葡菊膠囊對老齡鼠抗氧化能力的影響

周丹英 余 琪 姜 艷 林紅梅 沈曉霞 陳石生

浙江省中藥研究所有限公司，浙江杭州 310023

葡萄籽和菊花具有很強的抗氧化活性[1-4]，是很好的氧自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，可對氧化損傷起到保護作用[5-6]。菊花是浙江的道地藥材，是“浙八味”之一。浙產(chǎn)菊花品質(zhì)優(yōu)良，本單位利用菊花等原料開發(fā)一個具有抗氧化功效的保健食品。葡菊膠囊是公司自行研發(fā)的保健食品，主要原料為葡萄籽和菊花，經(jīng)過粉碎、滲漉、減壓濃縮、噴霧干燥等工藝，制成膠囊劑，該產(chǎn)品的標志性成份為原花青素和總黃酮。

本文就葡菊膠囊對老齡大鼠血清丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）活力的影響進行研究，為進一步開發(fā)利用葡萄籽、菊花資源提供實驗依據(jù)，證實葡菊膠囊的抗氧化功效。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

葡菊膠囊由本公司提供，是以葡萄籽、菊花為原料的復(fù)方制劑。利用粉碎、滲漉、減壓濃縮、噴霧干燥等工藝，將其制成膠囊劑。規(guī)格0.35 g/粒，人體推薦劑量為每日2.7 g/60 kg體重，取膠囊內(nèi)容物進行實驗。

1.2 儀器與試劑

722分光光度計，MDA、SOD和GSH-Px試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 實驗動物

SD 大白鼠，12 月齡，雄性，體重 559-724 g，40 只；青年SD大鼠，雄性，體重209～226 g，10只。由中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2007-0005。 飼養(yǎng)室溫度 20～26°C，相對濕度：40%～70%，實驗動物使用許可證號：SYXK（滬）2007-0008。大鼠飼料由蘇州雙獅實驗動物飼料科技服務(wù)有限公司提供，登記證號：蘇E 飼生字（2002）006。

1.4 實驗方法

12月齡大鼠隨機分組：按血清中MDA水平分組，隨機分為1個老齡對照組和3個受試樣品劑量組。另設(shè)1個青年對照組。樣品的配制：取樣品0.225 g/kg、0.45 g/kg、1.35 g/kg，分別加蒸餾水至10 mL，即為低、中、高三個劑量組的供試液。3個劑量組給予相應(yīng)劑量的受試樣品灌胃，兩個對照組給予蒸餾水灌胃，連續(xù)4周。每周對動物稱重一次。第31天各組動物去眼球采血，離心后取血清；測定血清SOD（羥胺比色法）和GSH-Px活力，測定方法按試劑盒操作要求進行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 13.0軟件進行方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 葡菊膠囊對老齡大鼠體重的影響

樣品各劑量組的動物體重與老年對照組的動物體重相比，均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。見表1。

表1 樣品對動物體重的影響（±s，g）

表1 樣品對動物體重的影響（±s，g）

注：低、中、高劑量組樣品濃度分別為0.225、0.45、1.35 g/kg

組別 動物數(shù)（n） 初始體重 中期體重 終期體重老年對照低劑量組中劑量組高劑量組青年對照組10 10 10 10 10 638.70±58.59 617.10±45.46 609.40±37.39 642.30±29.41 215.70±5.01 646.40±68.02 626.60±39.39 623.60±42.44 654.20±29.18 332.10±9.30 654.40±66.63 639.70±45.81 634.90±41.37 661.20±29.28 408.10±16.29

2.2 葡菊膠囊對老齡大鼠血清過氧化脂質(zhì)的影響

實驗前，老年對照組的MDA明顯大于青年對照組；實驗?zāi)?，樣品?.45 g/kg、1.35 g/kg劑量組的MDA含量與老年對照組相比，均明顯降低；實驗?zāi)┡c實驗前比較，樣品0.45 g/kg、1.35 g/kg劑量組實驗?zāi)┑腗DA含量均明顯降低。見表2。

