定的誤差較大，肉仔雞空腸食糜的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性在2個日齡間無顯著性差異(P＞0.05)，但是從數(shù)值上仍可以看出肉仔雞在14日齡空腸食糜的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性高于35日齡。

由表9可知，肉仔雞在14日齡的小腸相對重量顯著高于35日齡(P＜0.05)，但十二指腸和空腸相對長度在2個日齡間無顯著差異(P＞0.05)。

?

表7 羅斯308肉仔雞在不同日齡的豆粕和菜籽粕的標準回腸氨基酸消化率Table 7 Standardized ileal amino acid digestibility of soybean meal and rapeseed meal for Ross 308 broiler chickens at different ages %

表8 羅斯308肉仔雞在不同日齡的空腸食糜酶活性Table 8 Activties of enzymes in jejunal digesta of Ross 308 broiler chickens at different ages U/mg prot

表9 羅斯308肉仔雞在不同日齡的腸道指標Table 9 Intestinal indexes of Ross 308 broiler chickens at different ages %

3 討論

Fonolla等［16］比較了肉雞在21日齡和52日齡的幾種飼料原料的表觀氨基酸消化率，Zuprizal等［15］使用強飼收糞法研究了肉雞在21日齡和42日齡的真氨基酸消化率，均得出前期的消化率高于后期的結(jié)果;鄺賢斌等［14］采用收糞法研究了肉雞在28日齡和42日齡的菜籽粕、棉籽粕、肉骨粉和羽毛粉的真氨基酸消化率，發(fā)現(xiàn)除了羽毛粉外，其他原料前期的氨基酸消化率均極顯著高于后期，這些報道與本試驗結(jié)果相符。Batal等［20］用收糞法研究了1～21日齡肉雞對常規(guī)飼糧和雜粕飼料的表觀氨基酸消化率，發(fā)現(xiàn)1～14日齡表觀氨基酸消化率呈上升趨勢，并且在14日齡左右達到平臺期，14日齡與21日齡的表觀氨基酸消化率無差異，其原因可能是由于肉雞在剛出雛時消化道和消化器官沒有發(fā)育成熟［24-26］，因此肉雞在1～14日齡會出現(xiàn)消化率上升，但在14日齡的消化器官可能已經(jīng)發(fā)育成熟，從而導(dǎo)致14日齡和21日齡的表觀氨基酸消化率無差異。Huang等［19］研究了肉仔雞在14、28和42日齡的8種飼料原料的表觀回腸氨基酸消化率，結(jié)果表明在谷物類飼料中，小麥和高粱在14日齡的表觀回腸氨基酸消化率高于28日齡;在蛋白質(zhì)類飼料中，除棉籽粕外，均是28日齡和42日齡的表觀回腸氨基酸消化率高于14日齡。Adedokun等［18］則研究發(fā)現(xiàn)，肉仔雞在21日齡的5種飼料原料的表觀回腸氨基酸消化率均大于5日齡，但是經(jīng)過內(nèi)源氮校正之后，豆粕和菜籽粕在5日齡的標準回腸消化率高于21日齡，這2個結(jié)果與本試驗結(jié)果有差異的原因可能是氨基酸消化率的測定方法、使用的肉雞品種、測定的日齡、飼養(yǎng)方式和取樣方式等因素不同而造成。

本試驗中2個不同品種肉仔雞在14日齡的飼料原料的絕大多數(shù)標準回腸氨基酸消化率均顯著高于35日齡。Nitsan等［12］在研究中發(fā)現(xiàn)，家禽蛋白質(zhì)消化酶活性在幼齡階段處于上升趨勢，大約在10～21日齡達到高峰期，其中胰蛋白酶和糜蛋白酶活性在11日齡達到最大值，在23日齡后開始降低，由此推斷，幼禽在14日齡左右其消化道可能已經(jīng)發(fā)育很完善，而且蛋白酶活性很高，23日齡之后酶活性開始降低，本試驗中測得14日齡胰蛋白酶和糜蛋白酶活性均有高于35日齡的趨勢與其相符，因此推斷肉仔雞在14日齡對蛋白質(zhì)的消化能力高于35日齡。另外，Obst等 的研究得出雞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力在2周齡達到最高，從3周齡開始降低到1周齡的水平，之后保持低消化率到5周齡，在6周齡時又達到最大值，這與本試驗肉仔雞在14日齡的標準回腸氨基酸消化率高于35日齡亦相符。同時，由試驗測得腸道指標可知，14日齡時小腸相對重量顯著高于35日齡，相對發(fā)達的小腸可能具有更強的消化能力，這也可能是導(dǎo)致14日齡標準回腸氨基酸消化率高于35日齡的另外一個主要因素。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，2個品種的肉仔雞在14日齡的豆粕、菜籽粕、玉米蛋白粉和玉米DDGS的絕大部分標準回腸氨基酸消化率顯著高于35日齡，表明肉仔雞在14日齡時已經(jīng)可以滿足對蛋白質(zhì)的消化;肉仔雞在14日齡時腸道相對重量和空腸食糜酶活性高于35日齡可能是其標準回腸氨基酸消化率較高的主要原因之一。

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