補腎益心湯對自發(fā)性高血壓大鼠血管內(nèi)皮功能損傷的干預(yù)作用

冉 旭 陳 立 呂 波

(1廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州，510405;2中山市中醫(yī)院，中山，528400;3貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴陽，550001;4貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽，550002)

高血壓是最常見的心血管疾病之一，其引起的血管結(jié)構(gòu)及功能障礙是引起心血管事件發(fā)生和發(fā)展的主要危險因素，嚴(yán)重影響著人們的生命與健康，成為當(dāng)前人類主要死亡原因之一，高血壓可導(dǎo)致內(nèi)皮功能受損出現(xiàn)功能失調(diào)，而內(nèi)皮功能失調(diào)反過來可以加速高血壓的發(fā)展進(jìn)程，因此高血壓治療強調(diào)改善血管內(nèi)皮功能［1］，大量研究表明血管內(nèi)皮受損和內(nèi)皮功能減退與高血壓的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)［2］，同時研究證實一氧化氮(NO)，內(nèi)皮素(ET)等血管內(nèi)皮因子在維持血管內(nèi)皮功能中發(fā)揮重要作用［3］，對維持和恢復(fù)正常血管內(nèi)皮功能對于防治高血壓具有重要意義，因此，本研究應(yīng)用補腎益心湯干預(yù)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，旨在探討補腎益心湯對自發(fā)性高血壓大鼠血管內(nèi)皮功能損害的干預(yù)情況作用。

1 材料與方法

1.1 材料 健康自發(fā)性高血壓大鼠40只(雌雄不拘，體重150～200 g)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供;大鼠飼料由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供;一氧化氮(NO)測定試劑盒由南京弘陽生物技術(shù)有限公司提供;內(nèi)皮素(ET)測定試劑藥盒由解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供;酶標(biāo)儀為瑞典linBio128C型。

1.2 方法

1.2.1 分組 健康自發(fā)性高血壓大鼠40只，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)10 d，飼養(yǎng)條件:室溫(22±4)℃，相對濕度(58% ±6%)，光照與黑暗循環(huán)時間為12 h，飲水不限。40只自發(fā)性高血壓大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、補腎益心湯大、中、小劑量組共4組，每組10只，各組均喂飼富含多種維生素及微量元素的基本飼料，補腎益心湯組大、中、小劑量組在喂飼基本飼料的基礎(chǔ)上每日加喂補腎益心湯15 mL，10 mL，5 mL，(主要由桑寄生30 g、女貞子15 g、墨旱蓮15 g、仙茅12 g、淫羊藿15 g、益母草15 g、澤瀉15 g、豨薟草15 g、地骨皮30 g、杜仲15 g組成)，各組動物每日進(jìn)食總量相等，限制為100 g，分2次，1次/12 h。動物分籠飼養(yǎng)，自由飲水，實驗周期為8周。

1.2.2 NO、ET水平測定 于試驗前、8周末大鼠鼠尾動脈采血5 mL，注入含有2 g/L EDTA－Na2 30 μL和抑肽酶40 μL試管中混勻，40℃ 3 kr/min離心10 min，分離血漿，立即凍存于－70℃低溫冰箱中備測，測量前將樣本置室溫下復(fù)融，再次40℃，3 kr/min離心5 min，取上清液，NO測定采用硝酸還原酶法;ET－1測定采用放射免疫法;具體方法嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，所有操作均由專人嚴(yán)格按規(guī)程進(jìn)行。

1.2.3 鼠尾血壓測定 分別于實驗前后測定各組大鼠血壓，將大鼠置于大鼠血壓計的保溫箱內(nèi)加溫10 min(37℃)左右，待尾動脈充分?jǐn)U張，鼠尾套入套袖，動物安靜后充氣，測定血壓，重復(fù)3次，取其均值。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，連續(xù)變量用(s)表示。組間連續(xù)變量之間的比較采用方差分析;組內(nèi)連續(xù)性變量之間的比較采用配對t檢驗;所有分析都采用雙側(cè)檢驗法，檢驗水平α取0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組實驗前后鼠尾收縮壓比較 表1示，實驗前4組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，實驗后4組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且大劑量組血壓降低更明顯，與其他3組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

表14 組實驗前后收縮壓水平比較(s，mmHg)

表14 組實驗前后收縮壓水平比較(s，mmHg)

注:與同期其他各組比較，*P＞0.05，#P＜0.05。

實驗分組 實驗前 實驗后 P值0.666小劑量組 205.1±18.4 189.8±12.0 0.007中劑量組 203.0±16.2 181.1±11.39 0.002大劑量組對照組 208.6±21.2* 205.5±7.56#200.3±21.8 177.0±10.59 0.001

2.2 4組實驗前后NO、ET水平比較 表2示，4組實驗前NO、ET水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，實驗后，藥物大、中、小劑量組NO水平顯著增高，ET水平顯著降低，而大劑量組更為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而對照組NO、ET水平前后無明顯變化。

表24 組NO、ET水平變化情況比較(s)

表24 組NO、ET水平變化情況比較(s)

注:組內(nèi)前后比較，*P＜0.05;組間同期比較，#P＜0.05。

對照組 41.73±3.91 68.08±3.29 40.86±3.8*#63.88±8.16*#小劑量組 42.88±1.48 67.61±8.04 63.41±14.8 54.51±4.85中劑量組 42.13±4.59 69.37±12.29 66.46±13.5 54.80±5.33大劑量組 43.23±3.36 66.27±5.56 79.4±14.41 42.22±4.62

