自擬心腦寧片對亞急性衰老模型小鼠血漿及肝腦勻漿MDA水平的影響

王希東，呂宏迪，馬珍珍，郝少君，孫建華

心腦寧片，由人參、當歸、川芎等組成，具有活血化瘀，益氣安神，用于冠心病、腦血栓形成等，亦可用于記憶力減退，具有抗衰老等作用。針對其抗衰老作用筆者進行了心腦寧片對D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型血漿、肝、腦勻漿MDA水平影響的實驗研究。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及儀器

1.1.1 藥品 心腦寧片，由人參、當歸、川芎等組成，具有活血化瘀，益氣安神，用于冠心病，腦血栓形成等，亦可用于記憶力減退，抗衰老等作用，由解放軍第371醫(yī)院制劑室提供，批號20110606；尼莫地平片，山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號

1105036；腦安片，哈藥集團三精制藥四廠有限公司生產(chǎn)，批號201109002；D-半乳糖，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號18Q10260；氯化鈉注射液，鄭州永和制藥有限公司，批號11103065；PVP絡(luò)合碘消毒劑，洛陽市潔康消毒劑廠，批號110903；甲醛，煙臺市雙雙化工有限公司，批號20111101；冰醋酸，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號20110113；總超氧化物歧化酶（T-SOD）測試盒，南京建成生物工程研究所，批號20120316；過氧化氫酶（Catalase CAT）試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20120315；谷胱甘肽過氧化物酶 （GSHPX）測試盒，南京建成生物工程研究所，批號20120316；丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20120316；考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20120317；羧甲基纖維素鈉，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號20090723。

1.1.2 實驗動物 小鼠72只，體重 18～21 g，清潔級，昆明種，河北省動物實驗中心提供，合格證號1202041。

1.1.3 實驗儀器 U電子稱，余姚記銘稱重校驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)，型號JM 1000；離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠，型號TDL-40B；電子天平，河南中良科學(xué)儀器有限公司，型號JA1103N；電子天平，上海精天電子儀器廠，型號JT6001；高速冷凍離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，型號KDC-160HR；電子恒溫水浴鍋，北京永光明醫(yī)療儀器廠，型號DZKW-4；紫外可見分光光度計，日本島津公司，型號 UV-2201； 酶標儀 （Model 680;made by BIORAD Laboratories）；電動玻璃勻漿機，寧波新芝生物科技有限公司生產(chǎn)，型號DY89-1；可調(diào)式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法 取體重18～21 g小鼠72只，雌雄各半，隨機分為6組，每組12只（雌雄各半），其中5組造D-半乳糖亞急性衰老模型，每天頸背部皮下注射D－半乳糖 （生理鹽水配成5%，注射量為0.25 ml/10 g），造模 1 次/d，連續(xù) 40 d；另 1 組為空白對照組，每天頸背部皮下注射同體積生理鹽水。從第11天開始，造模型5組分別灌服大、中、小劑量心腦寧片混懸液 （2.24、1.12、0.56 g/kg，112、56、28 mg/ml，0.2 ml/10 g，相當于臨床劑量的 30、15、7.5倍）、腦安片混懸液（0.53 g/kg，26.5 mg/ml，0.2 ml/10 g，相當于臨床用量的15倍）及同體積的生理鹽水；空白對照組灌服同體積的生理鹽水。給藥1次/d，連續(xù)30 d。稱體重1次/3 d，根據(jù)體重調(diào)整D-半乳糖和相應(yīng)藥物用量。于用藥第40天，各組小鼠均禁食不禁水12 h，于給D-半乳糖和灌胃2 h后，小鼠眼眶取血，肝素抗凝，按試劑盒說明書分別測定血超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱苷肽（GSH）的活力；處死小鼠，解剖，取小鼠肝、腦，用冰生理鹽水制備肝勻漿、腦勻漿，冰藏備用，按試劑盒說明書分別測定血漿、肝勻漿和腦勻漿中丙二醛（MDA）含量；然后取腦、胸腺、脾臟，甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE 染色，光鏡觀察腦、胸腺、脾臟組織形態(tài)的變化。

