HPLC法測定蒙藥阿那日十四味散中胡椒堿的含量

玉 華

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028043）

阿那日十四味散，別名阿那日-14[1]，是蒙醫(yī)臨床常用散劑。由石榴、寒水石（熱制）、蓽茇、木香、白豆蔻、肉豆蔻、紅花、梔子、干姜、草果、肉桂、訶子、芫荽果、光明鹽等14味藥材組成；具有健脾消食，溫中散寒之功能；主要用于脾胃寒濕，胸肋脹滿，惡呃痞滿，消化不良等癥。臨床療效好，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊》（1998年版）[1]。其藥品標(biāo)準(zhǔn)草案仍缺含量測定項(xiàng)，為補(bǔ)充藥品標(biāo)準(zhǔn)草案，對蒙藥阿那日十四味散進(jìn)行含量測定研究，為該藥的進(jìn)一步研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料

1.1 儀器：LC-10ATvp高效液相色譜儀 (日本島津)，SPO-10Avp檢測器(日本島津)，N3000色譜工作站（浙江大學(xué)）；BT25S分析電子天平（d＝0.01mg；Max＝21g，北京）；MiLLi-Q Academic超純水系統(tǒng)（法國）；KQ-100型超聲波清洗器（超聲頻率20kHz，功率w昆山）。

1.2 試藥：蒙藥阿那日十四味散分別由內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司、內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠、阜新蒙藥股份有限公司提供，批號分別為、2120516、120310；胡椒堿對照品（批號-9702），由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；水為高純水；所用試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]：色譜柱：DiamonsiLC18（250mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 -水（77:23）；檢測波長：343 nm；流速：0.8mL·min-1；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。在該色譜條件下，樣品中胡椒堿可達(dá)基線分離，其它成分對測定無干擾，理論板數(shù)（n）按胡椒堿峰計(jì)高于1。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對照品10.4mg，置10mL棕色量瓶中，加入無水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取上液1.0mL,置50mL棕色量瓶中，加入無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每mL中含胡椒堿.8μg）。

2.2.2 供試品溶液的制備：取阿那日十四味散約0.75g，精密稱定，置 mL棕色量瓶中，精密加入無水乙醇mL，密塞，超聲處理min，放冷，加入無水乙醇稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 缺蓽茇陰性對照品溶液的制備：取缺蓽茇陰性對照樣品約0.6g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，照上述2.2.2項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 線性關(guān)系及其工作范圍的考察：精密吸取胡椒堿對照品溶液.5、5.0、7.5、10.0、12.5μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積（A）。并以峰面積（Y）對胡椒堿的進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=290X-206，r=0.999。結(jié)果表明，胡椒堿對照品進(jìn)樣量在0.052μg～0.26μg范圍內(nèi)，與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)：精密吸取同一份供試品溶液10μL，在上述色譜條件下依法重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值。結(jié)果其RSD為1.90%，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：同一份供試品溶液，分別于、2、4、6、8、10h，精密吸取μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值。結(jié)果其RSD為0.90%，表明供試品溶液在10h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)：稱取樣品約.75g，共份，精密稱定，照上述2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液6份，按含量測定方法，分別精密吸取μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積。結(jié)果RSD為1.78%。表明該含量測定方法具有良好的重復(fù)性。

2.7 回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品約0.40g，計(jì)6份，精密稱定，分別加入一定量的胡椒堿對照品貯備液，照上述2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液后進(jìn)樣測定峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果（見表），胡椒堿平均回收率為99.77%、RSD為.50%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測定：照高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI D）測定。精密吸取對照品溶液(每1mL中含胡椒堿0.0208mg)與供試品溶液各μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積值，計(jì)算胡椒堿(C17H19NO3)含量。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇，將胡椒堿對照品溶液在200～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果在343nm處有最大吸收，經(jīng)HPLC法對阿那日十四味散樣品進(jìn)行分析，在343nm處無干擾，故選擇并確定此波長為檢測波長。

表2 阿那日十四味散中胡椒堿的含量（n=6）

3.2 在本試驗(yàn)所確定的色譜條件下，理論板數(shù)按胡椒堿峰計(jì)算高于；并且胡椒堿基線分離（R>1.5）；T（0.95～1.05）。

3.3 本試驗(yàn)用無水乙醇提取蒙藥阿那日十四味散，能使樣品中的胡椒堿得到良好的分離。此方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該藥中胡椒堿的含量測定，也能夠定量控制該制劑。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊[S].北京:1998．116．

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:2010:219．