高效液相色譜－蒸發(fā)光散射器法測定川貝末膠囊中貝母素乙含量

汪劍飛

(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗所，安徽 蕪湖 241001)

川貝末膠囊由川貝在80℃以下干燥、粉碎成細(xì)粉、過篩、裝入膠囊制成，具有清熱潤肺、化痰止咳的功效，主要用于治療肺熱燥咳、干咳少痰、陰虛勞嗽、咳痰帶血[1]。由于其藥品標(biāo)準(zhǔn)收載時間較早，質(zhì)量控制方法中只有顯微鑒別和膠囊劑常規(guī)檢查，不利于該藥的質(zhì)量控制。為了提高藥品內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，筆者建立了高效液相色譜－蒸發(fā)光散射器(HPLC－ELSD)法測定川貝末膠囊中貝母素乙的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，該法簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于川貝末膠囊的質(zhì)量控制?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters2695型高效液相色譜儀，2424型蒸發(fā)光散射檢測器(沃特世公司);AB304－S型電子天平(梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司);超聲波清洗儀(上海杰理科技有限公司)。貝母素乙對照品(批號為110751－200709，供含量測定用，含量為99.8%，中國藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純)，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純;川貝末膠囊(蕪湖市博英制藥有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Intersil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%二乙胺(70 ∶30);流速:1.0 mL/min，柱溫:35 ℃;蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度為80℃，載氣為壓縮空氣，壓力40 psi。

2.2 溶液制備

精密稱取貝母素乙對照品10.20 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取川貝末膠囊10粒，取內(nèi)容物，精密稱定，研勻，稱取2 g，置100 mL錐形瓶中，加1.5%的鹽酸溶液50 mL，超聲提取20 min，放冷，用氨試液調(diào)節(jié)pH至10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次30 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇分次溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄去初濾液2 mL，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。取1.5%的鹽酸溶液50 mL，按供試品溶液制備方法操作，作為空白對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:按照2.1項下色譜條件，吸取2.2項下3種溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀。結(jié)果見圖1?？梢姡崛∪軇┎桓蓴_供試品溶液中貝母素乙的測定。

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液 2.50，5.00，10.00，15.00，20.00，25.00 μL 進(jìn)樣，按照 2.1 項下色譜條件測定峰面積，以對照品進(jìn)樣質(zhì)量(μg)的常用對數(shù)值為橫坐標(biāo)、峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.960 9X+6.525 8，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，貝母素乙進(jìn)樣質(zhì)量的線性范圍是 0.6 ～6.0 μg。

精密度試驗:精密量取同一對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果貝母素乙峰面積的RSD=0.22%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別于 0，2，4，8，12，24 h 時進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果的RSD=0.38%(n=6)，表明貝母素乙在甲醇溶液中24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批(批號為120302)樣品2.0 g，共5份，依法制成供試品溶液，進(jìn)樣測定含量。結(jié)果含量為每粒0.34 mg，RSD=1.63%(n=5)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗:精密稱取已知貝母素乙含量的樣品2.0 g共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液2mL(0.24mg/mL)，按供試品溶液制備方法處理，定容至10 mL容量瓶中，按2.1項下色譜條件測定含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 貝母素乙加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

稱取不同批號的樣品細(xì)粉各2.0 g(每批平行取3份)，精密稱定，分別置入具塞錐形瓶中，依法制成供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定并計算含量。結(jié)果批號為120301，120302，120303的樣品中貝母素乙的含量分別為每粒0.38，0.34，0.35mg(n=3)。

3 討論

色譜條件的選擇時，參考2010年版《中國藥典(一部)》浙貝母[2]含量測定項下的流動相乙腈－0.1%二乙胺進(jìn)行試驗，結(jié)果供試品溶液中貝母素乙與雜質(zhì)很好地分離，故選此為流動相。

貝母素乙為生物堿，用稀鹽酸提取，再加堿使生物堿游離后用三氯甲烷萃取，蒸干，用甲醇溶解制得供試品溶液[3－4]。此方法制得的供試品溶液雜質(zhì)峰明顯小于2010年版《中國藥典(一部)》中浙貝母含量測定的樣品處理方法。提取溶劑考察了0.5%，1.0%和1.5%3個不同體積分?jǐn)?shù)的鹽酸，提取方式比較了超聲提取(10，20，30 min)和回流提取(1，2，3 h)兩種方式，結(jié)果以1.5%的鹽酸超聲20 min效果最佳。

曾嘗試在文中的色譜條件下同時測定川貝末膠囊中貝母素甲和貝母素乙的含量，結(jié)果3批樣品中未能檢測到貝母素甲，可能與儀器檢測器的靈敏度或供試品溶液中貝母素甲的含量較低有關(guān)，需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。3批樣品中貝母素乙的含量基本一致，可為川貝末膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供參考。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第五冊)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1991:15.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:274.

[3]李櫻子，韓忠旭.用不同濃度鹽酸提取貝母素甲、乙方法的研究[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，19(1):47.

[4]范 蕾，王偉影.可同時測定蛇膽川貝液中貝母素甲與貝母素乙的方法[J].中國藥業(yè)，2012，21(2):41 － 42.