計算公式：

蛋白含量（g/L）=測定管OD值-空白管OD值標準管OD值-空白管OD值×標準管濃度（g/L）

表 1 各組小鼠血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平（±s，nmol/mg）

表 1 各組小鼠血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平（±s，nmol/mg）

注：與模型組比，*P<0.05；與模型組比，#P<0.01

組別 動物（只） 劑量（g/kg） 血漿 肝勻漿 腦勻漿空白對照組 12 9.690±4.938# 4.713±3.406# 13.137±2.650#模型組 12 19.726±7.874 9.010±1.702 18.821±4.769腦安片組 12 0.53 g 12.690±6.063* 7.003±2.557* 13.245±3.998#大劑量心腦寧片組 12 2.24 10.452±5.888# 4.344±2.347# 14.869±4.716*中劑量心腦寧片組 12 1.12 15.571±9.949 5.782±3.193# 13.127±5.953*小劑量心腦寧片組 12 0.56 14.869±9.165 5.337±3.244# 15.950±6.171

2 結(jié)果

對D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平的影響，見表1。

從表1可看出，與空白對照組比，模型組血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平水平均顯著升高 （P<0.01），說明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。與模型組比，大劑量心腦寧片組可顯著降低血漿MDA水平（P<0.01）、腦安片組可明顯降低血漿MDA水平（P<0.05）；大、中、小劑量心腦寧片組均可顯著降低肝勻漿MDA水平（P<0.01）、腦安片組可明顯降低肝勻漿MDA水平（P<0.05）；大、中劑量心腦寧片組可明顯降低腦勻漿MDA水平（P<0.05）、腦安片組可顯著降低腦勻漿MDA水平（P<0.01）；以大、中劑量心腦寧片組對小鼠D-半乳糖衰老模型血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平的降低作用為優(yōu)。

3 討論

本實驗采用D-半乳糖致小鼠衰老模型，觀察了心腦寧片對D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型血漿、肝、腦勻漿MDA水平影響的實驗，與空白對照組比，模型組血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平均顯著升高（P<0.01），說明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。心腦寧片是根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究成果擬定的院內(nèi)協(xié)定處方。方中以人參為君藥，調(diào)中，止消渴，通血脈，破堅疾，令人不忘，以其主補五臟，安精神，定魂魄；黃芪，補中益氣，為臣藥。當歸，活血養(yǎng)血；川芎，其性善降結(jié)氣，以走肝經(jīng)，氣中之血藥，通行十二經(jīng)，具有理氣、活血化瘀的作用為佐藥。諸藥合用，集活血化瘀、抗血栓、益氣之功于一體，既重視疏通脈管，以改善臟器供血，又注意改善人體整體功能及代謝，達到扶正祛邪之目的。實驗結(jié)果顯示：大劑量心腦寧片組可顯著降低血漿MDA水平（P<0.01），大、中、小劑量心腦寧片組均可顯著降低肝勻漿MDA水平（P<0.01），大、中劑量心腦寧片組可明顯降低腦勻漿MDA水平（P<0.05），以大、中劑量心腦寧片組對小鼠D-半乳糖衰老模型血漿、肝勻漿和腦勻漿MDA水平的降低作用為優(yōu)。

心腦寧片臨床療效確切，且藥理實驗表明其具有很好的抗衰老的作用，為臨床提供了實驗依據(jù)和臨床基礎(chǔ)。志謝 本實驗在河南中醫(yī)學(xué)院苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝

[1]苗明三，方曉艷．蘆薈多糖對衰老模型小鼠的影響[J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2005，22（3）：181-184.

[2]苗明三，顧麗亞，方曉燕，等．阿膠益壽顆粒對小鼠衰老模型的影響[J]．中國中藥雜志，2004，29（8）：817-818.