銀杏葉提取物對(duì)小鼠腦缺氧保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙新超 馬 飛 樸蓮荀

延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002

缺氧對(duì)機(jī)體是一種劣性刺激，可以影響機(jī)體各種代謝，特別是機(jī)體的氧化供能，最終導(dǎo)致機(jī)體的心、腦等主要器官由于能量供應(yīng)不足而死亡[1]。銀杏葉提取物含有豐富的黃酮類和萜內(nèi)酯等活性成分，具有擴(kuò)張血管、改善血管機(jī)能、促進(jìn)血液循環(huán)和代謝、保護(hù)機(jī)體組織和抗氧化等作用[2]。通過(guò)采用常壓密閉缺氧造成小鼠腦缺氧模型，研究銀杏葉提取物對(duì)腦缺氧保護(hù)作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)昆明 (KM)種小鼠，雌雄兼用，體重(20±2)g，由延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 (許可證號(hào)SCXK吉2011－007)。

1.2 藥品及試劑 銀杏葉提取物由延邊大學(xué)醫(yī)藥研究中心提供批號(hào):20110702。丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)測(cè)定試劑盒 (南京建成生物工程研究所批號(hào)分別為:20120401;20120327)。其余試劑均為分析純。

1.3 儀器設(shè)備 Backman高速冷凍離心機(jī) (德國(guó));SUNRISE酶標(biāo)儀 (上海金鴛醫(yī)療器械有限公司)。

2 方法

2.1 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 小鼠24只，隨機(jī)分為3組:生理鹽水組、銀杏提取物大、小劑量組，每組8只，連續(xù)灌胃14天，每日1次。每組于末次給藥后1h，將小鼠置于放入10g鈉石灰的125ml廣口瓶中密閉，造成小鼠腦缺氧模型，觀察各組小鼠存活時(shí)間。

2.2 生化指標(biāo)的測(cè)定 另取32只小鼠隨機(jī)分為4組，空白對(duì)照組，生理鹽水組，銀杏提取物大 (100mg/kg)、小(50mg/kg)劑量組，每組8只。除了空白組外，灌胃給藥或同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天，每天1次。于末次給藥后1h后，小鼠置于盛有10g鈉石灰的125ml廣口瓶中，密閉缺氧10min后，取出小鼠立即取血處死，分離血清備用。按試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定血清中的MDA、NO水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS17.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間差異比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠常壓密閉缺氧存活時(shí)間的影響 由表1可知，不同劑量的銀杏葉提取物均能顯著延長(zhǎng)小鼠在密閉缺氧條件下的存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有顯著性差異 (P＜0.05;P ＜0.01)。

表1 銀杏葉提取物對(duì)小鼠常壓耐缺氧存活時(shí)間的影響(n=8，±s)

表1 銀杏葉提取物對(duì)小鼠常壓耐缺氧存活時(shí)間的影響(n=8，±s)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量 (mg/kg) 存活時(shí)間 (min)延長(zhǎng)率 (%)25.78±3.15 －銀杏提取物組 50 29.63±3.85* 14.93 100 32.25±4.17＊＊生理鹽水組 －25.10

3.2 對(duì)小鼠腦組織中MDA、NO水平的影響 由表2可知，與正常空白對(duì)照組相比，生理鹽水組MDA、NO的水平顯著增加 (P＜0.01)。不同劑量的銀杏葉提取物與生理鹽水組相比，均能抑制密閉缺氧小鼠血清中MDA、NO水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)?！纒)

表2 銀杏提取物對(duì)小鼠血清中MDA、NO水平的影響(n﹦8，

4 討論

常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)為抗整體小鼠缺氧實(shí)驗(yàn)，是篩選治療心腦組織因缺血缺氧引起功能障礙的常用方法之一。常壓密閉缺氧最終導(dǎo)致小鼠心臟和腦缺氧而死亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:銀杏葉提取物能顯著提高小鼠的常壓耐缺氧存活時(shí)間，說(shuō)明銀杏葉提取物對(duì)腦缺氧有很好的改善作用。

自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，MDA是過(guò)氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，生物體內(nèi)MDA含量越高，表明氧自由基損傷越重，對(duì)臟器、組織細(xì)胞的毒性越大[3]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下血清中MDA含量與正常空白對(duì)照組比較差異顯著，說(shuō)明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物的形成明顯增加。而給予銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中MDA水平，表明銀杏葉可顯著降低機(jī)體中脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。

另外，NO作為一種神經(jīng)遞質(zhì)在缺氧缺血性腦損傷中日益受到重視。NO既是體內(nèi)一種不可缺少的信息分子，又具有細(xì)胞毒作用，可以通過(guò)毒性作用、自由基損傷而加重腦缺氧缺血性腦損傷[4]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下小鼠血清中NO含量顯著高于空白對(duì)照組，說(shuō)明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)NO合成明顯增加，而銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中NO水平，說(shuō)明銀杏葉能有效的抑制小鼠體內(nèi)NO合成，減輕對(duì)臟器、組織細(xì)胞的毒性，從而發(fā)揮對(duì)腦缺氧的保護(hù)作用。

[1]程玉芳，柳巨雄，欒新紅，等.中藥復(fù)方制劑對(duì)大鼠耐缺氧能力的影響及其作用機(jī)制的研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2003，22(6):3－5.

[2]陳仕奇，陳龍浩，蔣琳蘭.銀杏葉提取物和茶多酚聯(lián)用對(duì)缺氧環(huán)境中內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(23):11549－11550.

[3]Dillioglugil MO，Kira HM，Demira C，et al.Effect of pentylenetetrazole and sound stimulation induced single and repeated convulsive seizures on the MDA，GSH and NO levels，and SOD activities in rat liver and kidney tissues [J].Brain Research Bulletin，2010，83(2):356－359.

[4]王建平，蘇怡凡，陳虹.一氧化氮、一氧化氮合酶、丙二醛在新生兒缺氧缺血性腦病中的作用[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2003，18(8):627－628.