急性心肌梗死患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞相關(guān)研究

姜朝新，潘開拓，曾令恒，葉振望，王陳龍

（廣東省佛山市南海區(qū)第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 528244）

冠心病是當(dāng)今威脅人類健康的主要疾病之一，其中急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠心病中最為嚴(yán)重的一種［1］，由于其起病急，病死率高，更加受到重視。而內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs，即內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞）在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為內(nèi)皮細(xì)胞，在修復(fù)心肌缺血損傷方面發(fā)揮非常重要的作用，已成為近期的研究熱點(diǎn)。現(xiàn)將研究AMI患者120例外周血不同病變程度的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的變化等臨床應(yīng)用價(jià)值報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年6月至2012年12月南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院收治的住院AMI患者120例為AMI組，其中，男79例，女41例，年齡43～60歲，平均（51.6±8.6）歲；雙支病變38例，多支病變32例。選擇同期體檢的健康者20例作為對照組，其中，男12例，女8例，年齡41～59歲，平均（48.8±10.1）歲。本研究患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期有創(chuàng)傷、手術(shù)史、皮膚潰瘍、炎癥、腫瘤和血液系統(tǒng)疾病等患者。

1.2 方法 所有患者入院時(shí)采集外周血20mL，肝素抗凝，4h內(nèi)處理標(biāo)本，對照組清晨抽血，同樣處理。密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞，RMPI－1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，DiL－acLDL和FITC－UEA－I熒光雙染色法鑒定，雙染色陽性細(xì)胞為EPCs。同時(shí)采用貼壁法檢測其黏附，改良的Boyden小室檢測其遷移能力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，計(jì)量資料以表示，組間比較采用配對t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞形態(tài) 光學(xué)顯微鏡下觀察，對照組細(xì)胞變大變圓，出現(xiàn)較多的小桿形細(xì)胞和梭形細(xì)胞（圖1）。AMI組細(xì)胞數(shù)目較對照組明顯減少。

2.2 熒光雙染色細(xì)胞鑒定 AMI組患者內(nèi)皮祖細(xì)胞分離獲得的單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)7d后形成了梭形的內(nèi)皮樣細(xì)胞。用acLDL－DiL和UEA－I雙染色后，通過共聚焦顯微鏡鑒定，acLDL－DiL和UEA－I雙染色陽性細(xì)胞被認(rèn)為是正在分化的EPCs。

2.3 EPCs數(shù)量、集落形成單位及白細(xì)胞介素－18（IL－18）濃度AMI組患者的IL－18、集落數(shù)量與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。AMI組中EPCs數(shù)量與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 AMI患者治療不同病變程度EPCs數(shù)量、集落形成單位和IL－18濃度的變化

表1 AMI患者治療不同病變程度EPCs數(shù)量、集落形成單位和IL－18濃度的變化

＊：P＜0.05，與對照組比較。

組別 n EPCs數(shù)量 IL－18（pg／mL）20 57.1±2.1 20.5±9.7 31.10±1.90 AMI組單支病變 50 48.5±7.3 135.6±86.9＊ 15.60±4.79＊雙支病變 38 36.5±5.6 151.2±90.8＊ 12.14±7.31＊多支病變 32 18.9±3.9＊ 266.8±122.4＊ 8.00±4.80集落數(shù)量對照組＊

