切向流超濾系統(tǒng)純化雪蓮注射液的工藝優(yōu)化研究

謝志軍， 魏鴻雁， 賈曉光， 王若詩

(1.國藥集團(tuán)新疆制藥有限公司，新疆烏魯木齊830032;2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所新疆分所，新疆烏魯木齊830002)

雪蓮注射液是以菊科植物天山雪蓮花Saussurea involucrata Kar．et Kir．的干燥地上部分經(jīng)提取制成的滅菌水溶液。本品具有消炎鎮(zhèn)痛、消腫、活血化瘀等功效，用于急、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及骨關(guān)節(jié)炎引起的關(guān)節(jié)疼痛等癥，臨床用法為肌內(nèi)注射［1］。天山雪蓮的乙醇提取物、總堿和總黃酮具有明顯的抗癌作用、抗炎作用、抗自由基和抗疲勞等作用。控制藥品有效成分的量，降低雜質(zhì)量，可以有效地保證藥品藥效，并提高中藥注射劑的安全性［2］。

切向流超濾技術(shù)是一種膜分離技術(shù)，屬于分子量水平的切向流過濾，通常截留分子量范圍:1-1 000 kD，與常規(guī)垂直過濾不同，在切向流過濾中，液體切向流過膜表面，流體產(chǎn)生的跨膜壓力將部分溶液壓過濾膜，截留部分則在系統(tǒng)中循環(huán)過濾，整個(gè)過程中液體以一定流速連續(xù)流過膜表面，過濾的同時(shí)也沖刷了濾膜表面，使膜表面不會形成凝膠層，從而保持穩(wěn)定的過濾速度 ［BP4-切向流超濾系統(tǒng)手冊 (密理博中國有限公司)］。超濾膜系統(tǒng)可提高對溶液中腐殖酸的去除效果，且膜通量具有可控性，與離心和層析相比，處理量大，處理時(shí)間短，容易線性放大，具有高產(chǎn)率、過濾精度高的優(yōu)勢［3］。本實(shí)驗(yàn)采用武漢市協(xié)力過濾技術(shù)有限公司生產(chǎn)的W-UF-5型切向流超濾系統(tǒng)取代微孔膜筒式過濾器，采用上海先維過濾設(shè)備廠生產(chǎn)的0.22μm聚醚砜微孔膜筒式過濾器，選用5萬、3萬、1萬和0.8萬分子量膜對雪蓮提取液進(jìn)行過濾，以濾液中總黃酮、不溶性微粒數(shù)及總固體量為檢測指標(biāo)，同時(shí)考察藥液過濾速度，與微孔膜筒式過濾工藝進(jìn)行對比，篩選最佳生產(chǎn)工藝，為提高藥品質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 器材 W-UF-5型切向流超濾系統(tǒng) (武漢市協(xié)力過濾技術(shù)有限公司);5萬、3萬、1萬和0.8萬分子量膜 (武漢市協(xié)力過濾技術(shù)有限公司);0.22μm聚醚砜微孔膜筒式過濾器 (上海先維過濾設(shè)備廠);TU—1901雙光束紫外可見分光光度計(jì) (北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);ZWF—J6激光注射液微粒分析儀 (天津天河醫(yī)療儀器有限公司);AB256—s型電子天平 (mettler儀器有限公司);電熱鼓風(fēng)干燥箱烘箱 (上海安亭科學(xué)儀器有限公司)等。

1.2 試劑 雪蓮提取濃縮液 (國藥集團(tuán)新疆制藥廠生產(chǎn)，批號為ZJ10005、ZJ10006、ZJ10007);蘆丁對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號200707);乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉 (分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠)等。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法 取雪蓮提取濃縮液，測定其總固體量，確定稀釋倍數(shù);將濃縮液稀釋后測定其總黃酮量、總固體量和微粒數(shù)量;分別將稀釋藥液經(jīng)5萬、3萬、1萬和0.8萬分子量膜過濾，測定過濾后藥液的總黃酮量、總固體量和微粒數(shù)量，并將此藥液以0.22μm聚醚砜微孔膜筒式過濾器過濾，測定相同指標(biāo)。以上試驗(yàn)重復(fù)3批取平均值。

總黃酮的測定［1］精密稱取在105℃干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁對照品50 mg，置100 mL量瓶中，加適量60%乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取25 mL置50 mL量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置25 m L量瓶中，各加水5 m L，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，再60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在510 nm波長處測定吸光度，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=12.442X－0.006，R=0.999 1，在0.5～2.5 mg呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。精密量取樣品5 mL置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取2.5 mL置25 m L量瓶中，加水5 m L，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，再60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在510 nm處測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含有量。

