2013年懷化市H7N9禽流感檢測(cè)情況與分析

舒曉亮，李 杰，楊愛(ài)梅，丁美月

（湖南省懷化市畜牧水產(chǎn)局，湖南懷化418100）

H7N9型禽流感是一種新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地率先發(fā)現(xiàn)。隨后在北京、江蘇、浙江、山東、河南、臺(tái)灣、福建、河北等地陸續(xù)出現(xiàn)H7N9患者[1]。截至2013年7月20日，全國(guó)內(nèi)地共報(bào)告人感染H7N9禽流感病例134例，死亡37人。

H7N9禽流感病毒屬于甲型流感病毒，其中“H”是指流感病毒血凝素蛋白（HA），可分為1～16種亞型，“N”是指病毒神經(jīng)氨酸酶蛋白（NA），可分為1～9種亞型，HA不同亞型可以與N A的不同亞型相互組合形成不同的流感病毒[2]。

截至2013年5月22日，全國(guó)各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)完成899758份樣品，其中，血清學(xué)樣品702369份，病原學(xué)樣品197389份。樣品覆蓋全國(guó)31個(gè)省份和新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)的42250個(gè)監(jiān)測(cè)采樣場(chǎng)點(diǎn)。各地沒(méi)有從家禽養(yǎng)殖場(chǎng)分離到H7N9禽流感病毒，也未發(fā)現(xiàn)豬感染該病毒[3]。

2013年4～5月份，我們通過(guò)對(duì)懷化地區(qū)105個(gè)檢測(cè)點(diǎn)采樣1462份進(jìn)行檢測(cè)，初步掌握了我市H7N9禽流感的感染情況，為我市H7N9禽流感的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料

1.1.1 樣品主要來(lái)源

對(duì)懷化市1 3個(gè)縣（市、區(qū)）的部分活禽交易市場(chǎng)和養(yǎng)禽場(chǎng)（村）采集禽血清、咽喉和泄殖腔拭子，編號(hào)一一對(duì)應(yīng)。具體見(jiàn)表1。

1.1.2 主要試劑

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H 7亞型血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：2013003）；H5N1血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：2013001）；H7N9RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：AIVH720130418P）；采集兩只未免疫公雞紅細(xì)胞配成1%雞紅細(xì)胞懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 血清學(xué)檢測(cè)方法

采用血凝抑制（H I）試驗(yàn)，檢測(cè)血清中H 7亞型禽流感病毒血凝素抗體。具體操作參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）中 H I試驗(yàn)進(jìn)行[4]。

共檢測(cè)血清樣品1462份，其中雞血清樣品820份、鴨血清樣品390份、鵝血清樣品220份、鵪鶉血清樣品32份。HI試驗(yàn)檢測(cè)抗體水平≥24，結(jié)果判定為陽(yáng)性。對(duì)結(jié)果呈陽(yáng)性的樣品，取對(duì)應(yīng)編號(hào)的咽喉和泄殖腔拭子進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。

1.3 H7N9 RT-PCR檢測(cè)方法

采用農(nóng)業(yè)部推薦的RT-PCR檢測(cè)方法，取H7亞型禽流感病毒血凝素抗體結(jié)果呈陽(yáng)性的30份樣品對(duì)應(yīng)編號(hào)的咽喉和泄殖腔拭子做R T-P C R檢測(cè)。具體操作按照推薦試劑（盒）的使用說(shuō)明進(jìn)行。

1.4 H7N9與H5N1抗體效價(jià)比較試驗(yàn)

采用H I試驗(yàn)，同時(shí)檢測(cè)血清中H 7和H 5亞型禽流感病毒血凝素抗體。具體操作參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）中HI試驗(yàn)進(jìn)行。共檢測(cè)血清樣品30份，全部為H7亞型禽流感抗體檢測(cè)陽(yáng)性血清，其中雞血清樣品22份、鴨血清樣品8份。檢測(cè)H7N9抗體效價(jià)高低是否與H5N1抗體效價(jià)存在關(guān)聯(lián)。

2 結(jié)果

2.1 H7N9血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)H7N9HI試驗(yàn)，檢測(cè)出活禽交易市場(chǎng)雞血清樣品陽(yáng)性率為1.15%，鴨血清樣品陽(yáng)性率為1.54%；雞養(yǎng)殖場(chǎng)（村）血清樣品陽(yáng)性率為3.39%；鴨養(yǎng)殖場(chǎng)（村）血清樣品陽(yáng)性率為2.31%；鵝養(yǎng)殖場(chǎng)（村）和鵪鶉養(yǎng)殖場(chǎng)（村）均未檢出陽(yáng)性。其中雞血清樣品平均陽(yáng)性率為2.68%，鴨血清樣品平均陽(yáng)性率為2.05%。具體見(jiàn)表2。

