凝血因子在結直腸癌中的表達及相關性的研究＊

莊華章 陳永杰

（廣東醫(yī)學院附屬觀瀾醫(yī)院肛腸外科 廣東深圳 518110）

D－二聚體是纖維蛋白單體活化因子交聯(lián)后，再經(jīng)纖維酶水解作用所產(chǎn)生的一種特殊降解產(chǎn)物，為纖維蛋白降解產(chǎn)物中的最小片段，其水平升高能特異性反映繼發(fā)性纖溶活性的增強［1，2］，研究表明D－二聚體水平在肺癌、肝癌、前列腺癌、結直腸癌等多種實體腫瘤患者中也會明顯升高［2］。PAI－1屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑（SERPINE）超家族之一。目前有研究表明PAI－1的過表達與癌細胞的侵襲和轉移有著明顯的正相關性［3］。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年9月至2013年9月年于觀瀾醫(yī)院肛腸外科住院部的結直腸癌患者74例，年齡跨度42～77歲，中位年齡61歲，男44例，女30例。同時選擇37例良性病患者作為對照組，年齡跨度19～62歲，中位年齡38歲；男26例，女11例。

納入標準：所有參與實驗的患者均要求年齡在18歲以上，結直腸癌患者經(jīng)組織病理學檢查確診。

排除標準：患有嚴重外傷或大手術4周內(nèi)者；伴潰瘍性疾病者；骨組織損傷者；嚴重心血管或外周血管病變者；糖尿病、慢性阻塞性肺部疾病、肝腎疾病和免疫系統(tǒng)疾病等具有凝血功能障礙患者，近期服用抗凝藥物者。

1.2 結直腸癌分期 分期方案為Dukes分期方案。所有結直腸癌患者均根據(jù)各項術前檢查及術后病理結果進行分期，分為DukesAB期間和DukesCD個兩組，本實驗組患者AB期42例，CD期32例。

1.3 血清D－二聚體和PAI－1檢測 入選患者安靜仰臥10min，從肘正中靜脈采集4mL靜脈血注入非抗凝試管中，室溫靜置30min后，4℃下3000轉／min離心10min，分離的血清于－80℃冷凍保存直至檢測，采用ELISA法測定，術后同法測定。

1.4 統(tǒng)計方法 計量資料全部用mean±s表示，兩組患者間D－二聚體和纖維蛋白原水平比較采用Independent－Samplest檢驗的方法，結直腸癌患者各亞組的比較采用單因素方差的方法。P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。所有數(shù)據(jù)均用SPSS17.0軟件包進行處理。

2 結 果

2.1 結直腸癌各組與對照組D－二聚體和PAI－1水平 結果如表1所示，結直腸癌患者的D－二聚體水平、PAI－1水平顯著高于對照組，差異非常顯著（P＜0.01）。

表1 結直腸癌組和對照組D－二聚體和PAI－1水平比較（mean±s）

2.2 各期患者D－二聚體的平均水平 結果如表2所示，在結直腸癌患者的各亞組中，DukesCD期患者的D－二聚體水平明顯高于AB期，并有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 結直腸癌組內(nèi)各亞組的D－二聚體水平比較（）

表2 結直腸癌組內(nèi)各亞組的D－二聚體水平比較（）

分組 D－二聚體（μg／mL） P PAI－1（ng／mL）P DukesAB期208.12±37.98 32.68±0.71 DukesCD期624.30±118.420.03241.07±0.760.024

3 討 論

D－二聚體是纖維蛋白單體活化因子交聯(lián)后，再經(jīng)纖維酶水解作用所產(chǎn)生的一種殊降解產(chǎn)物，為纖維蛋白溶解酶作用于血管內(nèi)外交聯(lián)纖維蛋白所產(chǎn)生的最小片段，其水平升高特異反映繼發(fā)性纖溶活性的增強［1，2］，在血液凝固過程中，具有重要的正相關性［4～6］。生理條件下D－二聚體低表達甚至不表達，但是在病理條件下，D－二聚體的表達量顯著上升［7］。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在彌漫性血管內(nèi)凝血、血管栓塞性疾患、心肌梗死等疾病中D－二聚體水平會有顯著升高［7］。而進一步研究表明D－二聚體水平在肺癌、肝癌、前列腺癌、結直腸癌等多種實體腫瘤患者中也會明顯升高：Nagy等［8］回顧性分析了300例惡性腫瘤患者，結果提示D－二聚體水平的增高與疾病的進展和死亡率的增高密切相關，提出D－二聚體是一個潛在的預測預后的標記物。而Ketut等［9］臨床實驗表明，血漿D－二聚體水平與實體腫瘤的臨床分期呈正相關，D－二聚體高水平即提示腫瘤患者處于高凝狀態(tài)，同時預示著不良預后。Masatoshi的研究表明［10］在結直腸癌患者中，D－二聚體水平與腫瘤的浸潤深度、淋巴轉移、血管侵犯、肝轉移等有密切的相關性，結直腸癌患者D－二聚體的水平與腫瘤分期具有正相關性。目前，D－二聚體已經(jīng)成為結直腸癌領域關注的熱點生物標記物之一。

纖溶酶原激活物抑制劑－1（plasminogen activator inhibitor－1，PAI－1）屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑（SERPINE）超家族之一。從目前的研究看來PAI－1的過表達與癌細胞的侵襲和轉移有著明顯的正相關性。在多數(shù)的體外實驗和組織免疫染色中都發(fā)現(xiàn)PAI－1在侵襲性較強的癌細胞中表現(xiàn)出了較高的表達趨勢和敏感性，提示了PAI－1具有作為惡性侵襲性腫瘤標記物及作為預后因子的應用價值。László［11］等 人 應 用 組 織 蛋 白 酶 B 和 L（CATB，CATL）、u－PA、PAI－1、CEA及CA－199聯(lián)合檢測56例結直腸癌組織，25例潰瘍性結腸炎組織，26例結直腸腺瘤組織和35例正常腸組織，結果顯示PAI－1的 敏 感 度 為 94%，CATB82%，u－PA69%，CATL41%，高于 CEA（30%）及 CA－199（18%）。PAI－1，CATB和u－PA比CEA及CA－199表現(xiàn)出更高的精確度。PAI－1、CATB和CATL對結直腸癌的預后有重要影響。Yasuhide［12］等人的研究表明PAI－1的血漿水平是預測結直腸癌術后復發(fā)的一個有前景的生物標記物。

以上研究提示在結直腸癌患者中，存在某種機制，導致血液處于高凝狀態(tài)。在本實驗中，結直腸癌患者血清D－二聚體和PAI－1水平在手術前后均明顯高于正常組（P＜0.01），而術后患者明顯高于術前（P＜0.01），說明D－二聚體和PAI－1在一定程度上反映結直腸癌轉移與機體的高凝狀態(tài)具有相關性；而DukesCD期患者的D－二聚體和PAI－1水平顯著高于AB期（P＜0.05），也就間接證明了CD期腫瘤生長的加劇。因此，本研究發(fā)現(xiàn)在結直腸癌的轉移過程中，凝血機制的激活，纖維蛋白的活性度增高和纖溶因子釋放的受阻，與該病的進展有重要的正相關性，進而可以影響到患者的預后。因此，D－二聚體和PAI－1對于結直腸癌的分期及預后可能有較大的參考意義，可成為一個指導診療的重要指標。

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［12］Yasuhide Y，Tokuzo A，Kazuko M，et al.Plasma concertrations of VCAM－1and PAI－1：A predictive biomarker for post－operative recurrence in colorectal cancer.［J］.Cancer Sci，2010，101（8）：1886－1890.