藏成藥風(fēng)濕塞隆膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

賀世娟 王金霞 杜連平 羅明英 陳海蓮

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

公元18世紀(jì)，著名藏醫(yī)學(xué)家鄔堅(jiān)太曲以自已多年的行醫(yī)臨床和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，根據(jù)藏藥六味、八性、十七效理論，源自于《四部醫(yī)典》中的“十味訶子散”和“二十五味冰片散”合制而成，命名為“風(fēng)濕止痛丸”，專門用于治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕等疑難疾病，取得實(shí)效，載入個(gè)人專著《藏醫(yī)臨床札杞》，有近300年的歷史。后來，在“風(fēng)濕止痛丸”基礎(chǔ)上增加高原特有動(dòng)物藥，對(duì)治療風(fēng)濕性疾病有特殊療效的國家一類新藥材塞隆骨，制成風(fēng)濕塞隆膠囊。風(fēng)濕塞隆膠囊由塞隆骨、訶子、紅花、沉香、白檀香、紫檀香、白豆蔻、冰片、印度獐牙菜、木香、馬兜鈴、肉桂、巖精膏等32味藥材制成，其中有多味藥材為藏藥。具有祛風(fēng)，散寒，除濕之功效。用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎引起的四肢關(guān)節(jié)疼痛，腫脹，屈伸不利，肌膚麻木，腰膝酸軟。經(jīng)過多年臨床觀察，療效確切，是治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎良方之一。

為完善本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立快速、穩(wěn)定，準(zhǔn)確的含量測(cè)定方法，滿足本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)高要求的需要，在放棄肉桂醛含量測(cè)定控制指標(biāo)的同時(shí)，經(jīng)分析和預(yù)試驗(yàn)，選擇了風(fēng)濕塞隆膠囊處方所含草豆蔻的主要成分小豆蔻明作為含量測(cè)定指標(biāo)成分并進(jìn)行了方法學(xué)研究，結(jié)果該方法精密度高，重現(xiàn)性良好，加樣回收試驗(yàn)符合要求。

1 儀器與試藥

Waters2487型高效液相色譜儀;Waters C18色譜柱;Millennium32色譜工作站。小豆蔻明對(duì)照品:中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào):111763－200302)甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純;水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):WatersC18色譜柱(150mm×3．9mm);甲醇－水(65:35)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為346nm;柱溫為室溫;靈敏度0．1AU。結(jié)果表明小豆蔻明和樣品中其它組分可基線分離，小豆蔻明與其它色譜峰的分離度大于1．5，按小豆蔻明峰計(jì)算，理論板數(shù)約為2000。

2．2 對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備

2．2．1 對(duì)照品溶液的制備:取小豆蔻明對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含25mg的溶液，即得。

2．2．2 供試品溶液的制備:精密稱取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物4．0g，置具塞錐形瓶中，精密加乙醇50mL，回流提取90min，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液15mL，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状既芙廪D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0．45μm)濾過，即得。

2．3 方法學(xué)考察

2．3．1 提取方法考察:對(duì)樣品分別進(jìn)行超聲處理、回流提取，結(jié)果以回流提取效果最好，可消除對(duì)所有待測(cè)組分的干擾并且含量(以小豆蔻明計(jì))較高。結(jié)果見表1。

表1 方法學(xué)考察試驗(yàn)結(jié)果(n=2)

2．3．2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇:取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別在190nm～400nm的波長(zhǎng)內(nèi)測(cè)吸光度，結(jié)果在346nm處有最大吸收，故選此波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。

2．3．3 線性關(guān)系的考察:精密稱取小豆蔻明對(duì)照品6．38mg，置25mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度。精密吸取以上儲(chǔ)備液1mL，置10mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度，制成含小豆蔻明對(duì)照品25．5mg·mL－1的溶液。精密吸?。?、6、9、12、15μL此對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見表2。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，繪制坐標(biāo)曲線。即得。小豆蔻明在:76．5 ～382．5μg，范圍內(nèi)呈良好的線形關(guān)系。回歸方程為:Y=136829X－17207，r=0．9999(n=5)。

表2 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果(小豆蔻明)

2．3．4 精密度試驗(yàn):精密吸取小豆蔻明對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得小豆蔻明峰面積RSD為0．4%。表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2．3．5 穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取樣品(批號(hào)20060801)溶液10μL，分別于2，6，8，10，12h 進(jìn)樣，測(cè)定小豆蔻明的含量，結(jié)果RSD為2．0%，即樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表4

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2．3．6 重現(xiàn)性試驗(yàn):取同批樣品(批號(hào)20060801)5份，按【樣品測(cè)定】項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)定含量RSD為2．1%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表5。

2．3．7 回收率試驗(yàn):取已知含量的樣品5份(含量為0．2mg·g－1)，精密加入小豆蔻明對(duì)照品溶液(濃度為0．17mg·m L－1)3m L，按樣品制備方法和測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得平均回收率為100．2%，RSD為1．8%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

表5 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

表6 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．3．8 陰性干擾實(shí)驗(yàn):按照處方比例，取除去草豆蔻的陰性樣品，按樣品制備方法和測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性樣品在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上無吸收峰。說明處方中其它成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無影響(見圖1)，專屬性好。

圖1 風(fēng)濕塞隆膠囊HPLC色譜圖

2．4 樣品測(cè)定:精密稱取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容4．0g，置具塞錐形瓶中，精密加乙醇50mL，水浴回流提取90min，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液15mL，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状既芙廪D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0．45μm)濾過，即得。

吸取10μL進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果5批樣品中小豆蔻明平均含量為．6μg/粒，RSD=1．2%。結(jié)果見表。

表7 樣品中小豆蔻明的含量

3 結(jié)論

3．1 在提取風(fēng)濕塞隆膠囊中小豆蔻明時(shí)，分別進(jìn)行超聲處理、回流提取，結(jié)果表明，以回流提取效果最好，可消除對(duì)所有待測(cè)組分的干擾并且含量(以小豆蔻明計(jì))較高;

3．2 在測(cè)定草豆蔻中小豆蔻明的含量時(shí)，選擇HPLC法，結(jié)果表明，該方法精密度高，重現(xiàn)性良好，加樣回收試驗(yàn)回收率較好。

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