不同濃度艾煙長期干預對大鼠血清vWF及ox－LDL表達的影響

楊 佳 趙百孝 韓 麗 劉 平 王 磊 白 樺 黃 劍 劉鈞天 朱茂祥 楊陟華

(1北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京，100029;2中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院，北京，100071)

微循環(huán)障礙是心血管疾病重要的病理基礎，近年來頗受關注。艾灸因具有活血化瘀、溫陽散寒，通經活絡的作用而備受古代醫(yī)家推崇。艾作為最佳的施灸材料，性苦微溫，氣味芳香，艾葉溫辛通脈，具有活血行氣的藥理作用［1］，實驗證明［2］艾灸可以使局部皮膚充血，毛細血管擴張，增強局部的血液循環(huán)與淋巴循環(huán)，使局部的皮膚組織代謝能力加強。

灸法的治療作用主要是由于溫熱刺激、光輻射等物理刺激，艾的藥性作用以及艾燃燒生成物(艾煙)的共同作用。艾灸物理刺激及藥性作用的研究比較明確，但艾煙的化學成分復雜，其對于人體各系統(tǒng)效應的基礎研究尚處于起步階段。

已有報道表明［3］，香煙煙霧會造成微循環(huán)障礙，增加罹患心血管疾病的危險率，艾煙也經由皮膚或者呼吸道吸入人體，而它對于微循環(huán)影響的相關報道缺如。本實驗為艾煙長期毒理實驗和安全性評估的一部分，通過觀察不同濃度艾煙長期干預后大鼠的血管性假血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、氧化性低密度脂蛋白(ox－LDL)的改變來探討艾煙對微循環(huán)的影響，以期為艾煙安全性評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 3年陳艾條(規(guī)格18 mm×200 mm×10支;市售南陽漢醫(yī)有限責任公司生產)，全自動電子分析天平(河南愛博特科技發(fā)展有限公司生產)，動式染毒柜(產品型號HOPE－MED8050;天津開發(fā)區(qū)合普工貿有限公司生產)，科研級生物顯微鏡(NIKON E-clipse 80i)，大鼠ox－LDL、vWF檢測試劑盒均由美國R＆D公司生產，北京環(huán)宇金科生物醫(yī)學技術有限公司分裝。

1.2 實驗動物與分組 本實驗選擇7周齡雄性wistar大鼠168只，體重(60±10)g，購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心。許可證號:［SCXK(津)2008－0001］。所有動物均用標準飼料喂養(yǎng)，自由進水;飼養(yǎng)環(huán)境溫度18～22℃，采用人工控制照明，保持12 h光照(8:00－20:00)和黑暗(20:00－次日8:00)交替循環(huán)，相對濕度為50%～60%。

適應性飼養(yǎng)1周，按照隨機數(shù)字表達法將168只大鼠隨機分為四組，每組42只。低濃度組、中濃度組、高濃度組，對應的動式染毒柜的不透光度分別為10%、40%、70%，每組在不同濃度組艾煙中暴露6個月，每日20 min，6個月末取材;空白組只放置于動式染毒柜中每日20 min，不進行任何干預，6個月末取材。

1.3 用動式染毒柜進行艾煙干預 該實驗選用動式染毒柜可精確控制艾煙濃度并維持染毒環(huán)境氧氣、溫度、濕度、壓強的恒定。艾煙濃度用透光率度量，濃度越低，透光率越高。打開染毒柜電源，設置動式染毒柜各項參數(shù):氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20℃～22℃、壓強－70 kp、時間20 min，觀察染毒柜屏幕顯示，待染毒柜內艾煙濃度分別達到低、中、高相應濃度，打開艙門，迅速放入動物，待儀器顯示干預時間已到，取出動物;空白組放置于染毒柜中，設置動式染毒柜各項參數(shù):氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20～22℃、壓強－70 kp、時間20 min，不進行任何干預。

1.4 取材 所有大鼠麻醉后，股動脈取血，所得血液放入EP管中，在室溫(22～25℃)下靜置2 h后離心:轉速3 500 r/min，溫度4℃，時間15 min，離心完畢，用移液槍將上清液(血清)移入新的離心管后放入－70℃的冰箱待測。

1.5 檢測指標 血清vWF、ox－LDL含量的測定采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)原理定量測定血清vWF、ox－LDL含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。計量指標均采用均值±標準差(s)表示，各組數(shù)據(jù)若符從正態(tài)分布，組間比較采用單因素方差分析;若不服從正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義;P＜0.01為差異有顯著性意義。

2 結果

2.1 血清中vWF含量的改變 結果如表1和圖1所示:低濃度、中濃度艾煙干預均使血清中vWF含量下降，與空白組相比有差異，P＜0.05，高濃度艾煙干預后，vWF含量顯著性降低，P＜0.01，顯示出隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預示著血小板聚集程度下降，血流狀態(tài)下抑制血栓形成。

