蒽酮-硫酸法測(cè)定蒙藥驢耳風(fēng)毛菊多糖的含量

師永晶

（錫盟藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000）

菊科(Compositae)風(fēng)毛菊屬(Saussurea)系多年生草本植物，該屬植物化學(xué)成分主要有倍半萜、三萜、甾體、黃酮、香豆素、有機(jī)酸、多糖類等。藥理作用主要表現(xiàn)為抗腫瘤、抗炎、抗衰老、改善心血管系統(tǒng)機(jī)能等[1]。驢耳風(fēng)毛菊Saussurea amara（L）DC為常用的民族醫(yī)藥材。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，驢耳風(fēng)毛菊性苦、寒、殺粘，清熱解毒，止痛消腫，用于發(fā)疹，心熱，血熱，感冒發(fā)燒等癥[2]。本文對(duì)多糖含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 試驗(yàn)材料

葡萄糖、蒽酮、硫酸均為AR（市售）。210型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)（日本島津）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制、顯色劑的配制及蒽酮-硫酸法最大吸收波長(zhǎng)的選擇：取葡萄糖約6mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，即為葡萄糖對(duì)照品溶液（60μg·mL-1）。蒽酮溶于硫酸中，配制成.5%濃度。棕色瓶保存。精密吸取0.6mL對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，加入0.5%的蒽酮硫酸溶液4mL，混勻，同法制的陰性溶液，振搖10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷卻30min，同法制得陰性對(duì)照溶液，在可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)200~800nm范圍內(nèi)測(cè)定吸收度，結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)λmax=615nm.

2.2 線性化范圍試驗(yàn)：精密吸取.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至.0mL，加入0.5%的蒽酮溶液4mL，混勻，振搖min，置沸水浴中min，然后置冷水中冷卻30min，在可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)615nm，處測(cè)定吸收度。經(jīng)回歸處理回歸方程如下A=-0.1120+0.0005x，r=0.999。在,12.0～72.0μg·mL-1范圍內(nèi)葡萄糖量與吸收度成一條不通過(guò)原點(diǎn)的直線，供試品溶液測(cè)定可采用外標(biāo)兩點(diǎn)法定量。

2.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取0.6mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮 -硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度次，吸收度分別為.265，0.264，0.265，0.267，0.264,RSD=0.46%。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取0.6mL葡萄糖對(duì)照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度，每隔20min測(cè)定1次。結(jié)果，RSD=0.98%,在2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率的測(cè)定：取驢耳風(fēng)毛菊粉末（80目,105℃干燥h，）約.8g，6份，精密測(cè)定，其中份不加葡萄糖對(duì)照品，作為隨行對(duì)照，其余5份分別加入精密稱定的葡萄糖對(duì)照品，余下操作按“2.6.1供試品溶液制備”方法處理，得到5份加樣回收率供試品溶液。精密吸取0.25mL各加樣回收率供試品溶液，按上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.6 含量測(cè)定

2.6.1 供試品溶液的制備及含量測(cè)定：取不同產(chǎn)地驢耳風(fēng)毛菊粉末（80目,105℃干燥h，）約g，精密稱定，加水100 mL，回流提取次，每次30min。合并提取液，濃縮至mL，加%乙醇至含量%，攪拌min，放置24h，過(guò)濾，殘?jiān)?的乙醇洗滌，然后用丙酮洗滌，自然干燥后用水溶解轉(zhuǎn)移至100mL量瓶?jī)?nèi)，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測(cè)定吸收度，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算不同產(chǎn)地驢耳風(fēng)毛菊中多糖含量，錫盟、阿盟、呼盟、烏盟、呼市多糖含量分別為6.32%、6.11%、5.31%、7.25%、6.52%，平 均 含 量 為6.30%。

3 討 論

硫酸-蒽酮法是測(cè)定多糖含量的較為常用的方法，其原理為多糖類在濃硫酸作用下先水解為單糖分子，并迅速脫水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物再與蒽酮結(jié)合成有色化合物以比色法在適當(dāng)波長(zhǎng)測(cè)定多糖含量。本文采用加水回流提取多糖，提取液加乙醇至85%沉淀，沉淀物用85%乙醇、丙酮洗滌，自然干燥，樣品為白色粉末，用蒽酮-硫酸顯色法測(cè)定多糖含量。測(cè)定結(jié)果，驢耳風(fēng)毛菊多糖平均含量為6.30%。該方法簡(jiǎn)單、可靠、重現(xiàn)性好，可用于藥材的質(zhì)量控制方法之一。

[1]王紅兵,秦國(guó)偉．風(fēng)毛菊屬植物的化學(xué)成分和生物活性[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)－植物藥分冊(cè),20（2）;47．

[2]藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－蒙藥分冊(cè) [S]．1998,21.