柴黃片設(shè)備清潔殘留物黃芩苷的分析方法驗(yàn)證

陳妍純

在藥品生產(chǎn)的每道工序完成后，對(duì)制藥設(shè)備進(jìn)行淸洗是防止藥品污染和交叉污染的必要手段。通過有效的淸洗，可將上批生產(chǎn)殘留在生產(chǎn)設(shè)備中的物質(zhì)減少到不會(huì)影響下批產(chǎn)品療效、質(zhì)量和安全性的程度［1］。殘留物分析方法的可靠性是清潔驗(yàn)證的重要保障［2］，因此必須對(duì)殘留物的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。柴黃片中黃芩苷是主要的有效成分，因此在柴黃片的制劑生產(chǎn)線中，把黃芩苷作為設(shè)備清潔后的目標(biāo)殘留物，按擦拭法進(jìn)行取樣，對(duì)黃芩苷的殘留物分析方法參照雜質(zhì)限度法進(jìn)行驗(yàn)證，考察檢測(cè)限、專屬性、取樣回收率及樣品穩(wěn)定性。

取樣方法：將藥簽頭在取樣設(shè)備表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面。在向前移動(dòng)的同時(shí)將其從一邊移到另一邊。擦拭過程應(yīng)覆蓋整個(gè)表面。翻轉(zhuǎn)藥簽，讓藥簽的另一面也進(jìn)行擦拭。擦拭方向與前次擦拭移到方向垂直［1］。

殘留物的限度：殘留物濃度限度為10×10－6，設(shè)下批產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B(kg)，設(shè)備總內(nèi)表面積為SA(cm2)，則表面殘留物限度L為10B/SA(mg/cm2)；為確保安全，一般應(yīng)除以安全因子 F，即得 L=10B/(SA·F)(mg/cm2)；取安全因子 F=10，則 L=B/SA(mg/cm2)［3］。按以上公式計(jì)算，設(shè)備清潔后，設(shè)備表面黃芩苷殘留物應(yīng)小于0.0041 mg/cm2，即102.5ug/25 cm2。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑和試藥

儀器：Agilent 1100型高效液相色譜儀；Diamonsil(鉆石)-C18 ODS(4.6 mm ×250 mm，5μm)；色譜柱，DAD 檢測(cè)器，KQ-500DE型超聲波清洗器，十萬分之一電子天平。對(duì)照品：黃芩苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。試劑與試藥：甲醇：色譜純，乙醇、磷酸：分析純，廣州化學(xué)試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 波長(zhǎng)的選擇 取黃芩苷對(duì)照品進(jìn)行紫外線掃描(200～400 nm)，結(jié)果在280 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，參考文獻(xiàn)［4］選擇280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；［Diamonsil(鉆石)-C18 ODS(4.6 mm ×250 mm，5 μm)］；柱溫：35℃；流動(dòng)相：甲醇 －0.1%磷酸溶液(45：55)，流速：1.0 ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)為280nm；進(jìn)樣量：10 μl；理論板數(shù)按黃芩苷計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.3 溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備：取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含5.0 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取藥簽兩支，用70%乙醇濕潤(rùn)后，在25 cm2設(shè)備表面擦拭，將擦拭后的藥簽放入具塞錐形瓶中，精密量取70%乙醇20 ml，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，即得。

空白溶液的制備：取藥簽兩支，用70%乙醇濕潤(rùn)后，放入具塞錐形瓶中，精密量取70%乙醇20 ml，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，即得。

2.4 檢測(cè)限 取上述對(duì)照品溶液，精密量取1 ml，加甲醇制成每1 ml含1.0 μg的溶液，精密量取10 μl進(jìn)樣，根據(jù)儀器信噪比計(jì)算，檢測(cè)限為0.6364 μg/ml。

2.5 專屬性 上述的色譜條件下，將空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀中，結(jié)果表明空白溶液無干擾。

2.6 取樣回收率 準(zhǔn)備一塊30×30 cm與設(shè)備表面材質(zhì)相同平整光潔的不銹鋼板，在鋼板上劃出5×5 cm的區(qū)域，每隔5 cm劃線形成16塊5×5 cm的方塊(每1方塊為25 cm2)。配制已知含量的柴黃片提取液(含黃芩苷：0.1027 mg/ml)，根據(jù)黃芩苷殘留物限度的50%、100%、150%，精密量取提取液0.5、1、1.5 ml，各3份，分別將其溶液均勻涂布在25 cm2的不銹鋼板上，自然干燥。每25 cm2取藥簽兩支，用70%乙醇濕潤(rùn)后進(jìn)行擦拭，將擦拭后的藥簽放入具塞錐形瓶中，按供試品制備方法進(jìn)行制備，作為供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 取樣回收率分析結(jié)果

結(jié)果表明：取樣平均回收率＞70%，RSD小于10%，達(dá)到驗(yàn)證要求。

2.7 樣品穩(wěn)定性 取供試品溶液，室溫下放置，精密吸取上述供試品溶液 10 μl，于 0、2、4、8、16、24、36、48 h 測(cè)定，結(jié)果顯示，在48 h內(nèi)，樣品溶液穩(wěn)定。結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性分析結(jié)果

3 討論

本人在實(shí)驗(yàn)過程中，曾用 25、30、35、40、45 min 進(jìn)行超聲提取，試驗(yàn)證明在30 min黃芩苷已經(jīng)基本提取完全，從分析的簡(jiǎn)便快速考慮，確定了提取時(shí)間為30 min。本文參照柴黃片的色譜條件，采用HPLC進(jìn)行柴黃片設(shè)備殘留物黃芩苷的檢測(cè)，測(cè)定操作簡(jiǎn)單，空白無干擾，取樣回收率好，樣品穩(wěn)定，可作為柴黃片設(shè)備清潔殘留物黃芩苷的分析方法，為柴黃片設(shè)備清潔驗(yàn)證過程殘留物的檢驗(yàn)和結(jié)果的準(zhǔn)確判定提供了依據(jù)。

［1］ 何國(guó)強(qiáng)．制藥工藝驗(yàn)證實(shí)施手冊(cè)，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2012：230-231．

［2］ 沈莉，余寶鋒．清潔驗(yàn)證中鹽酸胺碘酮?dú)埩粑锓治龇椒ǖ尿?yàn)證，中國(guó)藥業(yè)雜志，2005，14(4)：54-55．

［3］ 邵明立，白慧良．藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003：177-178．

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典．2010年版一部．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：994