杜仲片提取工藝研究

林向前

(福建省漳州市中醫(yī)院，福建 漳州 363000)

杜仲片是我院骨傷科傳統(tǒng)制劑，是由(鹽炙)杜仲、續(xù)斷、當(dāng)歸、牡丹皮、桃仁、(醋炙)延胡索、赤芍等中藥組方的半浸膏片劑。具有補(bǔ)腎強(qiáng)腰、活血化瘀功效，適用于急慢性腰部損傷、關(guān)節(jié)酸痛等之腎虛血瘀證。近50年的臨床應(yīng)用證明，該藥療效確切且未見任何不良反應(yīng)。筆者以干浸膏收率、芍藥苷提取量為考核指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對杜仲片中桃仁及赤芍提取工藝條件中藥材加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化研究，旨在為該制劑的生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括真空脫氣機(jī)、四元梯度泵、紫外檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器、Ver 08.01－Chemistation化學(xué)工作站);TG328B型電光分析天平(上海天平儀器廠);FM101－2型鼓風(fēng)干燥箱(長沙儀器廠)。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110736－200732);甲醇、乙腈(色譜純，美國TEDIA天地試劑公司);水(重蒸餾，臨用前配制);桃仁、赤芍(康美藥業(yè)有限公司，批號(hào)為12021301，12011302)，經(jīng)鑒定符合2010年版《中國藥典(一部)》相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[1]

采用 L9(34)設(shè)計(jì)試驗(yàn)表安排試驗(yàn)，以干浸膏收率、芍藥苷提取量為考察指標(biāo)，考察杜仲片提取工藝條件，以加水量(因素 A)、提取時(shí)間(因素 B)、提取次數(shù)(因素C)為3個(gè)主要因素，每個(gè)因素設(shè)3水平。見表1。

表1 優(yōu)選提取工藝因素水平表

2.2 樣品制備

取 1/200處方量藥材桃仁、赤芍共計(jì)157.8 g，按表1各正交試驗(yàn)條件進(jìn)行水提，藥液過濾后濃縮并定容至100 mL，備用。

2.3 干浸膏得率測定

精密量取各正交試驗(yàn)濃縮后的藥液25 mL，分別置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?05℃干燥3 h，取出，置干燥器中放置30 min，計(jì)算干浸膏得率。

2.4 芍藥苷含量測定

2.4.1 色譜條件[2]

色譜柱:Zorbax SB C18柱(150 mm ×4.6 mm，3.5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(40 ∶60);流速:1.0 mL/min;柱溫:35 ℃;檢測波長:230 nm;進(jìn)樣量:15 μL。

2.4.2 溶液制備[2－3]

精密稱取芍藥苷對照品(98.1%)14.07 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL甲醇中含芍藥苷276.05 mg的對照品貯備液。精密量取2.2項(xiàng)下樣品0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣前用0.45 μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.4.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取10 mL對照品貯備液至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度。分別精密吸取上述續(xù)濾液5，10，15，20，25 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇制成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液。精密吸取15 μL，分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行測定。以對照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)、相應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性擬合。得線性回歸方程 Y=41.967 X+11(r=0.999 1)。結(jié) 果 表 明 ，芍 藥 苷 質(zhì) 量 濃 度 在11.042～55.211 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取芍藥苷對照品溶液(33.126 μg/mL)15 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.17%(n=6)，表明儀器精密度良好

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于 0，2，4，8，16，24 h 時(shí)分別進(jìn)樣6次，每次精密進(jìn)樣15 μL，測定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.64%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)檢測穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):精密稱取同一批樣品6份，分別制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積。結(jié)果的 RSD=1.41%(n=6)，表明該方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密量取芍藥苷對照品貯備液1，2，3 mL各2份，分別裝入50 mL容量瓶中，加入已知質(zhì)量濃度的供試品溶液10 mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件及測定方法分別測定。結(jié)果見表2。

表2 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4.4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各15 μL，注入色譜儀，按擬訂的色譜條件及測定方法分別測定，計(jì)算芍藥苷含量。

2.5 正交試驗(yàn)

杜仲片中桃仁、赤芍采用煎煮法提取有效成分，以加水量(因素A)、提取時(shí)間(因素B)、提取次數(shù)(因素C)為3個(gè)主要因素，采用 L9(34)設(shè)計(jì)試驗(yàn)表安排試驗(yàn)，以干浸膏收率、芍藥苷提取量為考察指標(biāo)，結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。方差分析結(jié)果表明，影響因素主次順序?yàn)锳＞C＞B。結(jié)合直觀分析與生產(chǎn)實(shí)際，確定最優(yōu)提取工藝條件為A3B3C2，即加水量(因素A)12倍、提取時(shí)間(因素B)2 h、提取次數(shù)(因素C)2次。

表3 優(yōu)選提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例稱取桃仁、赤芍共計(jì)157.8 g，按最佳工藝條件進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果3批供試品干浸膏收率分別是12.35%，12.31%，12.37%，芍藥苷提取量分別是 464.55，463.93，466.83 mg。結(jié)果表明，正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝優(yōu)于試驗(yàn)中各次試驗(yàn)工藝，可作為桃仁及赤芍提取的最佳工藝。

表4 優(yōu)選提取工藝方差分析結(jié)果

3 討論

在考察樣品藥材的提取工藝過程中，預(yù)試驗(yàn)篩選了加水量的考察范圍是 8，10，12 倍藥材量，提取次數(shù)為 1，2，3 次。因?yàn)樗幉闹杏行С煞值娜艹鲞_(dá)到飽和時(shí)，已不再受加水量、提取次數(shù)的影響，故不需無限制加大加水量和提取次數(shù)。赤芍在處方中用量較大，其中芍藥苷在藥材中含量亦較高且性質(zhì)穩(wěn)定，故選用芍藥苷含量作為制劑提取工藝篩選控制指標(biāo)?？偣腆w是中藥制劑發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，在活性物質(zhì)基礎(chǔ)未知的情況，并不是總固體越少越好，因此以干浸膏得率作為篩選提取工藝的一個(gè)指標(biāo)。

[1]陳 云.正交試驗(yàn)法優(yōu)選芪參咀嚼片藥材提取工藝[J].中國藥業(yè)，2011，8(15):33 －34.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:147－148.

[3]夏建洪，馮桂英.高效液相色譜法測定雙黃口服液中芍藥苷和黃芩苷含量[J].中國藥業(yè)，2010，19(23):32 －33.