藏藥超微粉與普通粉顯微觀察及薄層色譜對(duì)比研究

韓成芳 馬文俊 李寶文

(青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開發(fā)有限公司，青海 西寧 810003)

超微粉技術(shù)又叫細(xì)胞級(jí)粉碎技術(shù)，是近幾年新興的中藏藥加工高新技術(shù)，它是以打破動(dòng)植物類藥材細(xì)胞壁(膜)，使藥材細(xì)粉粒徑達(dá)到5～10μm(傳統(tǒng)加工的藥粉粒徑在150～200μm)，超微粉技術(shù)是一種純物理過程，粉碎過程中藏藥材不發(fā)生任何化學(xué)變化，不改變藥材本身的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，傳統(tǒng)粉碎技術(shù)由于藥粉粒徑較大，有效成分釋放率較低，超微粉碎后，由于細(xì)胞完整性被打破，細(xì)胞內(nèi)的有效成分能夠充分釋放出來，使藥物起效更加迅速。傳統(tǒng)粉碎工藝藥材細(xì)粉粒徑分布范圍廣，均勻性差，影響療效的穩(wěn)定發(fā)揮;超微粉的藥材粉碎粒度分布范圍小，粒度更均勻，提高了產(chǎn)品質(zhì)量和療效的穩(wěn)定性。藏藥80%都是生藥粉直接入藥，用超微粉制成的藏藥制劑不但可達(dá)提高其有效性，還可以減少服用量和吸收速率，意義重大。本文分別利用顯微技術(shù)和薄層層析技術(shù)研究超微粉和普通粉的細(xì)胞破碎和化學(xué)成分溶出情況，直觀了解超微粉的優(yōu)點(diǎn)和推廣的必要性。

1 藥品、儀器與試劑

1．1 藥品:六味安消片的普通粉和超微粉樣品，由本所制劑實(shí)驗(yàn)室提供;山柰對(duì)照藥材、大黃酚、大黃素對(duì)照品、土木香內(nèi)酯、沒食子酸對(duì)照品(121504－200401、110796－200514、110756 －200110、110760 －200507、110831 －200302中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)。硅膠G、硅膠GF254、硅膠H由青島海洋化工廠生產(chǎn)。

1．2 設(shè)備儀器:MZ30型超微粉碎機(jī)、XSP－EMED雙目生物顯微鏡、三用紫外分析儀、超聲儀(功率:220V，50kHz)

1．3 試劑:水合氯醛、乙醚、石油醚、乙酸乙酯等均為分析純、水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 組織形態(tài)的顯微觀察

分別取樣品超微粉、普通粉粉末適量，粉末制片，置顯40倍微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，兩種粉體的顯微特征，在同樣放大倍數(shù)下有很大差異，原藥粉在顯微鏡下能明顯觀察到完整的薄壁細(xì)胞，長(zhǎng)圓形或長(zhǎng)多角形，含扇形菊糖塊。淀粉粒圓形、橢圓形或類三角形，直徑10～30μm，臍點(diǎn)及層紋不明顯，偶見復(fù)粒，由2～3分粒組成。草酸鈣簇晶及碎塊，直徑60～140μm。內(nèi)果皮石細(xì)胞長(zhǎng)～200μm，直徑～80μm．內(nèi)果皮纖維束，纖維長(zhǎng)150～320μm。網(wǎng)紋導(dǎo)管較多，具有緣紋溝，菊糖結(jié)晶多見。木栓細(xì)胞壁薄，呈長(zhǎng)方形。油細(xì)胞呈長(zhǎng)圓形，含黃棕色油狀物。(見圖1)

圖一

經(jīng)超微粉碎后，粉末顆粒大小均勻，不見原藥材形貌特征，顯微鏡下鑒別觀察已經(jīng)看不到完整的組織細(xì)胞，變現(xiàn)為不規(guī)則的小顆粒充滿視野，呈淡黃色，并可見網(wǎng)紋導(dǎo)管碎片散在，偶見淀粉粒、草酸鈣簇晶。(見圖2)

