自擬康腎口服液對大鼠慶大霉素急性腎損傷模型的影響

趙京生，易偉國

康腎口服液由人參、生黃芪、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、懷山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實(shí)、甘草等組成，具有益氣溫陽，固本澀精，活血通絡(luò)之功，用于慢性腎炎、腎病綜合征、陽痿早泄等治療。為探究療效原理筆者對慶大霉素誘發(fā)大鼠急性腎損傷模型的影響進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。室提供，批號20110425；尿毒清顆粒，山康辰藥業(yè)（內(nèi)蒙古）有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號20110114；呋塞咪片，天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號1101008；氯化鈉注射液，河南太龍藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號11082465；硫酸慶大霉素注射液，河南輔仁懷慶堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號1108301；甲醛溶液（分析純），煙臺市雙雙化工有限公司生產(chǎn)，批號20110310；冰乙酸（分析純），天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司生產(chǎn)，批號20110113；肌酐（Cr）試

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品 康腎口服液由解放軍第371醫(yī)院制劑劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20111223；尿素氮（BUN）試劑盒（脲酶法），南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20111223；尿蛋白定量試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20120109；尿 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)（ELISA）試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20111201B；考馬斯亮蘭試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20111227；SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20120105；丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20111227。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 大鼠，清潔級，Wistar，河北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號1112128。

1.3 儀器 UV－2000紫外可見分光光度計(jì)，尤尼柯 （上海）儀器有限公司；酶標(biāo)儀，680Microplate Reader，Bio-Rad Laboratories；TGL-16G 臺 式 離 心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；DY89-1型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技有限公司；可調(diào)式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 取清潔級雄性Wistar大鼠84只，隨機(jī)均勻分為7組，12只/組；其中1組為空白對照組，其余6組造慶大霉素急性腎損傷模型。造模型6組大鼠分別于每天上午腹腔注射硫酸慶大霉素注射液140 mg/kg造模（1 ml/100 g），下午分別灌服大、中、小劑量康腎口服液（20 ml原藥液/kg、10 ml原藥液/kg、5 ml原藥液/kg，原藥液、生理鹽水稀釋1倍、生理鹽水稀釋2倍，2 ml/100 g）、尿毒清顆粒混懸液（4.2 g/kg，用生理鹽水配成 0.21 g/ml，2 ml/100 g）、呋塞咪片混懸液（6.6 mg/kg，用生理鹽水配成0.33 mg/ml，2 ml/100 g）和同體積的生理鹽水（2 ml/100 g）；空白對照組腹腔注射等體積生理鹽水和灌服同體積生理鹽水。每天上午造模型、下午灌服相應(yīng)藥物，連續(xù)用藥7 d。于第7天造模后灌服相應(yīng)藥物，于給藥后1 h將大鼠放入代謝籠中收取24 h尿液，按試劑盒說明書測尿肌酐、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）；第8天大鼠眶靜脈采血，分別測血肌酐、尿素氮；然后處死大鼠，迅速開腹取兩側(cè)全腎，用濾紙吸干腎表面血液后稱重；取右腎臟制成10%的勻漿，按試劑盒說明書測SOD、MDA水平；左腎用10%甲醛固定，切片，鏡檢。

1.5 測定項(xiàng)目 腎系數(shù)的測定：將大鼠處死后，迅速開腹取兩側(cè)全腎，用濾紙吸干腎表面血液后稱重，腎系數(shù)=兩側(cè)腎質(zhì)重和（g）/體質(zhì)重（kg）×100%。

血、尿標(biāo)本測定：血肌酐（除蛋白法）、尿素氮及尿肌酐（除蛋白法）由紫外分光光度計(jì)完成，尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)由酶標(biāo)儀完成。嚴(yán)格按說明書操作。

腎皮質(zhì)勻漿測定：超氧化物歧化酶（SOD）（羥胺法），丙二醛（MDA）（TBA法）。采用南京建成生物工程研究所試劑盒。嚴(yán)格按說明書操作。

腎組織形態(tài)學(xué)檢測：腎組織標(biāo)本用10%甲醛固定，石蠟包埋，切成3 μm厚的切片，分別做HE染色，以做光學(xué)顯微鏡檢查。

計(jì)算公式：

蛋白含量（g/L）=測定管OD值-空白管OD值標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值×標(biāo)準(zhǔn)管濃度（g/L）

表 1 各組大鼠腎指數(shù)及尿蛋白總量（±s）

表 1 各組大鼠腎指數(shù)及尿蛋白總量（±s）

注：與模型組比，#P<0.01

組別 n 劑量（ml原藥液/kg） 腎指數(shù)（g/100 g） 尿蛋白總量（mg/L）空白對照組 12 0.799±0.040# 616.3±144.0#模型組 11 1.200±0.030 1702.8±140.3呋塞米片組 11 6.6 mg 1.100±0.098# 1373.6±241.1#尿毒清顆粒組 12 4.2 g 1.030±0.081# 1373.0±188.9#大劑量腎康口服液組 12 20 1.079±0.089# 1533.0±175.8#中劑量腎康口服液組 12 10 1.028±0.085# 1589.4±129.6#小劑量腎康口服液組 12 5 1.029±0.068# 1513.6±175.1#

