四逆湯及其組分配伍對心力衰竭大鼠血流動力學(xué)的影響1）

翟建英，靳 冉，朱曉光，張思玉，張廣平

心力衰竭（HF）是各種心臟病發(fā)展的終末階段，也是導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一。隨著社會老齡化以及高血壓、冠心病、糖尿病、肥胖等心血管危險因素和基礎(chǔ)疾病的增加，HF發(fā)病率也呈上升趨勢[1]。中醫(yī)治療HF歷史悠久，在中醫(yī)古籍中多有類似記載。如《傷寒論》中的少陰病寒化證與HF的某些臨床表現(xiàn)相類似，后世也常用經(jīng)方作為治療HF的基本方，其中以四逆湯為代表[2]。本研究制作大鼠HF模型，并采用四逆湯全方及其不同組分配伍進(jìn)行干預(yù)，觀察大鼠心功能的變化，旨在從方劑配伍角度揭示中醫(yī)經(jīng)方治療HF的藥理作用，并為深入認(rèn)識方劑配伍的藥效變化規(guī)律提供實驗參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠，體重200g～250g，購于中國藥品生物制品檢定所實驗動物資源中心，合格證號：SCXK（京）2009－0017。

1.2 實驗主要儀器 16道生理記錄儀（美國BIOPAC公司）、Millar導(dǎo)管（型號：SPR－320，美國 MILLAR INSTRUMENTS.INC公司）。

1.3 實驗藥物與試劑 鹽酸阿霉素（批號：1004E1）購自深圳萬樂藥業(yè)有限公司，附子（黑順片 批號：0905058）購自四川新荷花中藥飲片有限公司，甘草（炙甘草 批號：0905200）購自北京人衛(wèi)中藥飲片廠，干姜（批號：10010606）購自北京人衛(wèi)中藥飲片廠，地高辛（批號：091104）購自上海信誼藥廠有限公司。

1.4 藥物制備 各組中藥飲片分別加10倍量水浸泡45min，水沸騰后第1次煎煮30min，第2次加6倍量水，水沸后煎煮30 min。4層紗布過濾，合并2次煎液，將濾液水?。?0℃）濃縮，所得生藥含量如下：附子相當(dāng)于1.43g生藥／mL，附子配甘草 （5∶2）相當(dāng)于0.76g生藥／mL，附子配干姜（5∶3）相當(dāng)于3.33g生藥／mL，四逆湯（附子∶干姜∶甘草＝5∶3∶2）相當(dāng)于1.58g生藥／mL。上述各藥制備完成后，置4℃冰箱冷藏保存。給藥前附子、附子配干姜、附子配甘草及四逆湯組均用蒸餾水稀釋到附子含量為0.34g生藥／mL；地高辛也用蒸餾水稀釋到0.003 7mg／mL備用。

1.5 動物模型制備與分組方法 大鼠隨機(jī)分為7組：正常組、模型組、地高辛組、附子組、附子配干姜組、附子配甘草組、四逆湯全方組。參照文獻(xiàn)[3]制作HF大鼠模型，正常組尾靜脈注射生理鹽水，其余各組尾靜脈注射鹽酸阿霉素4mg／kg，共計3次，每5d1次，即在第1天、第6天和第11天造模。造模同時開始灌胃給藥，體積為10mL／kg，正常組和模型組給予相同體積蒸餾水。

1.6 心功能檢測方法 各組均在第12天給藥后1h進(jìn)行心室內(nèi)插管檢測大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)。大鼠經(jīng)烏拉坦1g／kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動脈2cm左右，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，近心端用動脈夾暫時夾閉，在結(jié)扎線下方，用眼科剪剪一小斜口，將Millar導(dǎo)管由動脈壁切口向心臟方向緩慢推入左心室，固定導(dǎo)管，連接16道生理記錄儀，測定左室收縮壓（LVSP）、左室舒張末期壓力（LVEDP）、左心室內(nèi)壓最大上升速率（＋dp／dtmax）和左心室內(nèi)壓最大下降速率（－dp／dtmin）。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，先行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布采用單因素方差分析，不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠心率比較 與正常組比較，模型組心率減慢（P＜0.01）。與模型組比較，地高辛組、四逆湯組、附子配干姜組和附子配甘草組大鼠心率均顯著增快（P＜0.0 5或P＜0.01）。詳見表1。

表1 各組大鼠心率比較（±s） 次／min

表1 各組大鼠心率比較（±s） 次／min

組別 n 心率正常組7 422.85±33.61模型組 7 337.40±100.091）地高辛組 7 436.63±49.313）四逆湯組 7 448.65±26.493）附子組 7 354.92±37.52附子配干姜組 7 430.89±33.623）附子配甘草組 7 406.45±43.562）與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

2.2 各組大鼠左心室內(nèi)壓比較 與正常組比較，模型組LVSP顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，地高辛組、四逆湯組和附子配干姜組LVSP均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。各組間LVEDP無明顯差異。詳見表2。

表2 各組大鼠左心室內(nèi)壓的比較（±s） mmHg

表2 各組大鼠左心室內(nèi)壓的比較（±s） mmHg

組別 n LVSP LVEDP正常組7 120.72±15.05 －4.66±2.93模型組 7 91.96±24.621） －1.94±4.86地高辛組 7 116.60±9.802） －4.23±1.12四逆湯 7 125.89±21.583） －4.78±0.58附子組 7 96.84±22.92 －5.05±28.65附子配伍干姜組 7 118.95±12.183） －4.63±0.69附子配伍甘草組 7 105.45±12.85 －4.03±1.67與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