圖二

2．2 超微粉和普通粉的薄層色譜對(duì)比:

2．2．1 取超微粉與普通粉各5．0g，各加乙醚50mL，加熱回流30min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?m L甲醇溶解，分別作為供試品溶液。另取山奈對(duì)照藥材粉末0．5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，［1］吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60－90℃)－甲苯 －乙酸乙酯 －甲酸(15:4:2:0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。超微粉斑點(diǎn)明顯比普通粉斑點(diǎn)清晰。陰性對(duì)照無干擾，(見圖3)

圖3 六味安消片中山柰超微粉與普通粉TLC對(duì)比

2．2．2 取超微粉與普通粉各2．5g，加甲醇20mL，浸漬1h，濾過，取濾液10mL，蒸干，殘?jiān)铀?0m L使溶解，再加1mL鹽酸，水浴加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确?mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0．1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品，分別加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各8μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠H板上，以石油醚(60－90℃)－甲酸乙酯－甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn);在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn);置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。超微粉斑點(diǎn)明顯比普通粉斑點(diǎn)清晰。陰性對(duì)照無干擾。(見圖4)。

圖4 六味安消片中大黃超微粉與普通粉TLC對(duì)比

2．2．3 取超微粉與普通粉各5．0g，加乙醚50mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?mL甲醇溶解，作為供試品溶液。取土木香內(nèi)脂對(duì)照品，加甲醇制成1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，［1］吸取供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于用0．25%硝酸銀制備的硅膠G薄層板上，以石油醚(60－90℃)－甲苯－乙酸乙酯－甲醇(15:2:2:0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%茴香醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。超微粉斑點(diǎn)明顯比普通粉斑點(diǎn)清晰。陰性對(duì)照無干擾。(見圖5)。

圖5 六味安消片中藏木香超微粉與普通粉TLC對(duì)比

2．2．4 取超微粉與普通粉各3．5g，加乙醇10mL，超聲處理20min，上清液作為供試品溶液。另沒食子酸對(duì)照品，加乙醇制成1mL含0．5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，［1］吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸(6:4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。超微粉斑點(diǎn)明顯比原藥粉斑點(diǎn)清晰。陰性對(duì)照無干擾。(見圖6)。

圖6 六味安消片中訶子超微粉與普通粉TLC對(duì)比

3 結(jié)果討論

一般情況下藥用有效成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞完整無損的狀態(tài)下，有效成分只能透過細(xì)胞壁和細(xì)胞膜釋放出后才能被利用。完整的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜對(duì)有效成分的釋出形成阻力，這種阻力隨細(xì)胞團(tuán)內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的增多而增大。為消除這種阻力需要對(duì)藥材采用超微粉碎工藝將細(xì)胞打破，以使細(xì)胞壁與成分分離，細(xì)胞內(nèi)的有效成分可直接接觸溶媒而溶出，而不再需要通過以往的透壁釋放過程(本實(shí)驗(yàn)顯微圖譜很清楚)。一方面使其粒度更加細(xì)微均勻，比表面積增加，孔隙率增大，提高藥物的溶出速度，有利于藥物的吸收;另一方面95%以上的細(xì)胞破壁率使藥物細(xì)胞中的有效成分直接暴露出來并進(jìn)入體液，從而達(dá)到用藥劑量更小，生物利用度更高，藥物發(fā)揮作用更迅速，藥效更強(qiáng)之目的。

在薄層色譜鑒別中，超微粉的供試品溶液比普通粉的供試品溶液的斑點(diǎn)清晰，可見在樣品前處理方法、點(diǎn)樣量、展開劑等完全相同的條件下超微粉的提取效率明顯優(yōu)于普通粉。

藏藥工業(yè)生產(chǎn)從作坊式生產(chǎn)，逐步向機(jī)械化、工業(yè)化、現(xiàn)代化過渡，超微粉碎工藝技術(shù)為積極發(fā)展起來的中藏藥現(xiàn)代化制劑的研制指引了一個(gè)方向，必將呈現(xiàn)出強(qiáng)大的生命力。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］．2005年版．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:1．