3 討論

隨著人民生活水平的提高和生活節(jié)奏的加快，心血管疾病的發(fā)病率不斷升高，已經(jīng)嚴(yán)重威脅了人類的生活和健康，高血壓引起的心臟和血管結(jié)構(gòu)及功能障礙是引起心血管事件發(fā)生和的主要危險因素，嚴(yán)重影響著人們的生命與健康，成為當(dāng)前人類主要死亡原因之一，文獻(xiàn)表明［4］，血壓的增高與心血管事件的發(fā)生呈正向關(guān)系，血管內(nèi)皮功能與高血壓的相關(guān)性研究已成為心血管領(lǐng)域研究的熱點，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂被認(rèn)為是高血壓患者的一個重要病理生理特征［5］，而完整的內(nèi)皮系統(tǒng)在維持血管張力調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用，研究證實血管內(nèi)皮細(xì)胞是沿著血管內(nèi)面呈單層排列的組織細(xì)胞，它不僅具有分隔血液與間質(zhì)組織的屏障功能，還通過分泌多種血管活性物質(zhì)調(diào)節(jié)血管張力、維持凝血與纖溶的平衡以及防止血小板黏附及血栓形成，調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞的增殖及遷移［6］，在調(diào)節(jié)心血管功能、維持心血管穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用［7］。有研究顯示NO和ET－1的分泌失衡是導(dǎo)致高血壓的重要影響因素［8］。NO為主要的擴(kuò)血管物質(zhì)，有強大的舒張血管的作用，抑制NO的基礎(chǔ)釋放，可引起外周血管收縮，導(dǎo)致血壓升高［9］，研究表明，內(nèi)皮來源的血管活性物質(zhì)在血壓調(diào)節(jié)中起著重要作用，其中一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素－1(ET－1)在血壓調(diào)節(jié)中的作用尤為重要［10］，因此，監(jiān)測這些內(nèi)皮標(biāo)志物能夠有效的評價血管內(nèi)皮功能，與此同時，在高血壓、冠心病等疾病的治療中發(fā)現(xiàn)，針對改善內(nèi)皮功能的治療往往能夠取得顯著的治療效果［11］，改善血管內(nèi)皮功能對高血壓的早期診療及預(yù)后估計等都具有重要意義。

中醫(yī)藥防治內(nèi)皮細(xì)胞損傷是目前較為關(guān)注的領(lǐng)域，許多研究證實，中醫(yī)藥對血管內(nèi)皮細(xì)胞有著較為理想的調(diào)控作用，研究證實黃芪多糖能夠干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥黏附作用，保護(hù)內(nèi)皮功能［12］、黃芪多糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯保護(hù)作用，呈劑量依賴性增強內(nèi)皮細(xì)胞活性、增加NO釋放、抑制細(xì)胞ET釋放、增加胞內(nèi)游離鈣濃度［13］。中醫(yī)學(xué)沒有高血壓病名，對此類病癥大多屬于中醫(yī)學(xué)“眩暈、頭痛”范疇，高血壓病位以肝、腎，始終都有肝腎陰虛，水不涵木，隨著中醫(yī)藥對高血壓病研究的不斷深入，肯定了高血壓病的病位主要為肝、腎兩臟，根源在腎，且涉及心、脾，其病機(jī)為本虛標(biāo)實、腎氣虧虛、精髓不足、水不涵木、肝陽上亢，陽化風(fēng)動，氣血上升［14］，進(jìn)而導(dǎo)致五臟功能失調(diào)［15］，所以多數(shù)情況下，腎虛是高血壓病的始動因素。補腎益心湯由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院吳偉教授根據(jù)多年診治高血壓病的臨床經(jīng)驗，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理研制而成的，臨床上對于高血壓病有很好的療效，主要由桑寄生、女貞子、澤瀉、杜仲等藥物組成，按照補腎、益心、清肝、利尿的治則制定的，全方組方嚴(yán)謹(jǐn)，選藥精當(dāng)，作用肯定，且簡單、安全、無毒副反應(yīng)，研究發(fā)現(xiàn)補腎益心湯所包含的單味中藥桑寄生通過調(diào)節(jié)血清激素水平、血管活性物質(zhì)的釋放及堿性成纖維細(xì)胞生長因子的含量，達(dá)到保護(hù)中小動脈內(nèi)皮細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)平滑肌細(xì)胞增殖，對抗動脈粥樣硬化的效果，對高血壓所致的心、腦、腎病變有積極的治療和預(yù)防作用［16］。研究表明杜仲糖苷能明顯降低血壓，具有抗氧化和自由基清除作用，能保護(hù)細(xì)胞膜不受氧化，其作用機(jī)制可能是降低血漿ET水平，升高血漿NO水平，調(diào)整體內(nèi)ET與NO平衡狀態(tài)，減輕血管內(nèi)皮損傷，松弛血管平滑肌，從而達(dá)到降低血壓保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞和心、腦、腎等靶器官損害的作用［17］;同時現(xiàn)代藥理研究證實，澤瀉有降壓、緩和血管硬化，利尿功用，減少血容量，進(jìn)而減弱RAAS活性，使循環(huán)AngⅡ含量下降而實現(xiàn)降壓效應(yīng)，種種跡象表明補腎益心湯可能對高血壓損傷的血管內(nèi)皮功能存在某種程度的干預(yù)作用，從而在冠心病防治中發(fā)揮一定效應(yīng)，本研究結(jié)果顯示補腎益心湯大、中、小劑量組與對照組比較，能夠顯著增加血一氧化氮水平，而降低血中內(nèi)皮素水平，改善自發(fā)性高血壓大鼠內(nèi)皮功能，降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓，而這種降壓作用可能與其改善血管內(nèi)皮舒縮功能有關(guān)，改善高血壓的預(yù)后，對高血壓的治療大有裨益。

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