輻照對地塞米松磷酸鈉注射液含量影響的考察

宋宏宇，盧 華，管海燕，藕順龍 ，盧來春

(1.中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所，重慶 400042;2.山東省即墨市中醫(yī)院，山東 青島 266000)

60Co放射源自20世紀50年代以來應用非常廣泛，遍及農(nóng) 業(yè)、工業(yè)、醫(yī)學，醫(yī)學上多用于皮膚疾病以及癌癥、腫瘤的放射治療、血液輻照[1-2]。60Co屬于高毒性核素，具有極強的輻射性，能導致人體及物質(zhì)的嚴重損害[3-5]。近年來核泄漏事件頻發(fā)，核危害波及地區(qū)受災嚴重。這一情況提示，考察核輻射下急救藥品的穩(wěn)定性極為迫切。因此筆者選擇地塞米松磷酸鈉注射劑為模型藥物，以含量為主要指標對其吸收不同輻照劑量后的變化進行初步考察[6]，為輻照條件下該藥品的存貯及使用安全提供參考。地塞米松磷酸鈉主要用于過敏性與自身免疫性炎癥性疾病，多用于紅斑狼瘡、嚴重支氣管哮喘、嚴重皮炎、潰瘍性結(jié)腸炎、急性白血病等，也用于某些嚴重感染及中毒、惡性淋巴瘤的綜合治療，為我國災情、疫情等突發(fā)事故發(fā)生后的常備藥物及疾病發(fā)生時的急救藥物，近年來對其穩(wěn)定性及配伍穩(wěn)定性的關(guān)注日益增多[7]。

1 儀器與試藥

輻照設(shè)備(60Co-γ射線，第三軍醫(yī)大學輻照研究中心提供);色譜儀為Agilent Technologies 1200 series HPLC(美國安捷倫公司);Sartorius BT 124S型電子分析天平(德國賽多利斯公司)。地塞米松磷酸鈉對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為10016-200812，含量為90.3%);地塞米松磷酸鈉注射劑(上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格為5 mL∶0.1 g，批號為100807);甲醇(色譜純，安徽時聯(lián)特種溶劑股份有限公司);磷酸、三乙胺(分析純，成都市科龍化工試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[8-10]:色譜柱為Diamonsil-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，流動相為 0.75% 三乙胺(磷酸調(diào)節(jié) pH至3.0)-甲醇(25∶75)，檢測波長為280 nm，柱溫為30℃，流速為 1.0 mL/min，進樣量 20 μL。在此色譜條件下，色譜圖見圖 1?？梢姡谠撋V條件下主藥地塞米松磷酸鈉在5 min左右出峰，能與注射劑中輔料較好地分離，說明含量測定不受輔料干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取地塞米松磷酸鈉對照品，加流動相溶解，并稀釋至質(zhì)量濃度為 5.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μg/mL，分別進樣20 μL，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標作線性回歸，得回歸方程 A=31.883 8C-17.847 8，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，地塞米松磷酸鈉質(zhì)量濃度在5.0～12.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

日內(nèi)精密度考察:配制低、中、高(6，8，10 μg/mL)3 個質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液各3份。按2.1項下色譜條件，分別進樣測定含量。結(jié)果見表1，表明方法日內(nèi)精密度好。

表1 日內(nèi)精密度考察結(jié)果(n=3)

日間精密度與穩(wěn)定性考察:配制低、中、高(6，8，10 μg/mL)3個質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液，密封避光于4℃保存。按2.1項下色譜條件，同一溶液于3 d內(nèi)進樣測定含量。結(jié)果見表2，表明日間精密度較好，且3 d內(nèi)地塞米松磷酸鈉穩(wěn)定性較好。

表2 日間精密度及穩(wěn)定性考察(n=3)

回收率試驗:配制為6，8，10 μg/mL 3個質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液，每個質(zhì)量濃度平行配制3份，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積，計算回收率。結(jié)果見表3，表明方法準確度較好。

表3 回收率試驗結(jié)果(n=3)

2.2 輻照處理

以2010年版《中國藥典(一部)》藥品常用輻射滅菌吸收劑量25 kGy為最大輻射吸收劑量[10]，取同一批號樣品，分為6組，分別在60Co-γ 射線放射源中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy的輻照劑量后取出，待含量測定用。

2.3 輻照處理后外觀及澄明度考察

吸收不同強度輻照劑量與未接受輻照處理的樣品外觀見圖2。可見，樣品吸收不同劑量后澄明度沒有變化，外觀顏色隨吸收劑量增加而加深，但4 kGy以下顏色變化不明顯。

圖2 不同強度輻照后地塞米松磷酸鈉注射液外觀

2.4 不同強度輻照后樣品含量測定

含量測定:取輻照前及輻照后的樣品，以流動相配制理論質(zhì)量濃度約為10 μg/mL的待測溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積，計算含量，結(jié)果見表4?？梢?，隨著輻照強度的增加，地塞米松磷酸鈉含量逐漸降低，一次性吸收8，16，25 kGy輻照劑量后含量下降較明顯;吸收8 kGy輻照劑量的樣品放置4個月后含量變化不明顯。