總固體量的測定［1］精密量取本品10 mL，置于恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，蒸干，在105℃干燥3 h，移置干燥器中，冷卻30 min，迅速稱定質(zhì)量，計(jì)算總固體量。

微粒數(shù)量的測定［4］按中華人民共和國藥典一部附錄ⅨR不溶性微粒檢查法檢測。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表1。

表1 3項(xiàng)考核指標(biāo)檢測結(jié)果平均值

3 討論

3.1 總黃酮是雪蓮及其注射液中主要有效成分［5-6］，本研究以紫外分光光度法測定了各工藝條件下雪蓮注射液中總黃酮量，結(jié)果表明5萬分子膜切向流超濾系統(tǒng)過濾的藥液中總黃酮量降低較少，且與以往使用的微孔膜筒式過濾器過濾藥液的總黃酮量接近。

3.2 國家食品藥品監(jiān)督管理局對中藥注射劑有更高的要求，多成分制成的注射劑，總固體中結(jié)構(gòu)明確成分的含有量應(yīng)不少于60%［7］，本產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求總固體應(yīng)不少于50 mg/mL，使用5萬分子膜切向流超濾系統(tǒng)比使用微孔膜筒式過濾器過濾藥液的總固體值略有提高，5萬分子膜切向流超濾系統(tǒng)有助于產(chǎn)品質(zhì)量的提高。

3.3 注射劑中的不溶性微?？赡芤鹧茏枞⒐┭蛔?、靜脈炎、血栓、局部組織壞死等疾病，長期大量使用，對心、肺、肝、腎等器官均有嚴(yán)重危害，因此控制注射劑中不溶性微粒分析十分重要［8-9］?！吨袊幍洹芬笞⑸鋭?yīng)澄明，100 mL以上的靜脈注射液大于10μm不溶性微粒不得過25個(gè)/m L，100 mL以下的靜脈注射液大于10μm不溶性微粒60個(gè)/mL，雪蓮注射液為肌內(nèi)注射，對不溶性微粒無要求［3］。本試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)顯示采用0.22μm聚醚砜微孔膜筒式過濾器過濾藥液后，微粒數(shù)由8 799.5個(gè)/mL降至1 171.6個(gè)/mL，該項(xiàng)指標(biāo)沒有達(dá)到靜脈注射劑的標(biāo)準(zhǔn)。采用W-UF-5型5萬分子膜切向流超濾系統(tǒng)過濾藥液后，微粒數(shù)由8 799.5個(gè)/mL降至4.1個(gè)/mL，達(dá)到靜脈注射劑的最高標(biāo)準(zhǔn) (≤25個(gè)/mL)要求，顯著降低注射液中的不溶性微粒，且該項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到靜脈注射液的最高標(biāo)準(zhǔn)要求，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高和改變給藥途徑提供依據(jù)。

3.4 綜上所述，在中藥注射劑的生產(chǎn)過程中，采用W-UF-5型5萬分子膜切向流超濾系統(tǒng)代替0.22μm聚醚砜微孔膜筒式過濾器，可保證藥品藥效成分不降低的同時(shí)大幅降低注射液中不溶性微粒的總數(shù)，為提高雪蓮注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和改變給藥途徑提供依據(jù)。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):第17分冊［S］．1998:254．

［2］國家中醫(yī)藥管理局．中華本草:維吾爾藥卷［M］．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2005:338-340．

［3］于海琴，楊成永，張 惠．粉末活性炭導(dǎo)入超濾系統(tǒng)去除水中天然有機(jī)物的性能研究［J］．膜科學(xué)與技術(shù)，2009，29(6):85-89．

［4］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄58-60．

［5］薛秀峰．雪蓮及其注射液質(zhì)量控制方法的研究［D］．沈陽:沈陽藥科大學(xué)，2005．

［6］畢殿洲．藥劑學(xué)［M］．4版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:260．

［7］國家食品藥品監(jiān)督管理局．國食藥監(jiān)注 ［2007］743號．中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求［S］．

［8］徐 春．關(guān)注中藥注射劑的不良反應(yīng)［J］．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3(4):302-304．

［9］韓 敏，張愛琴．不溶性微粒分析在臨床注射劑中的應(yīng)用［J］．中國藥學(xué)雜志，2006，41(24):38-40．