表2 血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量（±s，nmol/mL）

表2 血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量（±s，nmol/mL）

注：與老年對照組相比，*P<0.05；與實驗前相比，△P<0.05

組別 動物數(shù) 實驗前 實驗?zāi)├夏陮φ战M低劑量組中劑量組高劑量組青年對照組10 10 10 10 10 4.11±0.25 4.10±0.23 4.10±0.18 4.14±0.16 1.95±0.85*4.19±0.35 4.01±0.30 3.45±0.34*△3.25±0.36*△1.97±0.27*

2.3 葡菊膠囊對老齡大鼠血清SOD活力的影響

樣品0.45 g/kg、1.35 g/kg劑量組的SOD活性與老年對照組的SOD活性相比，顯著升高。見表3。

2.4 葡菊膠囊對老齡大鼠血清GSH-Px活力的影響

樣品0.45g/kg、1.35g/kg劑量組的GSH-Px活性與老年對照組的GSH-Px活性相比，顯著升高。見表4。按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003版）進行結(jié)果判定：樣品葡菊膠囊對老齡大鼠具有抗氧化功能。

3 討論

本產(chǎn)品是以葡萄籽、菊花為原料的復(fù)方制劑，利用粉碎、滲漉、減壓濃縮、噴霧干燥等工藝，將其制成膠囊劑，具有抗氧化的保健功能。我國的葡萄籽、菊花資源非常豐富，國外以葡萄籽提取物中的低聚原花青素作為主要活性成分的藥品或食品營養(yǎng)補充劑已深入人們?nèi)粘Ｉ?，國?nèi)對該類產(chǎn)品的開發(fā)才剛剛起步，近年來在人們越來越注重綠色、健康的情況下。菊花黃酮資源豐富，安全性高，具有消炎、抗菌、抗氧化等藥理作用。葡萄籽和菊花自身獨特的保健功能也在逐漸得到認可。研究和開發(fā)葡萄籽、菊花資源，使其成為合成抗氧化劑的替代品是很有意義的。

表3 實驗?zāi)┭谐趸镝福⊿OD）活性（±s，U/mL）

表3 實驗?zāi)┭谐趸镝福⊿OD）活性（±s，U/mL）

注：與老年對照組相比，*P<0.05

組別 動物數(shù) 超氧化岐化酶活性老年對照組低劑量組中劑量組高劑量組青年對照組10 10 10 10 10 118.43±9.83 127.53±10.90 146.19±10.81*155.01±13.09*206.21±14.30*

表4 實驗?zāi)┭泄入赘孰倪^氧化物酶（GSH-Px）活性（±s，U/mL）

表4 實驗?zāi)┭泄入赘孰倪^氧化物酶（GSH-Px）活性（±s，U/mL）

注：組與老年對照組相比，*P<0.05

組別 動物數(shù) 谷胱甘肽過氧化物酶活性老年對照組低劑量組中劑量組高劑量組青年對照組10 10 10 10 10 1016.53±250.82 1180.82±332.49 1454.69±215.98*1732.04±277.22*2078.98±259.29*