輻照后含量變化趨勢:將表4中一次性吸收不同輻照劑量的數(shù)據(jù)以輻照強度(X)為橫坐標、質(zhì)量濃度(Y)為縱坐標在Excel上作圖，得回歸方程 Y=-0.083 X+10.14，r=0.989 4(n=6)。具體見圖3。

表4 輻照后樣品含量變化(μg/mL，n=3)

圖3 輻照強度與藥物質(zhì)量濃度的關(guān)系

數(shù)據(jù)統(tǒng)計:采用SPSS軟件，以未輻照(吸收0 kGy)與吸收不同輻照劑量的樣品含量測定結(jié)果進行獨立樣本的 t檢驗，結(jié)果見表5?？梢?，樣品輻照前與吸收不同輻照劑量后比較，含量逐漸減少，且含量變化具有極顯著性統(tǒng)計學差異。

表5 t檢驗結(jié)果

3 討論

測定地塞米松磷酸鈉含量時，與2010年版《中國藥典(二部)》地塞米松磷酸鈉含量測定方法中的流動相0.75%三乙胺(磷酸調(diào)節(jié) pH 至 3.0±0.05)-甲醇 -乙腈(55 ∶40 ∶5)比較，僅將乙腈省去，且仍采用242 nm為檢測波長(雖然242 nm不是該條件下的最大吸收波長，但不影響測定靈敏度)。方法學考察表明，采用此方法測定，地塞米松磷酸鈉與注射劑中其余輔料成分能較好分離，方法精密度、準確度均較好，且節(jié)省試劑，可有效降低檢測成本。

樣品吸收不同強度的輻照劑量后，主藥含量隨吸收輻照劑量的增加而下降，且下降趨勢具有一定的線性特征。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果可知，輻照對樣品含量具有顯著影響，但吸收4 kGy輻照劑量藥物含量下降至96.31%;吸收8 kGy輻照劑量后含量下降至88.30%，放置4個月后含量為87.74%。當吸收4 kGy及以下輻照劑量藥物含量雖有所下降，但仍在標示量的90% ～110%之內(nèi)[10]。因此，含量變化雖然有顯著性差異，但仍在注射劑質(zhì)量合格范圍內(nèi)。初步認為，吸收小于4 kGy的輻照劑量，對地塞米松磷酸鈉注射液含量沒有顯著影響。

本試驗增加了將8 kGy輻照處理后的樣品放置4個月并進行含量測定，目的是考察輻照后效應。計算知吸收8 kGy輻照劑量后即刻含量為88.30%，放置4個月后含量為87.74%，是放置前含量的99.4%，含量降低在方法回收率的可控范圍內(nèi)。初步認為，一次性吸收一定輻照劑量后樣品放置過程中的含量沒有變化，可繼續(xù)放置并考察輻照對藥物的含量影響。

綜合上述結(jié)果，結(jié)合輻照前后樣品色譜圖(圖1B及C)、外觀(圖2)可知，在藥典規(guī)定的最大滅菌輻照劑量范圍內(nèi)，采用60Co所產(chǎn)生的γ射線一次性照射地塞米松磷酸鈉注射液，其外觀及澄明度無明顯變化，但隨著輻照劑量的增加其含量降低趨勢顯著。且輻照后色譜圖與輻照前相比主峰后出現(xiàn)了未知雜質(zhì)峰，說明經(jīng)射線輻照的注射液中可能合成、降解生成了新的物質(zhì)，尚待進一步研究。另外，輻照后制劑的藥效、毒理是否變化仍需深入研究。

[1]楊水芝，戚煥江，謝 彤.提高60Co輻照裝置的經(jīng)濟效益探討[J].核農(nóng)學報，2006，20(1):57-59.

[2]祝 青，刁慶春，白 晉，等.聚焦超聲輻照豚鼠慢性濕疹模型的實驗研究[J].中國超聲醫(yī)學雜志，2008，24(7):594.

[3]鄭美揚，金國華，沈根芳.60Co輻照室環(huán)境放射防護評價[J].核電子學與探測技術(shù)，2010，30(9):1 224-1 226.

[4]張世才，李奉勤，史冬霞，等.輻照滅菌在中藥方面的應用研究進展[J].中國藥業(yè)，2009，18(20):76-77.

[5]周忠東，丁關(guān)生，王鐵烽.活絡(luò)除痹散的鈷-60輻照滅菌效果考察[J].中國藥業(yè)，2008，17(10):68.

[6]徐 靖，盧 華，管海燕，等.輻照對呋塞米注射液含量的影響考察[J].中國藥房，2012，2(5):440-442.

[7]趙 奎.地塞米松磷酸鈉注射液在急診應用的處方分析[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2011，11(5):475-476.

[8]楊 青，郭炎榮，陳 英，等.HPLC法同時測定復方白氟膜劑中鹽酸麻黃堿和地塞米松磷酸鈉的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16(3):29-31.

[9]王國蘭，寇晉萍，王俊秋，等.反相HPLC法同時測定復方氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星和地塞米松磷酸鈉的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥品標準，2010，11(3):195-198.

[10]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:250-251，附錄191.