補(bǔ)氣類中藥對(duì)大鼠胃潰瘍EGFR、bFGFR蛋白表達(dá)的影響1）

李廷荃，化金鳳，索 煒，賈力莉

消化性潰瘍是臨床常見病、多發(fā)病，具有慢性、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，潰瘍的復(fù)發(fā)與潰瘍愈合質(zhì)量有關(guān)，潰瘍愈合質(zhì)量又與潰瘍邊緣表皮生長(zhǎng)因子（EGFR）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）及其受體表達(dá)有關(guān)[1]。中醫(yī)認(rèn)為補(bǔ)氣類中藥能托瘡生肌，鼓舞氣血生長(zhǎng)，常用于潰瘍久潰不斂，具有生肌長(zhǎng)肉，促進(jìn)組織修復(fù)的作用，與EGFR、bFGF在潰瘍愈合過(guò)程中的作用相似。本研究觀察人參、太子參對(duì)大鼠胃潰瘍愈合過(guò)程中EGFR、bFGFR表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組，即正常組、模型組、人參組、太子參組、洛賽克組，每組12只。

1.1.2 藥物 灌胃藥物均采用山西省中醫(yī)院中藥房免煎劑。江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 主要試劑 EGFR、bFGFR免疫組化試劑盒，武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.2 造模與藥物干預(yù) 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組，除正常組外，其余各組采用Okabe乙酸涂抹法制作大鼠胃潰瘍模型[2]。術(shù)后當(dāng)日給大鼠自由飲水，次日開始自由飲食。在造模結(jié)束后24h，人參組、太子參組均以5g／kg給藥，洛賽克組20 mg／kg給藥，模型組、正常組灌服生理鹽水。各組給藥量為10 ml／kg，每日1次。

1.3 檢測(cè)項(xiàng)目與方法

1.3.1 取材 以上動(dòng)物在藥物干預(yù)后14d、21d，從各組中隨機(jī)取出6只，以3%的戊巴比妥鈉麻醉后（之前大鼠禁食24h），剖腹取胃，沿胃大彎剪開，以生理鹽水洗凈后，放置在冰袋上的器皿中。留取距潰瘍邊緣（2～3）mm胃組織，沿經(jīng)潰瘍中心最長(zhǎng)軸中點(diǎn)縱切；若無(wú)潰瘍，則在相同部位，即胃小彎角切跡下方約5mm處切取1cm×1cm大小的胃組織。迅速浸入4%多聚甲醛中固定。進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，用AIWA切片機(jī)切取4μm切片，用于免疫組化、病理組織學(xué)檢查。

1.3.2 觀察潰瘍發(fā)生情況 HE染色觀測(cè)病理組織，免疫組化法檢測(cè)胃黏膜EGFR、bFGFR蛋白的表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間兩兩比較采用LSD法。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠潰瘍愈合情況（見表1）

表1 各組潰瘍發(fā)生數(shù)比較 例

2.2 大鼠胃潰瘍組織學(xué)變化 術(shù)后14d，空白組大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，未見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組見明顯潰瘍，可見大量壞死組織，肌層纖維結(jié)構(gòu)不清，固有層大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張；人參組、太子參組潰瘍較輕，固有層、黏膜肌層可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜肌層水腫較輕，中度血管擴(kuò)張，潰瘍底部見有肉芽組織和瘢痕形成，黏膜肌層增厚，新生血管較豐富；洛賽克組潰瘍程度也較輕，仍有大量炎細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，微血管較少。術(shù)后21d，模型組2例明顯潰瘍，固有層和黏膜層仍有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，固有層血管擴(kuò)張明顯，黏膜上皮脫落，其中人參組、太子參組潰瘍愈合較佳，洛賽克組潰瘍也愈合，但固有層、黏膜肌層仍有少量炎細(xì)胞中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.3 胃黏膜EGFR、bFGFR蛋白的表達(dá) 術(shù)后14d，正常組EGFR和bFGFR略有表達(dá)，但明顯低于其他組別（P＜0.05），人參組、太子參組EGFR表達(dá)比例高于模型組（P＜0.05），洛賽克組EGFR和bFGF表達(dá)比例明顯無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 術(shù)后14dEGFR、bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞及染色結(jié)果（±s）%

表2 術(shù)后14dEGFR、bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞及染色結(jié)果（±s）%

組別 n EGFR陽(yáng)性細(xì)胞（%） 染色度bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞比例（%） 染色度空白 6 17.00±6.71＋ 16.00±6.52 －模型組 6 23.00±2.742） ＋＋ 35.00±25.25 ＋＋＋人參組 6 64.00±28.811） ＋＋ 18.00±4.47 ＋太子參組 6 74.00±35.781） ＋＋ 14.00±5.48 ＋洛賽克組 6 16.00±5.482） ＋ 14.00±5.48 ＋與模型組比較，1）P＜0.05；與太子參組比較，2）P＜0.05注：－為無(wú)色，＋為淺黃色，＋＋為棕黃色，＋＋＋為棕褐色。

術(shù)后21d，空白組EGFR和bFGF略有表達(dá)，但明顯低于其他組別（P＜0.0 5），模型組EGFR和bFGF表達(dá)上升（P＜0.05），人參組、太子參組EGFR表達(dá)與14d比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，bFGFR表達(dá)與14d比較明顯升高（P＜0.05），洛賽克EGFR和bFGFR明顯低于中藥組（P＜0.05），各組間EGFR和bFGF表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表3。