2.3 各組大鼠左心室內(nèi)壓最大變化速率的比較 與正常組比較，模型組＋dp／dtmax、－dp／dtmin（絕對值）顯著降低（P＜0.01），提示模型組心肌舒縮性能明顯下降。與模型組比較，地高辛組、四逆湯組和附子配干姜組＋dp／dtmax顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），地高辛組和四逆湯組－dp／dtmin（絕對值）顯著升高（P＜0.01）。詳見表3。

表3 各組大鼠左心室內(nèi)壓最大變化速率的比較（±s）

表3 各組大鼠左心室內(nèi)壓最大變化速率的比較（±s）

組別 n ＋dp／dtmax －dp／dtmin正常組 7 11 866.64±3 458.98 －9 122.89±3 626.54模型組 7 5 626.62±2 478.561） －4 615.76±1 958.481）地高辛組 7 9 952.86±2 248.093） －7 483.29±1 602.123）四逆湯組 7 11 701.92±4 467.093） －7 704.77±1 203.363）附子組 7 7 023.13±1 816.24 －4 093.27±2 091.67附子配伍干姜 7 9 530.00±1 516.462） －6 587.84±891.62附子配伍甘草 7 8 086.76±2 305.11 －5 815.78±757.22與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

3 討 論

HF是一個世界性的公共衛(wèi)生問題。在美國約有580萬HF患者，每年的花費超過39億美元，給公共衛(wèi)生系統(tǒng)帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時也嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，每年的住院率和再住院率居高不下，超過100萬的HF患者的住院次數(shù)多于300萬人次[4]。除高發(fā)病率外，高死亡率是HF的另一個流行病學(xué)特點，HF的5年死亡率與癌癥相當(dāng)[5]。因此，防治HF無論對于個人、家庭和社會都具有重要意義。

祖國醫(yī)學(xué)擅長辨證論治，在HF的治療上發(fā)揮了積極作用，能夠有效緩解臨床癥狀，控制病情進(jìn)展，提高患者生存質(zhì)量[6]。HF屬中醫(yī)學(xué)的“心悸”、“胸痹”、“喘證”、“水腫”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為心腎陽虛是HF的重要病機(jī)[7]。心病日久，心陽不足，血運無力，腎陽虛衰，水液不化，出現(xiàn)喘息心悸，不能平臥，咳吐痰涎，水腫少尿等一系列臨床表現(xiàn)，甚則脈微欲絕，四肢厥逆。上述癥狀與《傷寒論》中記載的少陰病寒化證相似，心、腎兩臟同屬少陰，心腎陽虛是少陰病寒化證的基本病機(jī)。可見HF與少陰病的臨床癥狀和體征相似，中醫(yī)病機(jī)相通。四逆湯是《傷寒論·少陰病篇》中治療少陰病寒化證的代表方，并且現(xiàn)代研究表明四逆湯及其基礎(chǔ)上的加減化裁方劑能夠緩解HF患者的癥狀，臨床療效顯著[8－11]。因此，研究四逆湯的抗HF作用具有臨床實用價值。

中醫(yī)的方劑配伍講究君臣佐使，各司其用?！蹲C治要訣》云：“附子無干姜不熱，得甘草則性緩”。四逆湯中附子大辛大熱，上助心陽以通脈，下補腎陽而破陰，為“回陽救逆第一品藥”；干姜溫中散寒，回陽通脈，與附子相配一走一守，氣味雄厚，扶腎陽而破陰；炙甘草性溫而補，補脾胃而調(diào)諸藥，且可緩姜附燥烈辛散之性，使其破陰復(fù)陽而無暴散之虞[12，13]。三藥功專效宏，可速達(dá)回陽之效。中醫(yī)先賢對四逆湯組方的理論闡釋和藥性特點總結(jié)深入而精辟，但是在中醫(yī)藥現(xiàn)代化的背景下，經(jīng)方的組分配伍規(guī)律尚需更多的實驗依據(jù)加以證實。因此，本研究通過觀察四逆湯全方及其不同組分配伍對HF大鼠模型心功能的影響，希望為深入認(rèn)識中醫(yī)方劑配伍的藥效變化規(guī)律提供實驗依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組心率大幅降低（P＜0.01），地高辛組、四逆湯組、附子配干姜組和附子配甘草組大鼠的心率較模型組明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。心率的變化能夠間接反映心臟功能，以上結(jié)果提示四逆湯及其不同組分配伍均有類似地高辛的強(qiáng)心作用。在血流動力學(xué)方面，LVSP、＋dp／dtmax和－dp／dtmin是評價心臟收縮和舒張功能的常見指標(biāo)。與正常組比較，模型組大鼠的LVSP、＋dp／dtmax和－dp／dtmin顯著降低（P＜0.01）；四逆湯組和地高辛組的上述3個指標(biāo)較模型組明顯提高（P＜0.05或P＜0.01）；附子配干姜組的LVSP和＋dp／dtmax明顯提高（P＜0.05或P＜0.01）；而附子配甘草組僅有增高趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明四逆湯和地高辛能夠顯著提高HF大鼠心臟的收縮和舒張功能，附子配干姜能部分改善血流動力學(xué)指標(biāo)，附子配甘草的強(qiáng)心作用較弱，單用附子的作用最弱。

綜上所述，四逆湯及其組分配伍能夠不同程度地改善HF大鼠的心功能，其中四逆湯全方的強(qiáng)心作用與地高辛相當(dāng)，附子配干姜能部分改善HF大鼠的血流動力學(xué)指標(biāo)，附子配甘草的作用較弱，單用附子的作用最弱。本研究證實單純配伍甘草和干姜能夠部分增強(qiáng)附子的強(qiáng)心作用，而三藥合用后對HF大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)的改善作用全面而且顯著。本研究為配伍增效和臨床更好的應(yīng)用四逆湯治療HF提供了實驗依據(jù)。

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