流行性出血熱發(fā)熱期外周血T淋巴細(xì)胞亞群與血小板的檢測(cè)

溫麗麗，李金明

(南昌市第九醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330002)

流行性出血熱 (epidemic hemorrhagic fever，EHF)亦稱(chēng)腎綜合征出血熱。是由漢坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性傳染病，病情危急，并發(fā)癥多，病死率高。其主要病理變化表現(xiàn)為全身廣泛性的小血管和毛細(xì)血管的損害[1]。漢坦病毒是本病發(fā)病的始動(dòng)因子。一方面病毒感染能導(dǎo)致細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)的損害;另一方面病毒感染誘發(fā)人體的免疫應(yīng)答和各種細(xì)胞因子的釋放，既能清除病毒，保護(hù)機(jī)體，但又能引起機(jī)體組織的損傷[2]。EHF臨床的主要癥狀是發(fā)熱、出血、腎臟損害，典型病例的病期表現(xiàn)為五期，即發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期。發(fā)熱是EHF早期診斷的參考指標(biāo)[3],所以本文針對(duì)發(fā)熱期EHF患者，通過(guò)流式細(xì)胞儀和全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀來(lái)檢測(cè)樣本T淋巴細(xì)胞亞群和PLT，觀(guān)察其變化并分析其臨床參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 實(shí)驗(yàn)組：60例EHF發(fā)熱期患者，均來(lái)自江西省南昌市第九醫(yī)院住院患者，依據(jù)EHF診斷標(biāo)準(zhǔn)WS 278-2008[4]，診斷為EHF。進(jìn)行抽血檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群和血小板計(jì)數(shù)，年齡5～77歲，男44例，女16例，平均年齡40.45歲。對(duì)照組60例健康體檢者，年齡 5～65歲，男46例，女 14例，平均年齡34.3歲。

1.2 儀器與試劑 血小板計(jì)數(shù)使用Sysmex公司全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀XT-2000i和其稀釋液，多項(xiàng)目溶血素。T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定使用的是美國(guó)BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀和BD公司的三色熒光單克隆抗體試劑CD3FITC/CD4PE/CD8PERCP。

1.3 檢測(cè)方法 血小板計(jì)數(shù)的檢測(cè)從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各采靜脈血2ml，放于含有EDTA-K2的抗凝管中混勻，直接在全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀上上樣。T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各采靜脈血2ml，放于含有EDTA-K2的抗凝管中混勻，取相應(yīng)的三色熒光標(biāo)記抗體10μl，放于流式細(xì)胞儀專(zhuān)用試管中，加入100μl抗凝血，混勻，室溫避光15min。加入免洗溶血素450μl，混勻，室溫避光15 min，用流式細(xì)胞儀上樣，MULTISET軟件自動(dòng)分析CD3+T淋巴細(xì)胞百分比，CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞百分比，CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分比和CD3+CD4+/CD3+CD8+比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，使用SPSSl2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間差異比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PLT與T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，發(fā)熱期的EHF患者實(shí)驗(yàn)組血小板在外周血計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組 PLT計(jì)數(shù)(58.7±24.6)×109/L與對(duì)照組PLT計(jì)數(shù)(208.9±44.3)×109/L差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。EHF患者實(shí)驗(yàn)組CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞明顯高于對(duì)照組 (P<0.01)，CD3+T實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組 (P<0.01)，CD3+CD4+T實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組 (P<0.01)，實(shí)驗(yàn)組CD4+T/CD8+T比值比例低于對(duì)照組(P<0.01),60例EHF患者實(shí)驗(yàn)組中100%的病人低于正常。

表1 EHF患者實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組外周血PLT、T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

EHF病原體為漢坦病毒，作為始動(dòng)因素導(dǎo)致感染器官的損害例如血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷、免疫應(yīng)答的誘發(fā)和各種細(xì)胞因子的釋放，既清除病毒，又引起機(jī)體組織損傷。EHF患者的發(fā)病機(jī)制與人體免疫應(yīng)答及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能密切相關(guān)。已有的研究結(jié)果表明：在發(fā)熱期間EHF患者PLT計(jì)數(shù)明顯低于健康的正常人，反映了EHF患者在發(fā)熱期間外周血中PLT破壞或消耗增加嚴(yán)重。由于病毒侵入機(jī)體，體液免疫亢進(jìn)，循環(huán)免疫復(fù)合物迅速形成，且沉積于血小板表面，導(dǎo)致血小板聚集和破壞，引起血小板銳減，病毒損害骨髓功能導(dǎo)致巨核細(xì)胞生成抑制[5]。所以PLT計(jì)數(shù)越低，有可能反映了體液免疫的亢進(jìn)程度和骨髓抑制的程度。在發(fā)熱期間EHF患者CD3+T淋巴細(xì)胞百分比，CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞百分比和CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均明顯低于健康的正常人，CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比明顯高于健康的正常人，反映了在發(fā)熱期間EHF患者機(jī)體細(xì)胞免疫呈應(yīng)激狀態(tài)，存在嚴(yán)重的細(xì)胞免疫功能低下。CD3+T淋巴細(xì)胞，即總T淋巴細(xì)胞是介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫，它的降低說(shuō)明EHF患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能方面的異常。CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞，即輔助/誘導(dǎo)性T淋巴細(xì)胞亞群，其主要功能是輔助和誘導(dǎo)其它免疫細(xì)胞，通過(guò)分泌的淋巴因子，增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的功效。CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞的明顯減少，即增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的功效減弱，必然導(dǎo)致免疫功能低下，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值變化與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)[6],比值越低，機(jī)體免疫功能越低。CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞，即抑制/細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞亞群，可特異性殺傷靶細(xì)胞，具有抗病毒、抗腫瘤和重要的調(diào)節(jié)作用.而CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比的顯著升高，雖具有清除病毒的作用。但其過(guò)度亢進(jìn)反而加劇了針對(duì)黏附有流行性出血熱病毒的細(xì)胞及組織的損傷，反而造成機(jī)體功能的紊亂。結(jié)果顯示EHF患者在發(fā)熱期間存在嚴(yán)重的免疫功能紊亂，其程度與CD3+CD4+/CD3+CD8+比值有關(guān)。EHF患者在早期的臨床診斷中，發(fā)熱是診斷的指標(biāo)之一，發(fā)熱病程均在3天以上，長(zhǎng)者達(dá)10天，且發(fā)生率達(dá)100%[7]。所以通過(guò)對(duì)EHF患者發(fā)熱期間所做的PLT和T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)分析有助于EHF患者能在早期確診并有助于臨床診療。綜上所述，血小板和T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在EHF患者發(fā)熱期的診療過(guò)程中有一定的參考價(jià)值，提示在診療過(guò)程中對(duì)體液和細(xì)胞免疫進(jìn)行觀(guān)察和調(diào)節(jié)有助于改善病情和縮短病程。

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