2 結(jié)果

從表1可看出，與空白對照組比，模型組腎指數(shù)及尿蛋白總量均顯著增加（P<0.01），說明造慶大霉素大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中、小劑量康腎口服液組、呋塞咪片組和尿毒清顆粒組均可顯著降低腎指數(shù)（P<0.01），均可顯著降低尿蛋白總量（P<0.01）；以中、小劑量康腎口服液組對腎指數(shù)的降低作用為好，以小劑量康腎口服液組對尿蛋白總量的降低作用為好。

從表2可看出，與空白對照組比，模型組血肌酐、尿素氮均顯著增高（P<0.01），尿肌酐顯著減少（P<0.01），說明造慶大霉素性大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中、小劑量腎康口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血肌酐（P<0.01）；小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降低尿肌酐 （P<0.01），中劑量康腎口服液組可明顯降低尿肌酐（P<0.05）；各給藥組均有降低尿肌酐的趨勢（P<0.05）；以中、小劑量康腎口服液組對血肌酐、尿素氮的降低作用為好。

從表3可看出，與空白對照組比，模型組血NAG 和MDA水平均顯著升高（P<0.01），血SOD活力顯著降低（P<0.01），說明造慶大霉素性大鼠腎病模型成功。與模型組比，大、中劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血NAG水平（P<0.01），小劑量康腎口服液組和呋塞咪片組可明顯低血NAG水平（P<0.05）；中、小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血MDA水平 （P<0.01），大劑量康腎口服液組和和呋塞咪片組可明顯降低血MDA水平（P<0.05）；大劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降升高血SOD活力 （P<0.01），中、小劑量康腎口服液組可明顯升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中劑量康腎口服液組對慶大霉素性大鼠腎病模型血NAG和MDA水平的降低作用、對血SOD活力升高作用為好。

表 2 各組大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

表 2 各組大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

注：與模型組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 劑量（ml原藥液/kg） 血肌酐（μmol/L） 尿素氮（mmol/L） 尿肌酐（μmol/L）空白對照組 12 24.411±5.678# 9.463±2.324# 4391.9±1315.6#模型組 11 79.383±16.854 32.20±6.822 2566.0±1686.9呋塞咪片組 11 6.6 mg 68.238±18.134 28.515±7.953 2837.9±1115.3尿毒清顆粒組 12 4.2 g 57.533±11.994# 24.235±4.208# 3232.8±1085.3大劑量腎康口服液組 12 20 59.684±13.816# 24.663±10.488 3409.8±1471.4中劑量腎康口服液組 12 10 53.016±9.612# 24.417±6.951* 3285.2±1311.8小劑量腎康口服液組 12 5 55.382±13.140# 21.339±4.092# 3374.9±1006.2

表 3 各組大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

表 3 各組大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

注：與模型組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 劑量（ml原藥液/kg） NAG（u/L） MDA（nmol/mg） SOD（u/mg）空白對照組 12 3.626±0.720# 0.785±0.116# 239.0±63.1#模型組 11 7.257±0.886 1.384±0.392 162.8±19.0呋塞咪片組 11 6.6 mg 6.134±1.452* 0.963±0.356* 186.9±38.9尿毒清顆粒組 12 4.2 g 4.167±0.846# 0.814±0.199# 209.1±43.3#大劑量康腎口服液組 12 20 5.881±0.698# 0.972±0.387* 195.8±25.9#中劑量康腎口服液組 12 10 5.811±1.084# 0.810±0.178# 191.0±32.9*小劑量康腎口服液組 12 5 6.015±1.374* 0.901±0.298# 188.6±34.6*

3 討論

本實(shí)驗(yàn)造慶大霉素大鼠急性腎損傷模型成功。與模型組比康腎口服液組、呋塞咪片組和尿毒清顆粒組均可顯著降低腎指數(shù)（P<0.01），顯著降低尿蛋白總量（P<0.01）；康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血肌酐（P<0.01）以中、小劑量康腎口服液組對血肌酐、尿素氮的降低作用為好。大、中劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血NAG水平（P<0.01），小劑量康腎口服液組和呋塞咪片組可明顯低血NAG水平（P<0.05）；中、小劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組均可顯著降低血MDA水平（P<0.01），大劑量康腎口服液組和和呋塞咪片組可明顯降低血MDA水平（P<0.05）；大劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可顯著降升高血SOD活力（P<0.01），中、小劑量康腎口服液組可明顯升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中劑量康腎口服液組對慶大霉素性大鼠腎病模型血NAG和MDA水平的降低作用、對血SOD活力升高作用為好。

本實(shí)驗(yàn)提示：康腎口服液對慢性腎炎、腎病綜合征有較好的治療作用，且優(yōu)于尿毒清顆粒和呋塞咪片。

志謝 本實(shí)驗(yàn)在河南中醫(yī)學(xué)院苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝

[1]汪延輝，劉 毅，呂吟秋，等.阿魏酸鈉和硝苯地平對大鼠慶大霉素腎毒性的干預(yù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2009，10(3):244-245.

[2]汪延輝，劉 毅，郭利明，等.番茄紅素對大鼠慶大霉素腎毒性的保護(hù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2008，9(2):141-142.

[3]陳秀蘭，郭 麗，張予陽，等.固精丹對慶大霉素急性腎損傷的防治作用及機(jī)制研究[J].中成藥，2007，29(6):801-805.

[4]樊文廣，袁亞光，楊 盛.川芎及黃芪預(yù)防慶大霉素致大鼠急性腎功能衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2007，39(2):146-150.