2.2 H7N9 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

取H7亞型禽流感病毒血凝素抗體結(jié)果呈陽(yáng)性的3 0份樣品對(duì)應(yīng)編號(hào)的咽喉和泄殖腔拭子做R T-PCR檢測(cè)，結(jié)果全部為陰性。陽(yáng)性對(duì)照在634bp出現(xiàn)明顯條帶。詳見(jiàn)圖1。

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2.3 H7N9與H5N1抗體效價(jià)比較結(jié)果

H7N9與H5N1抗體效價(jià)比較結(jié)果見(jiàn)表3。從圖2可以看出，30份H7N9抗體陽(yáng)性血清檢測(cè)H 5 N 1抗體均為陽(yáng)性，且效價(jià)大部分均在Log7以上。且H5N1抗體效價(jià)越高，H7N9抗體效價(jià)就越高。

3 分析與討論

通過(guò)H7N9血清學(xué)檢測(cè)可以從市場(chǎng)和養(yǎng)殖場(chǎng)血清樣品中檢測(cè)出H 7亞型禽流感病毒血凝素抗體陽(yáng)性樣品。但不能確定禽群已經(jīng)感染H7N9禽流感病毒。根據(jù)《農(nóng)業(yè)部印發(fā)H7N9禽流感緊急監(jiān)測(cè)方案及應(yīng)急處置指南》文件要求，H7亞型禽流感病毒血凝素抗體陽(yáng)性樣品需要進(jìn)一步通過(guò)H7N9RT-PCR或熒光RT-PCR檢測(cè)才能確定為疑似陽(yáng)性。通過(guò)H 7N9RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，30份血清學(xué)檢測(cè)呈陽(yáng)性的拭子樣品檢測(cè)結(jié)果全部為陰性，說(shuō)明并未感染H7N9禽流感病毒。H7亞型禽流感病毒血凝素抗體陽(yáng)性樣品可能是由感染其他H7亞型禽流感病毒引起的。說(shuō)明懷化市暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)有H7N9禽流感流行，初步掌握了懷化市H7N9禽流感的流行情況。

從圖2可以看出，H5N1抗體效價(jià)越高，H7N9抗體效價(jià)就越高，說(shuō)明H5N1和H7N9禽流感病毒存在一定的抗原交叉反應(yīng)，具體情況還有待進(jìn)一步的研究分析。從表2可以看出，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)血清樣品H7N9禽流感陽(yáng)性率明顯高于活禽交易市場(chǎng)（規(guī)模雞場(chǎng)：3.3 9%>1.1 5%；規(guī)模鴨場(chǎng)：2.3 1%>1.5 4%,），這也與規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)能很好地進(jìn)行H5N1禽流感免疫有關(guān)，另外，規(guī)模雞場(chǎng)比規(guī)模鴨場(chǎng)血清樣品H7N9禽流感陽(yáng)性率要高也能說(shuō)明這一點(diǎn)（3.3 9%>2.3 1%）。

盡管目前H7N9在人群中流行已經(jīng)減弱，但我們對(duì)禽流感病毒檢測(cè)和監(jiān)測(cè)工作不能放松。新近研究表明，H7N9在哺乳動(dòng)物貂和豬中具有一定的傳染性[5]，另外，7月20日，在河北省新確診一例人感染H7N9禽流感病例，都提示我們應(yīng)該進(jìn)一步加強(qiáng)H7N9禽流感病毒監(jiān)測(cè)工作。按照農(nóng)業(yè)部新出臺(tái)的農(nóng)醫(yī)發(fā) [2013]28號(hào)文件要求，新一輪關(guān)于H7N9禽流感病毒的監(jiān)測(cè)工作正在開(kāi)展，將進(jìn)一步對(duì)懷化市H7N9禽流感病毒的流行情況進(jìn)行調(diào)查，為廣大養(yǎng)殖戶對(duì)H7N9禽流感病毒的防控提供依據(jù)。

[1]張 寶，黃克勇，郭勁松，等.H7N9病毒的來(lái)源和重組模式[J].J South Med Univ,2013,33(7):1017-1021.

[2]朱聞斐，高榮保，王大燕，楊磊，朱云，舒躍龍.H7亞型禽流感病毒概述[J].病毒學(xué)報(bào)，2013,29:245-249.

[3]H7N9禽流感監(jiān)測(cè)工作完成未從家禽養(yǎng)殖場(chǎng)分離到H7N9禽流感病毒[N].中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部辦公室,2013-05-23.http://www.moa.gov.cn/zwllm/zwdt/201305/t20130523_3471497.htm

[4]GB/T 18936-2003，高致病性禽流感診斷技術(shù)[S].

[5]Zhu H,Wang D,Kelvin DJ,et al.Infectivity,transmission,and pathology of human H7N9 influenza in ferrets and Pigs[J].Science,2013,PMID:23704376.