葡萄籽提取物中有大量的活性酚羥基，是氫的供體，能有效地清除多種活性氧自由基，影響某些酶的生物活性，具有極強的抗氧化活性[7]。葡萄籽提取物中的原花青素是一種良好的氧游離基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，可有效清除超氧陰離子自由基和羥基自由基，也參與磷脂、花生四烯酸的新陳代謝和蛋白質(zhì)磷酸化，保護脂質(zhì)不發(fā)生過氧化損傷[8]。 Bagchi D等[9]研究了原花青素（Pc）對超氧陰離子的清除能力，發(fā)現(xiàn)Pc對氧自由基有濃度依賴性的抑制作用，是比VC和VE是更有效的自由基清除劑。葡萄籽提取物中的原花青素含有多個酚性羥基，在體內(nèi)被氧化后釋放出H，競爭性地與自由基及氧化物結(jié)合，從而保護脂質(zhì)不被氧化，阻斷自由基鏈式反應(yīng)。葡萄籽提取物清除體內(nèi)的氧自由基與增強機體抗氧化酶活力的過程同時進行，在初始階段葡萄籽提取物以清除體內(nèi)氧自由基為主，達到一定程度之后，則以增強機體抗氧化酶活性為主[10-11]。MDA是自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸而引發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用的最終分解產(chǎn)物。杭白菊是產(chǎn)于我國浙江的一種藥食兩用的菊科草本植物，其中也含有黃酮類、多酚類等物質(zhì)。在早期的研究中，已經(jīng)研究了杭白菊清除活性氧自由基 、保護人紅細胞膜、抗疲勞和降血脂等方面的作用[12-14]。秦衛(wèi)東[15]進行了杭白菊提取物抗氧化性能的研究，結(jié)果說明杭白菊的乙醇提取物具有較大的抗氧化活性。葡萄膠囊通過清除體內(nèi)的氧自由基，使血清中MDA含量顯著減少，同時通過有效清除多種活性氧自由基，淬滅單線態(tài)氧，恢復(fù)并增強SOD活性，通過抑制過量H2O2的產(chǎn)生，使谷胱甘肽恢復(fù)到正常水平，恢復(fù)并增強了GSH-Px的活性，從而強化機體的抗氧化系統(tǒng)。

本實驗從動物實驗的角度證明了葡菊膠囊能顯著降低老齡大鼠血清MDA含量，同時提高SOD活力，證明了葡菊膠囊的抗氧化作用。葡菊膠囊能有效提高體內(nèi)抗氧化酶活性，清除自由基，降低體內(nèi)脂質(zhì)過氧化發(fā)生水平。因此，服用葡菊膠囊對于提高人體抗氧化能力，增進身體健康水平有重要意義。我國有著豐富的葡萄資源，選用葡萄籽為原料，對這類抗氧化活性成分進行提取開發(fā)，無論是鑒于葡萄籽的利用，還是天然抗氧化劑市場的需求，都具有巨大的經(jīng)濟效益和社會效益。

[1]朱靖蓉，王忠民，李瑾瑜.葡萄籽原花青素的分離純化及其抗氧化活性研究[J].中國食物與營養(yǎng)，2007，（4）：34-37.

[2]王川.葡萄籽單寧的抗氧化性研究[J].食品科技，2009，34（2）：184-187.

[3]林久茂，莊秀華，王瑞國.菊花對D-半乳糖衰老抗氧化作用實驗研究[J].福建中醫(yī)藥，2002，33（5）：44.

[4]孔琪，吳春.菊花黃酮的提取及抗氧化活性研究[J].中草藥，2004，35（9）：1001-1002.

[5]林琳等.杭白菊總黃酮對大鼠缺血/再灌損傷大腦的保護作用[J].中國藥學(xué)雜志，2007，42（14）：1071-1074.

[6]李偉，孫靜，郭英.葡萄籽提取物對化學(xué)性肝損傷的抗氧化保護作用[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2007，7（2）：148-150.

[7]張曉媛，段立華，趙丁.菊花化學(xué)成分及藥理作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（7）：1702-1704.

[8]劇紅梅，曲梓怡，王召令，等.原花青素的抗氧化作用[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，11（16）：3155-3157.

[9]Bagchi D，Garg A，Krohn RL，et.Oxygen free radical Scavenging abilities of vitamins C and E，and a grape seed proanthocyanidin extract in vitro[J].Res Commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95（2） ：179-189.

[10]楊懷霞，馬慶一，許閩.葡萄籽原花青素的梯度分離及其抗氧活性研究[J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，10（5）：14-16.

[11]朱振勤，翟萬銀，陳季武，等.葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究[J].華東師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）.2003，1：98-102.

[12]劉國華，張延敏.不同菊花的藥理作用分析[J].中國實用醫(yī)藥，2012，7（7）：244-245.

[13]張清華，張玲.菊花化學(xué)成分及藥理作用的研究進展[J].食品與藥品， 2007，9（2A）：60-63.

[14]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（2003年版）[S].北京：衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司，2003：274-275.

[15]秦衛(wèi)東.杭白菊提取物抗氧化性能的研究[J].中國食品添加劑，2000，（4）：21-22