圖1 培養(yǎng)7d后EPCs數(shù)量及形態(tài)的變化影像學(xué)表現(xiàn)（光學(xué)顯微鏡，×200）

3 討 論

EPCs是一種多能干細(xì)胞，能循環(huán)、增殖并分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，但尚未表達(dá)成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的表面特征［2］。EPCs不僅參與人胚胎血管生成，還可以分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞參與出生后血管新生和內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過程［3－5］，EPCs可以遷移到損傷局部分化成成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞，還可以通過旁分泌機(jī)制分泌出血管生成的物質(zhì)［6］［如血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF），胰島素樣生長因子－1（insulin－like growth factors，IGF－1），堿 性 成 纖 維 細(xì) 胞 生 長 因 子 （basic fibroblast growth factor，bFGF）和鞏膜成纖維細(xì)胞（guinea pig scleral fibroblast，GSF）等］，從而促進(jìn)EPCs的增殖分化和促進(jìn)血管新生。多項(xiàng)研究表明AMI患者存在不同程度的內(nèi)皮損傷，損傷相關(guān)因子與修復(fù)相關(guān)因子呈動態(tài)的此消彼長狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者血清EPCs水平顯著低于健康對照組（P＜0.05），這與Eizawa等研究結(jié)果一致。崔斌等［7］研究發(fā)現(xiàn)，隨著冠狀動脈病變支數(shù)的增加，循環(huán)EPCs的水平逐漸降低，冠狀動脈病變（單支、雙支、3支）組循環(huán)EPCs水平均顯著低于對照組（P＜0.05），3支病變組EPCs水平明顯低于單支病變組（P＜0.05），與本研究結(jié)果一致。動脈粥樣硬化導(dǎo)致循環(huán)血中EPCs數(shù)量功能改變的機(jī)制可能包括以下幾種途徑：（1）形成動脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素可增強(qiáng)氧化應(yīng)激，直接影響EPCs的動員或生存時(shí)間；（2）由于EPCs參與內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過程，持續(xù)的內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮功能障礙可導(dǎo)致EPCs過量消耗甚至衰竭；（3）動脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素可能會通過抑制其促進(jìn)因子的分泌［如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte－macrophage colony－stimulating factor，GM－CSF）、VEGF、bFGF等］，同時(shí)動員其抑制因子的合成，從而抑制骨髓EPCs的動員作用而間接減少EPCs數(shù)量；（4）冠心病的危險(xiǎn)因素?？赏ㄟ^影響其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而調(diào)節(jié)EPCs的分化和動員。內(nèi)皮功能障礙的本質(zhì)是內(nèi)皮損傷和修復(fù)之間動態(tài)平衡的破壞，EPCs是修復(fù)損傷血管的細(xì)胞庫，EPCs在血管修復(fù)和維持內(nèi)皮功能完整中具有重要作用。因此，EPCs可作為了解血管功能和血管危險(xiǎn)因素的一個(gè)生物學(xué)指標(biāo)。

近年來，有研究認(rèn)為，動脈粥樣硬化與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制與炎癥的機(jī)制存在較多相似乎之處［8］。IL－18作為重要的促炎性細(xì)胞因子，在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生、發(fā)展及粥樣斑塊破裂的過程中起重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，冠狀動脈粥樣硬化斑塊處多種促炎性細(xì)胞因子顯著增加，表明其可能對斑塊形成有一定的作用。本研究也得到同樣結(jié)果。并且本研究發(fā)現(xiàn)EPCs和IL－18與AMI病變程度相關(guān)，同時(shí)二者之間顯著負(fù)相關(guān)。由此可見，對AMI患者而言，隨著炎癥反應(yīng)不斷增強(qiáng)，損傷因子——促炎性細(xì)胞因子表達(dá)上升，而修復(fù)因子——EPCs大量消耗，造成血管損傷進(jìn)一步加重。目前，許多研究結(jié)果表明心肌梗死后脂質(zhì)代謝異常，細(xì)胞因子過度表達(dá)，血管緊張素和醛固酮過度激活等與心肌梗死后心室重塑有密切的關(guān)系，且均能抑制心臟功能［9－12］。因此，早期診斷其損傷程度并采取適當(dāng)干預(yù)措施將有利于病情好轉(zhuǎn)或延緩其迅速惡化［13－16］。所以，EPCs和IL－18的監(jiān) 測 在 AMI患者早 期 診斷、治療和預(yù)后判斷中有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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