高效液相色譜法測定痔瘡栓中黃芩苷的含量

顧騰飛，張松亮，張玲昂，于天杰

痔瘡栓收載于 《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》2002版，主要由黃柏、兒茶、龍骨、仙鶴草、黃芩、沒藥、板藍(lán)根、血竭、冰片等九味中藥組成。臨床用于痔瘡復(fù)發(fā)或痔瘡術(shù)后的消炎、鎮(zhèn)痛、止血，具有確切臨床療效。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測定了制劑中黃芩苷含量。

A對照品

1 材料與方法

1.1 試藥 黃芩苷對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-200815，含量測定用）；痔瘡栓（為152醫(yī)院的醫(yī)院制劑，批號：20121105）；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、冰醋酸為分析純，水為重蒸餾水。

1.2 儀器 島津LC-20AT高效液相色譜系統(tǒng)，包括SPDM20A紫外檢測器、LC-Solution色譜工作站 （島津）；AS3120A超聲清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；島津AUW120D電子天平。

1.3 色譜條件 色譜柱：WondaSil-C18色譜柱 （5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇∶水∶磷酸（44∶56∶0.2）；流速為1.0 ml/min；柱溫為 30℃；檢測波長 278 nm；進(jìn)樣量 10 μl。 理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

1.4 溶液的制備

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取60℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品9.0 mg，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密吸取上述溶液10 ml，置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液（72 μg/ml）。

1.4.2 供試品溶液的制備 取重量差異下的本品1粒，剪碎，混勻，精密稱取1.5 g，加 70%乙醇溶液約 20 ml，加熱回流3 h，放置室溫后，過濾，濾液置于50 ml容量瓶中，用少量70%乙醇溶液分次洗滌容器和濾器，洗液并入容量瓶中，加70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

1.4.3 空白試驗(yàn) 制備不含黃芩的痔瘡栓，將黃芩苷對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液分別依法采用高效液相色譜法測定。結(jié)果陰性對照品溶液的色譜圖中在黃芩苷保留時(shí)間處無吸收峰，陰性無干擾。色譜圖見圖1。

B供試品

C陰性樣品圖 1 黃芩苷的高效液相色譜圖

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察 精密吸取黃芩苷對照品貯備液（72 μg/ml）進(jìn)行稀釋，得 1.125、2.25、4.5、9.0、18.0、36.0 μg/ml的對照品溶液；分別進(jìn)校10 μl測定峰面積，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，黃芩苷濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=144904X+14511，r=0.9998。結(jié)果表明，黃芩苷在1.1～72 μg/ml的范圍內(nèi)線性準(zhǔn)關(guān)系良好。

2.2 精密度和穩(wěn)定性 精密吸取對照品溶液，按色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣，測定得黃芩苷RSD為1.48%（n=5），表明本方法精密度良好。取供試品溶液室溫保存，分別在2、4、6、8、12、24 h內(nèi)測定，記錄峰面積，黃芩苷峰面積的RSD分別為1.13%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同批樣品5份，按“1.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“1.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測得黃芩苷平均含量為9.29 mg/粒，RSD為0.87%（n=5）；表明本方法重復(fù)性較好。

2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的樣品5份，加入濃度為0.18 mg/L的對照品溶液 10 ml，混勻，分別按“1.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“1.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測得峰面積并計(jì)算含量、回收率，結(jié)果見表1。

表 1 加樣回收實(shí)驗(yàn)（n=5）

3 討論

痔瘡栓的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只做通則檢查及鑒別分析，無含量測定方法。而黃芩苷為其主要成分之一，因此本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法選擇黃芩苷作為指標(biāo)成分，提高了痔瘡栓的質(zhì)量控制，操作簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可有效地控制痔瘡栓的質(zhì)量。

本文在痔瘡栓樣品的處理研究上，對水和70%乙醇溶液作為黃芩苷提取溶劑進(jìn)行了考察，水作為提取溶劑時(shí)提取黃芩苷的量為5.37 mg/g，而70%乙醇溶液提取時(shí)黃芩苷的量為6.02 mg/g，故70%乙醇溶液作為黃芩苷提取溶劑比較好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.282.

[2]中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范[S].第2版.北京:人民軍醫(yī)出版社，2002.205.

[3]梁永樞，林 海，李依信.HPLC法測定婦科養(yǎng)坤丸中黃芩苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2006，(4):275-276.