表1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

表1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

48.58±1.58低濃度組 7 43.82±2.04* 0.043中濃度組 7 43.11±1.23* 0.018高濃度組 7 41.16±1.31＊＊空白對照組7 0.003

圖1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

空白對照組67.95±5.7低濃度組 7 58.95±1.57 0.175中濃度組 7 81.98±4.79* 0.034高濃度組7 68.7±4.57 0.908 7

圖2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

2.2 血清中ox－LDL的含量改變 低濃度艾煙干預后ox－LDL含量有下降趨勢，但與空白組相比無統(tǒng)計學意義，P＞0.05;中濃度組艾煙使血清中ox－LDL含量升高，與空白組相比有統(tǒng)計學意義，P＜0.05;高濃度艾煙干預與空白組相比有上升趨勢，但無統(tǒng)計學意義，P＞0.05。結果如表2和圖2所示。

3 討論

血液流變異常是誘發(fā)心血管疾病的危險因素之一，血流速度減慢，血小板凝聚性增高，可以促使血栓的形成，進一步誘發(fā)動脈粥樣硬化，導致心血管事件的發(fā)生。因此改善血液流變狀態(tài)對于保證微循環(huán)的正常運行，維持物質代謝，能量代謝平衡，促進神經細胞的功能恢復具有重大意義。

vWF是反映血小板功能的重要指標［4－6］。vWF主要在血管內皮細胞的Weibel－Palade小體中合成和儲存，當血管內皮細胞受損時，vWF能夠迅速釋放，它對血小板黏附到已暴露膠原的內皮和血小板聚集起關鍵作用。越來越多的證據(jù)顯示vWF在血流狀態(tài)下的血栓形成中發(fā)揮關鍵作用，而血栓的形成則加速了心血管疾病的發(fā)生。

臨床觀察和實驗研究證實，艾灸通過改善機體循環(huán)狀態(tài)，提高氧自由基代謝、調整神經內分泌系統(tǒng)、穩(wěn)定內環(huán)境等多種途徑達到活血化瘀的作用［7－9］。本實驗結果顯示:低濃度、中濃度艾煙干預均使血清中vWF含量下降，隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，提示艾煙可以使血流變快，降低血液凝集程度，具有加速機體新陳代謝，改善微循環(huán)，穩(wěn)定內環(huán)境的作用。

艾性芳香辛燥是艾灸對機體產生效應的機制之一［10］。艾煙能夠起到調節(jié)微循環(huán)作用可能與艾葉的藥性作用以及艾燃燒生成物的芳香作用有關?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，艾葉的主要成分是揮發(fā)油，其化學成分中含有:桉葉素、樟腦、龍腦、甘菊環(huán)等［11］，這些成分也存在于羅勒、迷迭香、桉葉油等［12］，這些芳香物質可以對人體神經系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、皮膚、泌尿系統(tǒng)都存在著治療和輔助治療作用［13－14］，可以促進血液運行，加快微循環(huán)，調節(jié)新陳代謝，加快體內毒素排除、消炎殺菌，擴張外周血管、降低血壓、增加心灌流量而抗缺氧。

目前普遍認為［15］芳香物質可經嗅覺系統(tǒng)傳入大腦，抑制或興奮中樞神經系統(tǒng)，亦可通過呼吸或皮膚滲透進入血液，隨血液循環(huán)運行至全身，因此艾葉及艾燃燒生成物可能是通過其中的揮發(fā)油的芳香作用達到加快血液循環(huán)，通絡散瘀的作用。

ox－LDL可以抑制內皮細胞NOS基因表達，從而抑制NO合成和釋放，引起內皮功能障礙。在心血管疾病發(fā)展的過程中，首先是由于內皮功能受損或高膽固醇血癥，因此ox－LDL是內皮損傷的有害因子。血管內皮損傷是造成微循環(huán)障礙的原因之一［16］。

本實驗結果顯示，低濃度艾煙干預后ox－LDL含量無明顯改變，P＞0.05;高濃度艾煙干預后，ox－LDL含量有上升趨勢但不具有統(tǒng)計學意義，P＞0.05;中濃度艾煙干預使ox－LDL含量顯著性上升，表明中濃度艾煙對血管內皮有一定損傷，但是由于本實驗為毒理試驗，中濃度(40%)艾煙相當于臨床艾煙濃度的56倍，低濃度組艾煙(10%)為臨床艾煙濃度9倍，低濃度艾煙干預對血管內皮無損傷，可以初步推斷，臨床使用艾煙可能不會對血管內皮造成損傷。進一步研究可以設置臨床診室濃度組，從而深入探討臨床使用艾煙對微循環(huán)的影響。

4 結論

隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預示著艾煙使血小板聚集程度下降，從而改善血液微循環(huán)，對促進機體新陳代謝，穩(wěn)定內環(huán)境起到一定積極作用。低濃度艾煙未見明顯血管內皮損傷，中濃度艾煙會造成一定血管內皮損傷。其損傷機制有待于進一步研究。

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