毛白杜鵑揮發(fā)油化學成分及清除亞硝酸鈉活性研究

李 標， 張 鵬， 蔣彬彬， 童恩正， 王 維， 畢淑峰

(黃山學院生命與環(huán)境學院，安徽黃山245041)

毛白杜鵑Rhododendron mucronatum G．Don又名白花杜鵑、白映山紅、白杜鵑，為杜鵑花科杜鵑花屬半常綠灌木植物［1-2］，性辛、酸，溫，具有止咳、固精、止帶的功效［2］。揮發(fā)油是多種杜鵑屬植物的活性成分之一，千里香杜鵑、興安杜鵑、太白杜鵑、淡黃杜鵑、櫻草杜鵑、烈香杜鵑等植物揮發(fā)油的化學成分已有文獻報道［3-10］，而毛白杜鵑揮發(fā)油化學成分的研究尚未見報道，本實驗采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 (GC-MS)技術(shù)分析了毛白杜鵑揮發(fā)油的化學成分，并對其清除亞硝酸鈉的能力進行了研究，為其進一步的藥效評價和開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑 毛白杜鵑于2011年10月采自黃山學院，由黃山學院張慧沖副教授鑒定。將毛白杜鵑葉于50℃烘箱烘干，粉碎，過篩，裝瓶，備用。蘆丁對照品 (國藥集團化學試劑有限公司)，硫酸亞鐵、鐵氰化鉀、無水乙醚等均為分析純。

1.2 儀器 Agilent HP7890-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 (美國Agilent公司)，UV754紫外可見分光光度計 (上海精密科學儀器有限公司)、揮發(fā)油提取器、PL203電子天平 ［梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司］。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取 精確稱取粉碎后的樣品50.0 g置于燒瓶中，加水400 mL，浸泡過夜，用揮發(fā)油提取器按水蒸氣蒸餾法提取6 h，得到具有濃郁香味的淡黃色透明油狀物，用無水硫酸鈉干燥，稱定質(zhì)量，收率為0.25%(g/g)，備用。

2.2 GC-MS測定條件 選用HP-5 MS彈性石英毛細管柱 (0.25μm，30m×0.25 mm);高純氦氣為載氣，體積流量為1.0 mL/min，分流比為40∶1;進樣口溫度為250℃;進樣量為1μL;色譜柱初始溫度為50℃，以6℃/min升至260℃，保持5 min。電子轟擊 (EI)離子源，電子能量70 eV，電離電壓1 790 V，掃描質(zhì)量數(shù)范圍m/z 35～450，質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST08。

2.3 GC-MS分析 取揮發(fā)油樣品于10 mL量瓶

中，用無水乙醚稀釋定容，按上述的GC-MS條件對毛白杜鵑揮發(fā)油進行分析，得總離子流圖 (見圖1)，用峰面積歸一化法確定各組分在揮發(fā)油中的質(zhì)量分數(shù)。

表1 毛白杜鵑揮發(fā)油化學成分分析結(jié)果Tab.1 Chem ical constituents of the essential oil in Rhododendron mucronatum G．Don

圖1 毛白杜鵑揮發(fā)油的總離子流圖Fig.1 TICS of essential oil in Rhododendron mucronatum G．Don

2.4 清除亞硝酸鈉能力的測定 按文獻的方法測定揮發(fā)油對亞硝酸鈉的清除率［11］。將0.5 mol/L的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液 (pH3.0)5.0 mL置于10 mL量瓶中，加入1 mL 100 mg/L的 NaNO2溶液，分別加入不同質(zhì)量濃度揮發(fā)油樣品定容至刻度，37℃下反應1 h。取1 mL反應液于50 mL量瓶中，加入0.4%對氨基苯磺酸溶液2 mL和0.2%N-1-萘乙二胺鹽酸鹽1 mL，搖勻放置15 min后，用分光光度計在540 nm處測吸光度值，用下式計算清除率。以維生素C和蘆丁為陽性對照，按上述的相同方法測定其對亞硝酸鈉的清除率。

清除率=(A0－Ax)/A0×100%

式中，A0為不加樣品空白試驗的吸光度值;Ax為加了不同濃度揮發(fā)油、維生素C、蘆丁樣品的清除亞硝酸鈉反應液的吸光度值。

3 結(jié)果與討論

3.1 揮發(fā)油的化學成分 利用色譜軟件及NIST08進行檢索，根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)及相關(guān)文獻，對53個色譜峰進行鑒定，鑒定的53個化合物占揮發(fā)油總量的82.90%，分子式、分子量等具體結(jié)果見表1。由GC-MS分析結(jié)果可知，毛白杜鵑揮發(fā)油化學成分復雜，主要為醇、醛、萜及酯類等，其中植物醇、13-epimanoyl oxide、環(huán)己酮、芳樟醇、冬青油、反式-2，4-庚二烯醛、松油醇、順式-橙花叔醇、二十六烷、4-甲氧基苯乙烯、2-ethylcyclohexene、 貝 殼 杉-16-烯、1，1，6-trimethyl-1，2-dihydronaphthalene含有量較高，這13個主要化合物占整個峰面積的55.67%。毛白杜鵑揮發(fā)油化合物除了吲哚含有氮元素外，其他化合物均不含氮元素。相對分子質(zhì)量最大和最小的化合物為二十六烷和異戊醛，其相對分子質(zhì)量分別為366和86。毛白杜鵑揮發(fā)油成分與同屬的美容杜鵑花、滿山紅的揮發(fā)油成分存在較大的相似性［8-9］。

3.2 揮發(fā)油清除亞硝酸鈉能力 亞硝胺是一類公認的化學致癌物，亞硝酸鹽是亞硝胺的前體物質(zhì)，清除亞硝酸鹽是防治癌癥的有效途徑之一。由圖2可知，毛白杜鵑揮發(fā)油具有一定的清除亞硝酸鈉作用，隨著揮發(fā)油濃度的增加，其對亞硝酸鈉的清除作用也在逐漸增加，樣品的濃度與清除率的量效關(guān)系較好，兩者成線性關(guān)系，其回歸方程為Y=0.400 6X+23.662(R2=0.995 9)，式中Y為清除率 (%)，X為樣品的質(zhì)量濃度 (mg/L)。毛白杜鵑對亞硝酸鈉的清除能力明顯優(yōu)于維生素C，但略低于蘆丁。

圖2 揮發(fā)油對亞硝酸鈉的清除作用Fig.2 Scavenging capacity against sodimn nitrite of essential oil

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