表3 術(shù)后21dEGFR、bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞及染色結(jié)果（±s） %

表3 術(shù)后21dEGFR、bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞及染色結(jié)果（±s） %

組別 n EGFR陽(yáng)性細(xì)胞（%） 染色度bFGFR陽(yáng)性細(xì)胞比例（%） 染色度空白 6 18.00±4.471） ＋ 16.00±5.481） ＋模型組 6 86.50±8.94 ＋＋＋ 76.00±31.30 ＋＋＋人參組 6 90.00±0.00 ＋＋＋ 74.00±8.94 ＋＋太子參組 6 90.00±0.00 ＋＋ 80.00±17.32 ＋＋洛賽克組 6 23.00±20.491） ＋ 29.00±29.241） ＋與模型組比較，1）P＜0.05注：－為無(wú)色，＋為淺黃色，＋＋為棕黃色，＋＋＋為棕褐色。

3 討 論

胃潰瘍屬中醫(yī)“胃脘痛”、“痞證”、“吐酸”范疇。其發(fā)生多因飲食不節(jié)、情志不暢及外感六淫，導(dǎo)致臟腑氣機(jī)失調(diào)，經(jīng)脈不通，局部組織失養(yǎng)，與邪毒、瘀血有關(guān)。本病以脾虛為主，胃熱為標(biāo)，虛實(shí)并見，寒熱錯(cuò)雜為主要病理特征，治療以理氣健脾治其本，清熱活血化瘀治其標(biāo)[3]。中醫(yī)理論認(rèn)為補(bǔ)氣藥可以健脾益氣，托瘡生肌，鼓舞氣血生長(zhǎng)，促進(jìn)組織修復(fù)，常用于潰瘍久潰不斂，與EGFR、bFGF在潰瘍愈合過(guò)程中的作用相似，研究資料表明[4]，EGFR主要促進(jìn)潰瘍邊緣的黏膜上皮成分發(fā)生變化，上皮細(xì)胞失去分化能力，發(fā)生增殖，移行到肉芽組織表面，覆蓋潰瘍底部，促進(jìn)潰瘍愈合；而bFGF則主要促進(jìn)肉芽組織不斷更新、改構(gòu)、修復(fù)，肉芽組織為固有膜層的修復(fù)提供結(jié)締組織，為微血管網(wǎng)的修復(fù)提供微血管網(wǎng)，肉芽組織中的血管形成建立了毛細(xì)血管網(wǎng)，有利于物質(zhì)、氧、激素、生長(zhǎng)因子等運(yùn)送到潰瘍底層，另外血管重構(gòu)是損傷區(qū)域胃腺體重建的前提，因而它在創(chuàng)面愈合和組織再生過(guò)程中起決定作用。

人參組、太子參組早期促進(jìn)EGFR表達(dá)為主，后期bFGFR表達(dá)亦增加，洛賽克和中藥組都可促進(jìn)大鼠胃潰瘍愈合，但洛賽克對(duì)大鼠胃潰瘍組織愈合的組織學(xué)程度不同，對(duì)EGFR和bFGF表達(dá)不顯著。本實(shí)驗(yàn)正常胃黏膜中有少量EGFR和bFGFR表達(dá)，胃潰瘍時(shí)表達(dá)顯著增加，且中藥組能夠增強(qiáng)它的表達(dá)，人參組、太子參組，早期促進(jìn)EGFR表達(dá)為主，使?jié)冞吘壍酿つど掀こ煞职l(fā)生變化，發(fā)生增殖，移行到肉芽組織表面，覆蓋潰瘍底部，促進(jìn)潰瘍愈合，后期隨著大鼠自愈過(guò)程，模型組也表達(dá)增加，但其發(fā)生較遲，潰瘍愈合也較晚，此時(shí)人參組、太子參組EGFR表達(dá)仍高、bFGFR表達(dá)也逐漸增加，更加速創(chuàng)面愈合和組織再生。洛賽克組各時(shí)點(diǎn)EGFR和bFGFR表達(dá)較低，這可能和其治療胃潰瘍的機(jī)制有關(guān)，而且潰瘍愈合與中藥組比較仍存在組織學(xué)差異?？赡苁菍?dǎo)致臨床復(fù)發(fā)率較高的原因。

[1]Tarnawski A，Stachura J，Durbin T，et al.Increased expression of epidermal growth factor receptor during gastric ulcer healing in rats[J].Gastroenterology，1992，102（2）：695－698.

[2]Okabe S，Roth JL，Pfeiffer CJ.A method for experimental，penetrating gastric and duodenal ulcers in rats[J].Am J Dig，1971，16（3）：277－284.

[3]張敏.益氣活血方對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的作用及作用機(jī)制的研究[D].呼和浩特：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院，2009.

[4]李廷荃，馬貴同.補(bǔ)氣活血中藥對(duì)大鼠胃潰瘍愈合過(guò)程中EGFR、bFGFR 蛋白表達(dá)的影響[J].上海中醫(yī)藥雜志，2008：42（7）：78－80.